F LU O R E S E N S I A N T I B O D I

TES

Tugas Virologi

PENGERTIAN
Antibodi Fluorescent Teknik adalah alat diagnostik
di mana pewarna fluorescent ditambahkan ke
jaringan yang mengandung anti gen. Hasilnya
menyebabkan wilayah yang ditargetkan bersinar
dengan sinar ultraviolet bila dilihat dengan
mikroskop fluorescent.

LANJUTAN
Imunofluoresen adalah metode imunologi untuk
mendeteksi antibodi dari berbagai kelas
immunoglobulin dalam serum, cairan ludah, cairan otak
dengan cara mereaksikan antibody dan antigen spesifik
dan anti-antibodi yang dilabel denagan Fluoresence
Isothiocyanat (FITC), sehingga terpancar sinar warna
hijau atau merah jika di label dengan Rodhamin. Tetapi
dalam perkembangan sekarang imunofluoresen banyak
digunakan dalam penelitian untuk mendeteksi antigen
antigen atau antibody dalam mukosa usus, mukosa
mulut, dan dalam jaringan, urine, cairan mata.

SEJARAH
Fluorescent Antibody Technique (FAT) untuk penggunaan
didalam mikrobiologi telah diperlihatkan pertama kali oleh
Coons, at all pada tahun 1942. sebelumnya telah diperkenelka
penandaan protein antibodi dengan zat warna yang dapat
berfluoresensi.
Dan tes ini mulai diperkenalkan sejak tahun 1962 dalam bidang
pemeriksaan parasitologi dengan memakai tekhnik indirect
fluorescent antibody test. Tes ini berguna mendeteksi adanya
antibody specific terhadap malaria atau pada keadaan dimana
parasit sangat minimal. Tes ini kurang bermanfaat sebagai alat
diagnostic sebab antibody baru terjadi setelah beberapa hari
parasitemia. Manfaat tes serologi terutama untuk penelitian
epidemiologi atau alat uji saring donor darah.

MACAM-MACAM PEMERIKSAAN
P E M E R I K S A A N FA T ( I FA )
A. Antibodi Fluorescent Teknik, Langsung
B.Antibodi Fluorescent Teknik, tidak Langsung

A N T I B O D I F LU O R E S C E N T T E K N I K ,
LANGSUNG
Suatu bentuk teknik antibodi fluorescent
memanfaatkan terkonjugasi fluorochrome ke
antibodi, yang ditambahkan secara langsung ke
jaringan atau suspensi sel untuk mendeteksi antigen
tertentu. Atau dengan cara melabel langsung
antibodinya.

A N T I B O D I F LU O R E S C E N T T E K N I K ,
TIDAK LANGSUNG
Suatu bentuk teknik antibodi fluorescent yang biasa
digunakan untuk mendeteksi antibodi serum dan
kompleks imun pada jaringan dan mikroorganisme
dalam spesimen dari pasien dengan penyakit
menular. Teknik ini melibatkan pembentukan sebuah
kompleks antigen-antibodi yang diberi label dengan
fluorescein-conjugated anti-antibodi
immunoglobulin. Atau melalui perantara antibody
yang kedua dalam produk pasar dikenal dengan
Konjugat Imunoglobulin Fragment.

R E G E N S I A S E R TA A L AT D A N B A H A N YA N G
D I G U N A K A N D A L A M M E T O D E FA T ( I FA )

Deck glass
objek glas
serum sampel
antigen dari sel kultur atau antigen dari jaringan
Aceton
Feotal Calf Serum (FCS)
Phospat Buffer Saline (PBS)
Pinset
Gelas Inkubator
Kotak inkubator
Inkubator 37oC
Konjugat Fragmen immunoglobulin
Mikroskop Fluorescent
Rhodamin.

CARA PEMERIKSAAN

D I R E C T I M U N O F LU O R E S E N
(DETEKSI ANTIGEN)
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.

Sel pada deck cover glass yang diinfeksi dengan virus difiksasi dengan aceton-20oC selama 15
menit.
Cuci dengan PBS dan keringkan pada temperature ruangan sampai kering.
Masukan deck cover glass pada PBS yang mengandung 1%FCS dan biarkan 15 menit.
Siapkan serum sampel dan encerkan dengan PBS sesuai keperluan.
Teteskan 20l serum sampel di atas glass obyek.
Taruh deck cover glass di atas sampel dengan bagian sel di bawah dan letakkan dalam kotak dan
kertas yang telah dibasahi dengan air.
Inkubasi pada incubator denagan temperatur 37oC selama 45 menit.
Cuci dengan PBS 1%FCS selama 15 Menit.
Siapkan Konjugat fragmen Imunoglobulin dengan pengenceran 1:100l.
Teteskan Konjugat 20l di atas glas obyek dan letakkan deck cover glass di atasnya.
Inkubasi pada incubator dengan temperatur 37oC selama 15 menit
Cuci dengan PBS 1%FCS selama 15 menit dan selanjutnya angkat deck cover glass dan
sentuhkan deck cpver glass pada kertas tissue agar airnya berkurang, sehingga kering tapi basa.
Teteskan Glycerin 50% 20l di atas glass obyek dan selanjutnya deck cover glass di taruh
diatasnya dan langsung dilihat hasilnya dengan mikroskop fluorescent pada pembesaran 40x.
catatan preparat ini dapat disimpan pada 4oC sampai 2-3 minggu.

INDERICT IMUNOFLOUROSENSI
1.
2.
3.
4.
5.

Antigen mikroba diletakkan dalam kaca objek dan

diberi bahan fiksatif
Serum pasien yang telah diencerkan diinkubasi
bersama antigen pada kaca
objek, kemudian dicuci
Ditambahkan Antibodi berlabel flouresen (konjugat)
Kaca objek dicuci hemudian dikeringkan, kemudian
dibaca dibawah mikroskop flouresen
Preparat diamati adanya area terang berfloresensi
warna hijau dan dibandingkan dengan control positif
dan negatif. Adanya floresensi hijau menandakan
adanya antibodi terhadap antigen.

KELEMAHAN PEMERIKSAAN
A N T I B O D I F LU O R E S C E N T T E K N I K
Peralatan yang canggih dan mahal
Perlu tenga yang terlatih
Perhari maks 25 slide/analisa
Sukar dibuat otomatis
Pelaksanaan agak kompleks

TERIMA KASIH