NAMA : ANDI RISMAYANTI

NIM : R252310366

Kloning gen aalah proses menggabungkan dua gen atau lebih dari individu yang
berbeda untuk menghasilkan sifat baru. Adapun tahap pemilihan gen pada sel bakteri
meliputi:
 Pemilihan dan penyiapan gen pengkode
 penyisipan plasmid
 penyisipan gen kedalam plasmid sehingga terbentuk plasmid rekombinan
 pemilihan sel inang
 transformasi plasmid rekombinan kedalam sel inag
 karakterisasi hasil rekombinan

Pada pemilihan gen penyandi protein digunakan untuk pengobatan manusia dimana
gen pengkode protein manusia walaupun gen yang berasal bukan dari manusia dapat
juga digunakan, tapi harus dibuktikan terlebih dahulu aman bagi manusia (klinis).
Gen penyandi didapatkan dengan cara memotong gen dengan enzim restriksindan bisa
menggunaka PCR. Komponen plasmid sendiri teridi dari MCS fungsinya untuk
tempat menyisipkan gen penyandi, ORI sebagai urutan nukleotida spesifik sebagai
tempat dimulainya replikasi dan MARKA SELEKSI untuk menyeleksi plasmid
rekombinan. Contoh sel inang yang telah banyak digunakan untuk kloning
Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae, Hamster Ovary. Sedangkan untuk contoh
plasmid yang digunakan yaitu pBAM1 4384bp; pGEX-3X 4952bp; pGME-T 3003bp.

Salah satu tujuan kloning adalah untuk menghasilkan protein, dimana protein yang
dihasilkan disebut rekombinan. Fungsi dari protien rekombinan yaitu sebagai
diagnosis dan sebagai pengobatan atau terapi penyakit. Pada pemilihan sistem
ekspresi ada 2 pertimbangan yaitu pada aplikasi seperti terapi, diagnosis, dan enzim;
pada karakter protein. Pada produksi protein rekombinan digungan E.coli karena
bakteri ini mudah ditumbuhkan dan waktun generasinya cepat.
Tahapan umum metode isolasi protein rekombinan intrasel dan ekstrasel dari sel
bakteri . Dimana sel bakteri ini terdiri dari protein intraseluler dan ekstraseluler
kemudian dilakukan sentrifugasi pallet selnya diambil, dan pada protein intraseluler
akan terjadi pemechan sel, kemudian di sentrifugasi diambil supernatantnya, pada
protein ekstraseluler protein bergabung dengan media, setelah proses tersbut
selanjuttnya proses pemekatan protein dimana pada pemekatan protein ini mencakup
pengendapan yang didalamnya terjadi proses salting in dam salting out dan dialisis
dimana larutan protein dimasukkan kedalam kantong membran berpori(selofan) ,
kemudan tahap terakhirnada pemurnian

Adapun tahapan produksi rekombinan sebagai berikut:

 isolasi gen sisipan
 Penyisipan ke vektor kloning
 Sub kloning kenvektor ekspresi
 Transformasi, dimana protein rekombinan dinproduksi dalam sel
 Isolasi protein rekombinan
 Pemurnian
 Karakterisasi
 Produksi skala besar
 Formulasi