LABORATORIUM KIMIA FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUSLIM INDONESIA

LAPORAN PRAKTIKUM

“ KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis”

OLEH:

NAMA : ANDI RISMAYANTI

STAMBUK : 15020180125

KELAS/ KLP : C7/C8/ I (SATU)

ASISTEN : Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUSLIM INDONESIA

MAKASSAR

2020
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis
BAB 1
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Pada praktikum kali ini akan dilakukan kalibrasi agar dapat
memahami bagaimana cara atau melakukan kalibrasi pada suatu alat
instrumen, pada percobaan kali ini akan dilakukan kalibrasi pada alat
instrument Spektrofotometer UV-Vis. Dimana spektrofotometer UV ini
digunakan untuk pengukuran harus dikalibrasi dengan baik terhadap
skala panjang gelombang dan absorbansinya, serta pengecekan
terhadap resolusi spekra dan adanya penyesatan sinar (stray
radiation).
Kalibrasi adalah menentukan kebenaran nilai yang ditunjukkan
oleh sebuah alat ukur dan bahan ukur dengan cara
membandingkannya dengan standar ukur yang mempunyai
ketertelusuran kepada standar nasional dan atau internasional.
Manfaat dari kalibrasi dapat diketahu seberapa jauh perbedaan
(penyimpangan) antara harga benar dengan harga yang ditunjukkan
oleh alat ukur dan juga untuk mendukung system mutu yang
diterapkan diberbagai industry pada peralatan laboratorium dan
produksi yang dimiliki. Interval kalibrasi juga harus dilakukan secara
periodik pada selang waktu kalibrasi dipengaruhi jenis alat ukur,
frekuensi pemakaian, dan pemeliharaaan.
Prosedur analisis harus memenuhi syarat ketepatan, ketelitian,
dan selektifitas sesuai dengan metode resmi dalam Farmakope
Indonesia. Dan juga termasuk dengan penggunaan alat dan bahan
untuk analisis harus dilakukan kalibrasi (standardisasi) agar
memenuhi syarat ketepatan, ketelitian dan selektifitas. Peralatan
dalam analisis farmasi meliputi instrumen analisis, alat-alat ukur,
wadah dan lain sebagainya. Bahan-bahan yang digunakan terdiri dari
bahan baku (senyawa murni), pereaksi dan sampel.

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis
1.2 Maksud Percobaan
Adapun maksud dari percobaan ini adalah untuk memahami
prinsip dan kegunaan kalibrasi dan juga memahami cara melakukan
kalibrasi spektrofotometer UV-Vis
1.3 Tujuan Percobaan
Adapun tujuan dari percobaan ini adalah untuk mempraktekkan
bagaimana cara melakukan kalibrasi spektrofotometer UV-Vis

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Teori Umum

Spektrofotometri merupakan salah satu cabang analisis
instrumental yang mempelajari interaksi anatara atom atau molekul
dengan radiasi elektromagnetik. Interaksi antara atom atau molekul
dengan radiasi elektromagnetik dapat berupa hamburan (scattering),
absorpsi (absorption), emisi (emission). Interaksi antara radiasi
elektromagnetik dengan atom atau molekul yang berupa absorbsi
melahirkan spektrofotometri absorpsi antara lain spektrofotometri
ultraviolet (UV), spektrofotometri sinar tampak (VIS), spektofotometri
infra merah (IR) (Hardjadi, 1990).
Spektrofotometer menghasilkan sinar dan spektrum dengan
panjang gelombang tertentu dan fotometer adalah alat pengukur
intensitas cahaya yang ditransmisikan atau diabsorbsi. Kebetulan
spektrofotometer dibandingkan dengan fotometer adalah panjang
gelombang dari sinar putih dapat lebih terseleksi dan ini diperoleh
dengan alat pengurai seperti prisma, grating, atau celah optis. Pada
fotometer filter dari berbagai warna yang mempunyai spesifikasi
melewatkan trayek panjang gelombang tertentu. Pada fotometer filter
tidak mungkin diperoleh panjang gelombang 30-40 nm. Sedangkan
pada spektrofotometer, panjang gelombang yang benar-benar
terseleksi dapat diperoleh dengan bantuan alat pengurai cahaya
seperti prisma. Suatu spektrofotometer tersusun dari sumber
spektrum tampak yang kontinyu, monokromator, sel pengabsorbsi
untuk larutan sampel blanko dan suatu alat untuk mengukur
perbedaan absorbsi antara sampel dan blanko ataupun pembanding
(Khopkar, 2003).
Spektrofotometri ultra violet yang dipakai untuk aplikasi
kuantitatif menggunakan radiasi dengan panjang gelombang 200-380
nm, sedangkan spektrofotometri sinar tampak menggunakan reaksi

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis
dengan panjang gelombang 380-780 nm. Molekul yang dapat
memberikan absorbsi yang bermakna pada panjang gelombang 200-
780 nm adalah molekul-molekul yang mempunyai gugus kromofor dan
gugus auksokrom. Spektrofotometer UV-VIS banyak dimanfaatkan
seperti dalam analisis logam berbahaya dalam sampel pangan atau
bahan yang sering digunakan dalam kehidupan. Air merupakan salah
satu kebutuhan yang luas oleh masyarakat. Beragam sumber air yang
digunakan dalam keseharian. Salah satu sumbernya ialah air sumur.
Kandungan dalam air sangat mempengaruhi kesehatan masyarakat
yang menggunakannya. Spektrofotometer UV-Vis merupakan alat
dengan teknik spektrofotometer pada daerah ultra-violet dan sinar
tampak. Alat ini digunakan guna mengukur serapan sinar ultra violet
atau sinar tampak oleh suatu materi dalam bentuk larutan.
Konsentrasi larutan yang dianalisis sebanding dengan jumlah sinar
yang diserap oleh zat yang terdapat dalam larutan tersebut.
Spektrofotometri UV-Vis merupakan alat dengan teknik
spektrofotometer pada daerah ultra-violet dan sinar tampak. Alat ini
digunakan mengukur serapan sinar ultra violet atau sinar tampak oleh
suatu materi dalam bentuk larutan. Konsentrasi larutan yang dianalisis
sebanding dengan jumlah sinar yang diserap oleh zat yang terdapat
dalam larutan tersebut. Dalam hal ini, hukum Lamber beer dapat
menyatakan hubungan antara serapan cahaya dengan konsentrasi
zat dalam larutan (Khopkar, 2003).
Kalibrasi adalah memastikan memastikan kebenaran nilai-
nilai yang ditunjukkan oleh instrumen ukur atau sistem pengukuran
atau nilai-nilai yang diabadikan pada sutu bahan ukur dengan cara
membandingkan dengan nilai konvensional yang diwakili oleh standar
ukur yang memiliki kemampuan telusur kestandart nasional atau
internasional. Dengan kata lain, kalibrasi adalah suatu kegiatan untuk
menetukan kebenaran konvensional penunjukkan alat pengujian dan
alat pengukuran ( Achmad, 2007).

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis
Kesalahan sistemik dapat disebabkan oleh kesalahan dalam
peneraan (kalibrasi) instrumen ukur, kesalahan akibat pengaruh
cuaca lingkungan, atau alat tidak dapat bekerja secara konsisten
sehingga hasil pengukuran tidak sama dengan nilai yang tertulis
dalam literatur pembanding (Yulianto, 2008).
Kalibrasi biasanya dilakukan dengan membandingkan suatu
standar yang terhubung dengan standar nasional maupun
internasional dan bahan-bahan acuan tersertifikasi .Pengukuran
merupakan suatu kegiatan membandingkan antara objek ukur dengan
alat ukur ,sehingga dapat besaran yang didapatkan dari suatu
pengukuran dapat diwakili dalam bentuk angka-angka yang dapat
memudahkan pemgamatan dan pengolahan lebih lanjut (Morris,2006)
Identitas bahan yang dimaksudkan untuk menggantikan
bahan pembanding yang sudah baku yang memiliki struktur molekul
dasar yang sama dapat dibuktikan dengan menggunakan uji yang
mampu menunjukkan bahwa karakteristik sifat kedua spesimen
tersebut identik. Untuk tujuan ini, pembandingan baru yang akan
diajukan mengandung suatu senyawa yang strukturnya telah
terelusidasi dengan baik, identitas dapat dibuktikan dengan
mencocokkan spectrum inframerah bahan tersebut dengan senyawa
asli. Teknik yang sangat spesifik lainnya, seperti spektroskopi
resonansi magnet nuklir (Saidah, 2007).
2.2 Uraian Bahan
1. Asam Sulfat (Ditjen POM 1979, h.58)
Nama resmi : ACIDUM SULFURICUM
Nama lain : Asam sulfat
Rumus Molekul : H2SO4
Rumus Molekul :

Berat Molekul : 98,07

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis
Pemerian : Hablur atau hablur serbuk putih, tidak berbau,
rasa pahit.
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup
Kegunaan : Sebagai Pereaksi.
2. Kalium Bikromat (Ditjen POM 1979, h.690)
Nama Resmi : KALII BICROMAS
Nama Lain : Kalium bikromat
Rumus Molekul : K2Cr2O7
Berat Molekul : 294,192
Kandungan : Tidak lebih dari 99,8% K2Cr2O7
Pemerian : Hablur atau serbuk hablur; merah jingga
Kelarutan : Larut dalam air
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat
Kegunaan : Sebagai sampel

2.3 Prosedur Kerja (Anonim,2020)

Akurasi panjang gelombang
1. Disiapkan larutan 4% holmium oksida dalam 10% asam perklorat
dalam kuvet 1 cm
2. Diukur serapan larutan tersebut pada beberapa panjang
gelombang, yaitu mulai dari 241 nm – 640 nm dengan
pengulangan sampai 10 kali scan
3. Dicatat nilai-nilai serapan puncak panjang gelombang tersebut
dan dihitung simpangan deviasi dari masing-masing panjang
gelombang puncak
4. Kriteria Penerimaan
Kriteria penerimaan adalah sebesar ± 1 nm dalam kisaran UV
(200- 380 nm) dan ± 3 nm dalam kisaran Vis (380-800 nm).
Sebanyak ulangan 3 scanning dari suatu puncak yang sama
harus berada di sekitar ± 0,5 nm.

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis

Nilai Absorban
1. Disiapkan larutan kalium dikromat dengan konsentrasi 0,006% b/v
(60,06 mg/l) disiapkan dalam asam sulfat 0,05 M.
2. Diukur serapan larutan tersebut pada beberapa panjang
gelombang, yaitu mulai dari 235, 257, 313, dan 350 nm, dengan
larutan asam sulfat 0,05 M sebagai blangko
3. Dicatat nilai-nilai serapan dari panjang gelombang tersebut
4. Kriteria Penerimaan
Sebanyak 6 kali replikasi pengukuran larutan kalium dikromat
dengan konsentrasi 0,006% b/v pada panjang gelombang 235,
257, 313, dan 350 nm, nilai RSD-nya harus lebih kecil dari 0,5%.

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis
BAB 3

METODE KERJA

3.1 Alat Praktikum

Adapun alat yang digunakan pada praktikum ini adalah labu
ukur, gelas kimia, kuvet, Spektrofotometer Uv-Vis, timbangan analitik,
kertas timbangan, handscoon dan pipet volume.
3.2 Bahan Praktikum
Adapun bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah kalium
Bikromat, asam peklorat, holmium oksida dan aquadest.
3.3 Cara Kerja
1. Akurasi Fotometrik
a. Penyiapan larutan kalibrasi/larutan baku
1) Timbang 57 mg kalium Bikromat
2) Larutkan dalam 1 L pelarut asam peklorat sehingga diperoleh
konsentrasi 0.006% b/v
3) Selanjutnya dihitung absorbansi sampel
b. Pembacaan nilai absorban
1) Nyalakan spektrofotometer UV-vis
2) Masukkan blanko asam perklorat ke dalam kuvet lalu kuvet
dimasukkan ke dalam kompartemen.
3) Ukur absorbansi pada panjang gelombang 235 nm. Running.
Lakukan hingga 4 kali replikasi.
4) Setelah itu, masukkan larutan baku kalium dikromat 0.006%
b/v ke dalam kuvet. Pastikan bahwa sisa larutan yang terdapat
pada bagian luar kuvet telah dibersihkan.
5) Masukkan kuvet tersebut ke dalam kompartemen
spektrofotometer.
6) Ukur absorbansi pada panjang gelombang 235 nm. Running.
Lakukan hinnga 4 kali replikasi.
7) Catat hasil pengukuran dan hitung absorptivitasnya.

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis
8) Lakukan hal yang sama pada panjang gelombang 257 nm,
313 nm, dan 350 nm.
c. Kriteria penerimaan
Sebanyak 6 kali replikasi pengukuran larutan kalium dikromat
dengan konsentrasi 0,006% b/v pada panjang gelombang 235,
257, 313, dan 350 nm, nilai RSD-nya harus lebih kecil dari 0,5%.
2. Akurasi Panjang Gelombang
a. Nyalakan spektrofotometer UV-vis yang akan digunakan.
b. Atur panjang gelombang pada spectra, yaitu 200-700 nm, atau
sesuai dengan panjang gelombang yang dijadikan acuan.
Misalnya sertifikat kalibrasi.
c. Runing/jalankan spektrofotometer. Kemudian amati base line
pada spectra. Jika base linenya sudah bagus. Lakukan ke
langkah selanjutnya.
d. Siapkan larutan standar holmium oksida sebanyak 1 mL di dalam
kuvet.
e. Masukkan kuvet ke dalam kompartemen spektrofotometer lalu
running/jalankan. Hasil running akan menghasilkan puncak pada
spectra.
f. Amati panjang gelombang. Diharapkan puncak yang terbentuk
pada panjang gelobang sesuai dengan sertifikat kalibrasi.
g. Dari puncak spectra yang terbentuk, catat panjang gelobangnya.
Lalu bandingkan dengan acuan (misalnya: sertifikat kalibrasi).
h. Lakukan hal yang sama hingga 10 kali replikasi
i. Kriteria penerimaan akurasi panjang gelombang
Kriteria penerimaan adalah sebesar ± 1 nm dalam kisaran UV
(200-380 nm) dan ± 3 nm dalam kisaran Vis (380-800 nm).
Sebanyak ulangan 3 scanning dari suatu puncak yang sama
harus berada di sekitar ± 0,5 nm.

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis
BAB 4

HASIL DAN PEMBAHASAN

a. Hasil Praktikum
1. Hasil Pengukuran Panjang Gelombang
No Panjang Rata-rata Koreksi Ket
gelombang pembacaan
Baku Sesuai panjang
Sertifikat gelombang
(nm)

1 241,1 241.38 -0.28 masuk

toleransi

2 279,3 279.056 0.244 masuk

toleransi

3 287,6 287.43 0.17 masuk

toleransi

4 333,9 333.39 0.51 masuk

toleransi

5 360,9 360.46 0.44 masuk

toleransi

6 385,9 385.16 0.74 masuk

toleransi

7 418,7 418.32 0.38 masuk

toleransi

8 453,6 453.48 0.12 masuk

toleransi

9 460,1 460.059 0.041 masuk

toleransi

10 536,4 536.28 0.12 masuk

toleransi

11 637,7 637.65 0.05 masuk

toleransi

2. Akurasi Fotometrik

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis
a)Hasil pengukuran akurasi fotometrik

Panjan Rata-rata Absortivitas Toleransi Keterangan

g Nilai Spesifik
gelomb Absorban
ang
(nm)

235 0.74575 124.292 122.9 Masuk

sampai toleransi
126.2

257 0.8255 137.583 142.4 Tidak

sampai
145.7

313 0.2965 49.417 47.0 sampai Masuk

50.3 toleransi

350 0.614 102.333 104.9 Tidak

sampai
108.2

b) Data Pengukuran Akurasi Fotometrik

Panjang 1 2 3 4 Standar
RSD Ket
gelombang deviasi
(%)

235 0.0038 0.517 tidak

0.74 0.75 0.74 0.74 62 896
3 8 2

257 0.0052 0.637 tidak

0.25 0.82 0.82 0.83 6 179
7 3 1 3

313 0.0020 0.702

0.29 0.29 0.29 0.29 82 08 tidak
9 4 7 6

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis
350 0.0045 0.740
0.61 0.61 0.61 0.62 46 401 tidak
1 5

0.0033 0.003
430 0.96 0.96 0.96 0.96 04 421 memenuhi
6 8 8 1

b. Pembahasan
Pada prkali ini kita melakukan percobaan berhubungan dengan
proses kalibrasi dari spektrofotometer UV-Vis. Adapun tujuan
dilakukannya praktikum ini untuk mempraktekkan bagaimana cara
melakukan kalibrasi spektrofotometer UV-Vis. Spektrofotometer
merupakan alat yang biasanya digunakan dalam menganalisis suatu
sampel dengan prinsip kerja dari spektrofotometer adalah interaksi
sampel atau analit dengan radiasi elektromagnetik range panjang
gelombang dari sperktrofotometer UV-vis adalah 200-
800menurut ISO/IEC Guide 17025:2005  dan Vocabulary of
International Metrology (VIM) adalah serangkaian kegiatan yang
membentuk hubungan antara nilai yang ditunjukkan oleh instrumen
ukur atau sistem pengukuran, atau nilai yang diwakili oleh bahan ukur,
dengan nilai-nilai yang sudah diketahui yang berkaitan dari besaran
yang diukur dalam kondisi tertentu. Dengan kata lain, kalibrasi adalah
kegiatan untuk menentukan kebenaran konvensional nilai
penunjukkan alat ukur dan bahan ukur dengan cara membandingkan
terhadap standar ukur yang mamputelusur (traceable) ke standar
nasional untuk satuan ukuran dan/atau internasional.
Adapun parameter yang digunakan dalam percobaan adalah
akurasi panjang gelombang dan akurasi fotometrik, parameter yang
mengacu pada CPOB 2012. parameter-parameter kalibrasi
spektrofotometer UV-vis adalah nilai panjang gelombang dan serapan
Kedua parameter dilakukan setiap 6 bulan. Syarat keterimaan

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis
kalibrasi nilai absorbansi adalah nilai 𝐸1%. Sedangkan untuk kalibrasi
panjang gelombang, toleransi untuk syarat keterimaannya adalah
241±1 nm; 287.15±1 nm; dan 361.5±1 nm.
Adapun pengerjaannya yaitu alat spektrofotometer pertama
disiapkan dengan cara dinyalakan lalu kita melihat spectra pada layar
lalu kita mengatur range panjang gelombang 200-700, selajutnya lihat
baseline jika penampakan baseline garis lurus kita bisa memasukkan
holmium oksida ke dalam kompartemen, holmium oksida yang
digunakan adalah holmium oksida komersil, setelah dimasukkan kita
lihat peaknya pada spectra apakah sesuai dengan sertifikat yang
digunakan sebagai acuan proses pengukuran dilakukan dalam 10
replikasi. Adapun hasil yang diperoleh yaitu ada 11 peak hal ini sesuai
dengan peak standar dari holmium oksida, untuk nilai koreksi yang
diperoleh untuk rata-rata panjang gelombang 241.38 nm (peak 1)
adalah -0.28; rata-rata panjang gelombang 279.056 nm (peak 2)
adalah 0.244; rata-rata panjang gelombang 287.43 nm (peak 3)
adalah 0.17; rata-rata panjang gelombang 333.39 nm (peak 4)
adalah 0.51; rata-rata panjang gelombang 360.46 nm (peak 5)
adalah 0.44; rata-rata panjang gelombang 385.16 nm (peak 6)
adalah 0.74; rata-rata panjang gelombang 418.32 nm (peak 7)
adalah 0.38; rata-rata panjang gelombang 453.48 nm (peak 8)
adalah 0.12; rata-rata panjang gelombang 460.059 nm (peak 9)
adalah 0.041; rata-rata panjang gelombang 536.28 nm (peak 10)
adalah 0.12; rata-rata panjang gelombang 637.65 nm (peak 11)
adalah 0.05. Dimana syarat kerterterimaan untuk parameter panjang
gelombang adalah + 1 nm dalam kisaran UV (200-380) dan + 3 nm
untuk daerah visible sehingga dapat dilihat dari hasil spektrofotometer
UV-vis yang digunakan memenuhi syarat keterterimaan.
Selanjutnya adalah pengerjaan akurasi fotometrik, tujuan diukur
parameter ini adalah untuk mengetahui terjadi atau tidaknya
penyimpangn pembacaan absorbasi oleh alat spektrofotometer UV-

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis
vis. Pada percobaan ini digunakan kalium dikromat dengan
konsentrasi 0,006% b/v sebagai bahan standar dimana ia akan diukur
pada 5 panjang gelombang, proses pengerjaan diawali dengan
melarutkan kalium dikromat hingga konsentrasinya 0,006% dalam
asam sulfat 0,05 M, setelah itu kita siapkan alat spektrofotometer UV-
vis, pengukuran dilakukan pada panjang gelombang 235 nm, 257 nm,
313 nm, 350 nm, 430 nm masukkan blangko terlebih dahulu untuk
diukur setelah itu kita keluarkan blangko dan siapkan kalium dikromat
yang akan diukur dalam spektrofotometer UV-vis. Setelah dilakukan
adapun hasil yang diperoleh untuk nilai %RSD untuk 235 nm adalah
0.517896 %, 257 nm adalah 0.637179 %, 313 nm adalah 0.70208 %,
350 nm adalah 0.740401 %, 430 nm 0.003421 % dapat disimpulkan
bahwa hanya pada panjang gelombang 430 %RSD nya yang
memenuhi syarat dimana syaratnya adalah harus lebih kecil dari 0,5
%. Untuk absortivitas spesifiknya diperoleh 235 nm adalah 124.292,
257 nm adalah 137.583, 313 nm adalah 49.417, 350 nm adalah
102.333 dimana untuk panjang gelombang 235 nm dan 313 nm
masuk range toleransi sedangkan untuk 257 nm dan 350 nm tidak
masuk range, adapun range toleransinya yaitu 235 nm 122.9 sampai
126.2; untuk 257 nm 142.4 sampai 145.7; untuk 313 nm 47.0 sampai
50.3 ; untuk 350 nm 104.9 sampai 108.2. Hal ini menunjukkan bahwa
alat kualitas akurasi fotometriknya tidak bagus untuk digunkan untuk
melakukan pengukuran atau analisis.

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis
DAFTAR PUSTAKA

Harjadi, W. 1990. Ilmu Kimia Analitik Dasar. PT Gramedia. Jakarta.

Khopkar, S.M. 2003. Konsep Dasar Kimia Analitik. Universitas Indonesia
Press. Jakarta.

Anonim., 2015, Penuntun Praktikum Analisis Instrumen (analisis Kualitatif

dan Kuantitatif), Fakultas Farmasi, Makassar.

Achmad, Kukuh. S., 2007, Validasi Metode Uji, Pusat Standarisasi dan

Akreditasi Laboratorium BSN,  Jakarta.

Morris, AlanS., 2006, Measurement and Instrumentation Principles,

Butterworth Heineman.
Saidah, Rina., 2007, Pemastian Mutu Obat Kompendium Pedoman dan
bahan bahan terkait vol 2, EGC, Jakarta
Yulianto, Widi., 2008, Apl Autocad untuk Pemetaan, PT, Media
Komputindo, Jakarta.

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis
LAMPIRAN
1. Akurasi Panjang Gelombang
a. Data dan Informasi
1. Larutan yang diukur Holium Oksida

2. Range panjang
gelombang 200-700

3. Replikasi 10 replikasi

4. Kriteria penerimaan
untuk daerah UV ±1 nm

5. Kriteria penerimaan
untuk daerah visible ± 3 nm

6. Syarat 3 pengulangan
pengukuran pada Suatu puncak yang sama harus
puncak yang sama berada disekitar ±0,5 nm

b. Data Pengukuran Panjang Gelombang

Stan
Panjang dar
gelomba Hasil Pengukuran Panjang Gelombang (nm)
Devi
No ng Baku asi
Sesuai
Sertifikat
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

24
24 24 24 24 24 24 24 241 24 0.07
1 241,1 1,
1,3 1,5 1,3 1,3 1,4 1,4 1,3 ,4 1,4 8881
5

27 27 27 27 27 27 27 27 27
279 0.00
2 279,3 9,0 9, 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0
,06 6992
5 05 5 6 5 6 6 7 5

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis

28
28 28 28 28 28 28 28 287 28 0.13
3 287,6 7,
7,4 7,3 7,3 7,3 7,4 7,4 7,6 ,7 7,5 3749
4

33
33 33 33 33 33 33 33 333 33 0.26
4 333,9 3,
3,2 3,8 3,2 3,2 3,1 3,1 3,5 ,5 3,5 8535
8

36 36
36 36 36 36 36 36 36 360 0.28
5 360,9 0, 0,1
0,1 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 ,9 7518
2 0

38
38 38 38 38 38 38 38 386 38 0.05
6 385,9 5,
5,1 5,1 5,1 5,2 6,2 6,2 6,2 ,2 6,2 164
1

41
41 41 41 41 41 41 41 418 41 0.10
7 418,7 8,
8,4 8,4 8,5 8,3 8,3 8,3 8,2 ,2 8,2 328
4

45
45 45 45 45 45 45 45 453 45 0.16
8 453,6 3,
3,6 3,6 3,6 3,4 3,4 3,2 3,2 ,6 3,6 8655
6

46 46
46 46 46 46 46 46 46 460 0.06
9 460,1 0,1 0,1
0,1 0 0 0 0 0,1 0 ,12 3325
4 3

53
53 53 53 53 53 53 53 536 53 0.13
10 536,4 6,
6,3 6,1 6,4 6,4 6,4 6,4 6,4 ,4 6,4 9841
1

63 63 63 63 63 63 63 63 63
637
11 637,7 7,6 7, 7,6 7,6 7,6 7,6 7,6 7,6 7,6 0
,65
5 65 5 5 5 5 5 5 5

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis

Perhitungan Standar Deviasi :

Rumus standar Deviasi :

∑ (X i − X́ )
SD=
√ n−1

Contoh perhitungan Standar Deviasi Peak 1 :

2 2 2 2 2 2
√ ( 241.3−241.38 ) +( 241.5−241.38 ) +( 241.5−241.38 ) + ( 241.3−241.38 ) + ( 241.3−241.38 ) +( 241.4−241.38 ) +
0.0064+0.0144+ 0.0144+0.0064 +0.0064+ 0.0004+0.0004+ 0.0064+0.0004 +0.0004
√ 9

= 0.078881

c. Hasil Pengukuran Panjang Gelombang

No Panjang Rata-rata Koreksi Ket

gelombang pembacaan
Baku Sesuai panjang
Sertifikat gelombang
(nm)

1 masuk
241,1 241.38 -0.28
toleransi

2 masuk
279,3 279.056 0.244
toleransi

3 masuk
287,6 287.43 0.17
toleransi

4 masuk
333,9 333.39 0.51
toleransi

5 masuk
360,9 360.46 0.44
toleransi

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis

6 masuk
385,9 385.16 0.74
toleransi

7 masuk
418,7 418.32 0.38
toleransi

8 masuk
453,6 453.48 0.12
toleransi

9 masuk
460,1 460.059 0.041
toleransi

10 masuk
536,4 536.28 0.12
toleransi

11 masuk
637,7 637.65 0.05
toleransi

Keterangan : masuk toleransi/tidak masuk toleransi

2. Akurasi Fotometrik/Absorban

a. Data dan Informasi

Larutan yang diukur Kalium dikromat

Blanko Asam perklorat

Pengukuran 1 pada 235 nm

panjang gelombang

Pengukuran 2 pada 257 nm

panjang gelombang

Pengukuran 3 pada 313 nm

panjang gelombang

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis

Pengukuran 4 pada 350 nm

panjang gelombang

Syarat Keterterimaan Memiliki 5 peak yang sesuai, atau

Absorbansi sesuai dengan acuan. Misalnya
sertifikat kalibrasi

Syarat Keterterimaan
Akurasi RSD harus lebih kecil dari 0.5%

b. Data Pengukuran Akurasi akurasi Fotometri

Panjang 1 2 3 4 Standar
RSD Ket
gelombang deviasi
(%)

0.0038 0.517
235 0.74 0.74 0.74 tidak
0.75 62 896
3 8 2

0.0052 0.637
257 0.25 0.82 0.82 0.83 tidak
6 179
7 3 1 3

0.0020 0.702
313 0.29 0.29 0.29 0.29 82 08 tidak
9 4 7 6

0.0045 0.740
350 0.61 0.61
0.61 0.62 46 401 tidak
1 5

0.0033 0.003
0.96 0.96 0.96 0.96
430 04 421 memenuhi
6 8 8 1

Keterangan : Memenuhi keterteriman akurasi atau tidak

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125
 KALIBRASI SPEKTROFOTOMETER UV-Vis

c. Hasil pengukuran akurasi fotometri

Panjang Rata-rata Absortivitas Toleransi Keterangan

gelombang Nilai Spesifik
(nm) Absorban

122.9
Masuk
235 0.74575 124.292 sampai
toleransi
126.2

142.4
257 0.8255 137.583 sampai Tidak
145.7

47.0 sampai Masuk

313 0.2965 49.417
50.3 toleransi

104.9
350 0.614 102.333 sampai Tidak
108.2

Keterangan : masuk toleransi/tidak

ANDI RISMAYANTI Apt. Harti Widiastuti, S.Farm., M.Farm

15020180125