PENGARUH PEMBERIAN AIR ALKALI DENGAN pH ALKALI

BERTINGKAT TERHADAP KADAR MDA (Malondialdehida)

SERUM PADA TIKUS (Rattus Norvegicus) JANTAN GALUR
WISTAR YANG DIPAPAR ASAP ROKOK

SKRIPSI

DINA FULAISIFA
179010026

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS WAHID HASYIM
2021
 LEMBAR PENGESAHAN HASIL SKRIPSI

Yang bertanda tangan dibawah ini menyatakan bahwa skripsi yang berjudul:

PENGARUH PEMBERIAN AIR ALKALI DENGAN pH ALKALI

BERTINGKAT TERHADAP KADAR MDA (Malondialdehida)
SERUM PADA TIKUS (Rattus Norvegicus) JANTAN GALUR
WISTAR YANG DIPAPAR ASAP ROKOK

Dipersiapkan dan disusun oleh:

Nama : DINA FULAISIFA
NIM : 179010026

Telah dipertahankan di depan dewan penguji pada tanggal 18 Februari 2021 dan
dinyatakan telah memenuhi syarat untuk diterima

ii
 PERNYATAAN KEASLIAN

Yang bertanda tangan dibawah ini,

Nama mahasiswa : Dina Fulaisifa

NIM : 179010026
Program Studi : Program Studi Kedokteran Fakultas Kedokteran
Universitas Wahid Hasyim
Judul Skripsi : Pengaruh Pemberian Air Alkali dengan pH Alkali
Bertingkat Terhadap Kadar MDA (Malondialdehida)
Serum Pada Tikus (Rattus Norvegicus) Jantan Galur
Wistar yang Dipapar Asap Rokok

Dengan ini menyatakan bahwa:

1) Skripsi ini ditulis sendiri tulisan asli saya sendiri tanpa bantuan orang lain
selain pembimbing dan narasumber yang diketahui oleh pembimbing.
2) Skripsi ini sebagian atau seluruhnya belum pernah dipublikasikan dalam
bentuk artikel ataupun tugas ilmiah lain di Universitas Wahid Hasyim
maupun di perguruan tinggi lain.
3) Dalam Skripsi ini tidak terdapat karya atau pendapat yang telah ditulis orang
lain kecuali secara tertulis dicantumkan sebagai rujukan dalam naskah dan
tercantum pada daftar kepustakaan.

Semarang, 5 Maret 2021

Yang membuat pernyataan,

iii
 KATA PENGANTAR

Puji syukur saya panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa, karena atas

berkat dan rahmat-Nya kami dapat menyelesaikan tugas Skripsi ini. Penulisan

Skripsi ini dilakukan dalam rangka memenuhi salah satu syarat untuk mencapai

gelar Sarjana Kedokteran di Fakultas Kedokteran Universitas Wahid Hasyim. Kami

menyadari sangatlah sulit bagi kami untuk menyelesaikan Skripsi ini tanpa bantuan

dan bimbingan dari berbagai pihak pada saat penyusunan Skripsi ini. Bersama ini

kami menyampaikan terima kasih yang sebesar-besarnya serta penghargaan yang

setinggi-tingginya kepada:

1. Prof. Dr. Mahmutarom HR. SH., MH. selaku Rektor Universitas Wahid

Hasyim Semarang yang telah memberi kesempatan kepada saya untuk

menimba ilmu di Universitas Wahid Hasyim.

2. dr. Sudaryanto, M.Pd.Ked selaku Dekan Fakultas Kedokteran Wahid

Hasyim Semarang yang telah memberikan sarana dan prasarana kepada

saya sehingga saya dapat menyelesaikan tugas ini dengan baik lancar.

3. dr. Dian Inayati, M.Kes selaku dosen pembimbing yang telah menyediakan

waktu, tenaga dan pikiran untuk membimbing saya dalam penyusunan

Karya Tulis Ilmiah ini.

4. Ibu Siti Nur Chasanah,S.Sc.,M.Msi selaku dosen penguji yang telah

bersedia menguji skripsi ini.

iv
5. Keluarga besar Soleh family yang selalu memberikan doa, nasehat,

semangat, dorongan baik moril maupun materil sehingga penulis dapat

menyelesaikan karya tulis ilmiah ini.

6. Serta pihak lain yang tidak mungkin kami sebutkan satu-persatu atas

bantuannya secara langsung maupun tidak langsung sehingga Skripsi ini

dapat terselesaikan dengan baik.

Akhir kata, kami berharap Tuhan Yang Maha Esa berkenan

membalas segala kebaikan semua pihak yang telah membantu. Semoga

Karya Tulis Ilmiah ini dapat bermanfaat bagi kita semua.

Semarang, 5 Maret 2021

Dina Fulaisifa

v
 DAFTAR ISI
HALAMAN COVER............................................................................................................i
LEMBAR PENGESAHAN .............................................................................................. ii
PERNYATAAN KEASLIAN .......................................................................................... iii
KATA PENGANTAR ......................................................................................................iv
DAFTAR ISI.....................................................................................................................vi
DAFTAR TABEL .......................................................................................................... viii
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................................ix
DAFTAR SINGKATAN ...................................................................................................x
DAFTAR LAMPIRAN .....................................................................................................xi
ABSTRAK ...................................................................................................................... xii
ABSTRACT................................................................................................................... xiii
BAB I PENDAHULUAN .................................................................................................1
1.1 Latar belakang ........................................................................................................1
1.2. Rumusan Masalah ..................................................................................................4
1.3. Tujuan penelitian ....................................................................................................5
1.3.1. Tujuan umum ..................................................................................................5
1.3.2. Tujuan khusus .................................................................................................5
1.4. Manfaat penelitian ..................................................................................................5
1.4.1. Manfaat bagi peneliti .......................................................................................5
1.4.2. Manfaat bagi masyarakat .................................................................................6
1.5. Orisinalitas .............................................................................................................6
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .......................................................................................8
2.1. Rokok .....................................................................................................................8
2.1.1. Definisi ............................................................................................................8
2.1.2. Kandungan Rokok ...........................................................................................9
2.1.3. Asap rokok terhadap kadar MDA .................................................................. 12
2.2. Malondialdehida (MDA) ...................................................................................... 17
2.2.1 Definisi .......................................................................................................... 17
2.2.2. MDA biomarker stress oksidatif .................................................................... 19
2.2.3. Mekanisme Pembentukan MDA................................................................... 21
2.3 Air Alkali ............................................................................................................. 25
2.3.1. Definisi ......................................................................................................... 25

vi
 2.3.2 Struktur dan Proses pembuatan alkali ........................................................... 27
2.3.3. Air Alkali sebagai antioksidan ..................................................................... 28
BAB III KERANGKA TEORI, KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS ................. 31
3.1. Kerangka teori ..................................................................................................... 31
3.2. Kerangka Konsep ................................................................................................ 32
3.3. Hipotesis ............................................................................................................. 32
BAB IV METODE PENELITIAN.................................................................................. 33
4.1. Ruang Lingkup Penelitian .................................................................................... 33
4.2. Tempat dan Waktu Penelitian .............................................................................. 33
4.2.1. Tempat Penelitian .......................................................................................... 33
4.2.2. Waktu Penelitian ........................................................................................... 33
4.3. Jenis dan Rancangan Penelitian ............................................................................ 33
4.4 Populasi dan Sampel ............................................................................................ 34
4.4.1 Populasi Penelitian ......................................................................................... 34
4.4.2 Sampel penelitian ........................................................................................... 34
4.5 Variabel Penelitian ............................................................................................... 36
4.6 Definisi operasional.............................................................................................. 36
4.7 Cara pengumpulan data ........................................................................................ 37
4.8 Alur Penelitian ..................................................................................................... 42
4.9 Analisis Data ........................................................................................................ 43
4.10. Jadwal Penelitian ................................................................................................. 44
BAB V HASIL PENELITIAN ......................................................................................... 45
5.1 Pengukuran pemberian air minum pada hewan uji ................................................. 45
5.2 Proses pembuatan supernatan MDA serum ............................................................ 46
5.3 Pengukuran MDA serum dengan spektrofotometri ................................................ 47
5.4 Analisa Data ........................................................................................................... 48
BAB VI PEMBAHASAN ............................................................................................... 51
BAB VII SIMPULAN DAN SARAN .............................................................................. 54
7.1 SIMPULAN ........................................................................................................... 54
7.2 SARAN .................................................................................................................. 54
DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................................... 55
LAMPIRAN..................................................................................................................... 56

vii
 DAFTAR TABEL

Tabel 1. Orisinalitas Penelitian .........................................................................................6

Tabel 2. Perbandingan potensial redoks pada tipe air hasil elektrolisis. .......................... 28
Tabel 3. Definisi operasional .......................................................................................... 36
Tabel 4. Jadwal Penelitian ............................................................................................... 44
Tabel 5. Pengukuran minum ad libitum .......................................................................... 46

viii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Pengaruh Asap Rokok Terhadap Pembentukan Radikal dan Penyakit

………… Aterotrombosis.. .................................................................................. 16
Gambar 2. Mekanisme Pembentukan MDA. ........................................................ 22
Gambar 3. Proses Reaksi MDA-TBA ................................................................... 23
Gambar 4. Gambaran Alat Tahapan Elektrolisis Air Alkali ................................. 27
Gambar 5. Kerangka Teori .................................................................................... 31
Gambar 6. Kerangka Konsep ................................................................................ 32
Gambar 7. Skema Rancangan Penelitian .............................................................. 34
Gambar 8. Alur Penelitian..................................................................................... 42

ix
 DAFTAR SINGKATAN

ATP : Adenosine triphosphate

BHA : Butyl hydroxyl anisole

BHT : Butyl hydroxyl toluene

CO : Carbon Monoxside

CO2 : Carbon Dioxside

COPD : Chronic obstructive pulmonary disease

DNA : Deoxyribonucleic acid

Hb : Hemoglobin

HPLC : High Performance Liqiud Chromatography

MDA : Malondialdehyde

O2 : Oksigen

ORP : Oxidation Reduction Potensial

pH : Power of hydrogen

PUFA : Polyunsaturated fatty acid

ROS : Reactive Oxygen Species

TBA : Thiobarbituric acid

TBARS : Thiobarbituric acid-reactive subtance

TCA : Trichloroacetic acid

WHO : World Health Organization

NO : Nitrit oxide

x
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 : Ethical clearance ....................................................................................... 56

Lampiran 2 : Surat Ijin Penelitian ................................................................................... 56
Lampiran 3 : Surat Ijin Penelitian ................................................................................... 56
Lampiran 4 : Determinasi hewan .................................................................................... 56
Lampiran 5 : Hasil pemeriksaan MDA dengan spektrofotometer ................................... 56
Lampiran 6 : Hasil Analisis SPSS ................................................................................... 56
Lampiran 7 : Dokumentasi penelitian ............................................................................. 56
Lampiran 8 : Biodata diri ................................................................................................ 56

xi
 ABSTRAK

Latar Belakang Kadar radikal bebas yang tinggi dari asap rokok memicu reaksi
stress oksidatif yang mendasari terjadinya penyakit jangka panjang akibat radikal
bebas. Radikal bebas didalam tubuh bisa dihentikan laju nya dengan meningkatkan
antioksidan. Air alkali adalah antioksidan alami yang di dapat dari proses
elektrolisis dengan meningkatkan potensial reduksi, sehingga menghasilkan air
yang terionisasi dan mampu menyediakan elektron bebas agar berikatan dengan
radikal bebas dalam tubuh.
Tujuan : Menunjukan pengaruh pemberian air alkali terhadap penurunan kadar
MDA
Metode : Penelitian ekperimental menggunakan Post Test Only Control Group
Design. Sampel penelitian berjumlah 20 tikus, yang dibagi menjadi 4 kelompok
dengan setiap kelompok terdiri dari 5 tikus. Kelompok 1 adalah kelompok kontrol
sehat, kelompok 2 adalah kelompok kontrol negatif, dan kelompok 3 dan 4 adalah
kelompok perlakuan yang diberikan air alkali dengan masing-masing pH 8,5 dan
pH 9,5.
Hasil : Rerata kadar MDA pada 24 tikus wistar jantan didapatkan 1,9625. Pada uji
normalitas (Shapiro wilk) dan uji homogenitas (levene’s test) menunjukan sebaran
data kadar MDA berdistribusi normal dan homogen. Analisa data one way anova
didapatkan bahwa perlakuan memberikan pengaruh terhadap kadar MDA pada
tikus. Pada Analisa data pos hoc uji tukey HSD didapatkan hasil kelompok 1, 3 dan
4 tidak mempunyai perbedaan secara signifikan atau sama secara statistik.
Sedangkan, pada kelompok 2 memiliki rata-rata kadar MDA yang berbeda dari
perlakuan lainya.
Simpulan Penelitian ini menunjukan bahwa pemberian air alkali PH 8,5 dan 9,5
dapat menurunkan kadar MDA serum pada tikus wistar jantan yang dipapar asap
rokok
Kata Kunci : Air Alkali, MDA, Rokok.

xii
 ABSTRACT

Background High level of free radical value of cigarette smoke trigger an oxidative
stress reaction which will cause the long-term disease caused by free radical itself.
Free radical substance in the body can be stopped by increasing antioxidants.
Alkaline water is a natural antioxidant which is obtained from the electrolysis
process by increasing the reduction potential, resulting in ionized water and it is
able to provide free electron to bind with free radical substance in the body.
Purposes: To show the effect of alkaline water on reducing the MDA level.
Method of Research: Post Test Only Control Group Design was used in this
research. The samples consisted of 20 rats, which were divided into 4 groups with
each group consisting of 5 mice. The first group was a healthy control group, the
second group was a negative control group, the third and fourth groups were the
treatment groups which given the alkaline water with each pH value of 8.5 and a
pH of 9.5.
Results: The mean of MDA level in 24 male Wistar rats were 1.9625. The normality
test (Shapiro Wilk) and the homogeneity test (Levene's test) showed the distribution
data of MDA level which was normally distributed and homogeneous. One way
ANOVA was used as the data analysis in this research and its result showed that
the treatment had an effect on MDA level in mice. In the further data analysis, post
hoc analysis, the Tukey HSD test showed that the results of groups 1, 3 and 4 did
not differ significantly or were statistically same. Meanwhile, the second group had
different average of MDA level from other treatments.
Conclusion The result of study shows that giving alkaline water with PH 8.5 and
9.5 can reduce the serum of MDA level in male Wistar rats which exposed by
cigarette smoke.
Keywords: Alkaline Water, MDA, Cigarettes.

xiii
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar belakang

Merokok merupakan salah satu bentuk aktifitas yang sering di

lakukan oleh sebagian masyarakat dan mempunyai dampak pengaruh dalam

penggunaanya. Pengaruh yang di timbulkan bukan hanya mengenai perokok

saja namun orang-orang disekitarnya pun akan terkena dampaknya.

Menurut newsroom World Health Organization (WHO) epidemi tembakau

adalah salah satu ancaman kesehatan masyarakat terbesar yang pernah

dihadapi dunia, menewaskan lebih dari 8 juta orang per tahun di seluruh

dunia. Lebih dari 7 juta kematian tersebut adalah akibat dari penggunaan

tembakau langsung, sementara sekitar 1,2 juta adalah akibat dari orang yang

tidak merokok, namun terpapar asap rokok orang lain. Angka tersebut

diperkirakan akan terjadi peningkatan lebih dari 8 juta kematian di tahun

2030.1

Hasil penelitian secara global, terjadinya peningkatan konsumsi

rokok seringkali ditemui di negara berkembang. Termasuk Indonesia sendiri

sebagai salah satu negara berkembang yang sebagian besar masyarakatnya

mengkonsumsi rokok. Hal itu terdapat dari data World Health Organization

(WHO) tahun 2017, bahwasanya Indonesia menduduki urutan ketiga dalam

populasi jumlah perokok terbanyak di dunia setelah negara China dan

India.2

1
 2

Berdasarkan data dari Riskesdas tahun 2018, rata rata perilaku

merokok masyarakat Indonesia terjadi peningkatan setiap tahun nya dengan

ditunjukan data yaitu 7,2% dari prevalensi data Riskesdas pada tahun 2013,

8,8% pada data Sirkesnas 2016, dan pada tahun 2018 menjadi 9,1%, dengan

populasi usia tinggi merokok pada usia 10-18 tahun .3

Asap yang dihasilkan dari rokok mengandung senyawa campuran,

antara lain nikotin, tar, benzopiren, karbon monoksida, CO2 , NO, amonia

dan sulfur. Tar adalah campuran beberapa zat hidrokarbon. Nikotin adalah

komponen terbesar perokok dalam asap rokok dan merupakan zat adiktif.

Karbon monoksida adalah gas beracun yang mempunyai afinitas kuat

terhadap hemoglobin pada sel darah merah sehingga membentuk karboksi

hemoglobin.4,5 Senyawa-senyawa pada rokok ini dapat berinteraksi dengan

sel dalam tubuh dan dapat menyebabkan terbentuknya radikal bebas atau

Reactive Oxygen Species (ROS).6

Radikal bebas merupakan molekul kimia yang memiliki jumlah

elektron yang tidak berpasangan. Hal ini menyebabkan radikal bebas

menjadi senyawa yang sangat reaktif terhadap sel-sel tubuh dan akan

menyerang molekul terdekat untuk mencari pasangan elektron agar

mencapai kestabilan molekul. Jumlah radikal bebas yang ada di dalam tubuh

apabila melebihi kapasitas tubuh untuk menetralisir dapat menyebabkan

terjadinya stres oksidatif melalui mekanisme perusakan lipid membran sel

dan akan membentuk radikal lipid. Radikal lipid yang terbentuk akan

bereaksi dengan oksigen dan didapatkan hasil akhir yaitu radikal peroksi
 3

lipid, lipid peroksida dan malondialdehyde (MDA) yang larut dalam air dan

bisa dideteksi dalam darah. Hal tersebut menjadikan senyawa MDA sebagai

biomarker peningkatan peroksida lipid akibat radikal bebas di dalam tubuh. 7

Malondialdehida (MDA) dapat ditemukan dalam darah dan urin.

MDA menjadi biomarker pilihan karena merupakan hasil reaksi dari radikal

bebas yang diproduksi secara konstan sehingga baik saat dilakukan

penelitian dengan melihat kecepatan peroksidasi lipid. Analisis MDA

merupakan analisis radikal bebas secara tidak langsung dan mudah dalam

menentukan jumlah radikal bebas yang terbentuk.8

Reaktivitas radikal bebas tersebut dapat dihambat oleh antioksidan

yang ada didalam tubuh. Mekanisme pertahanan jaringan sehat dari reaksi

oksidasi ini ialah dengan menyediakan elektron bebas untuk dapat berikatan

dengan elektron tunggal pada radikal bebas tersebut, sehingga dapat

menetralisir potensi oksidasi tinggi dan mencegah agar tidak bereaksi

dengan jaringan sehat.9

Antioksidan yang sedang ramai di pasarkan yaitu antioksidan dalam

kemasan air minum ber pH tinggi (alkali).10 Air alkali merupakan hasil

pengolahan dengan elektrolisis untuk meningkatkan potensial reduksi, yang

nantinya bisa menyediakan elektron bebas untuk bisa berikatan dengan

elektron tunggal dari radikal bebas. Air alkali sendiri mengandung beberapa

komponen yang penting yaitu pH basa, molekul air mikro kluster, nilai ORP

(Oxidation Reduction Potensial) yang sangat negatif, dan hidrogen terlarut

yang tinggi.11
 4

Penelitian sebelumnya dilakukan Rafsanjani yang berjudul “

Perbedaan Kadar malondialdehida serum pada perokok sebelum dan

sesudah pemberian air alkali” didapatkan hasil bahwa tidak terdapat

perbedaan bermakna sebelum dan setelah pemberian air alkali dengan

pemberian pH 8 pada perokok.12 Sedangkan penelitian lainya dilakukan

oleh Yohanes dengan judul “Pengaruh Air Alkali Terhadap

Neovaskularisasi Tikus Galur Wistar (Rattus Norvegicus) Dengan Luka

Hiperglikemia” didapatkan hasil bahwa pemberian air alkali berpengaruh

terhadap neovaskularisasi pada tikus galur wistar (Rattus Norvegicus)

dengan luka hiperglikemia.11

Berdasarkan data diatas untuk mengurangi kadar radikal bebas

dalam tubuh perlu pemberian antioksidan yang seimbang. Peneliti ingin

membuktikan adanya manfaat dengan konsumsi minuman beralkali

terhadap penurunan kadar MDA dalam tubuh. Dan peneliti juga akan

menilai pada konsentrasi berapa air alkali yang mempunyai efektivitas yang

tinggi terhadap penurunan kadar MDA dalam tubuh.

1.2. Rumusan Masalah

Apakah pemberian air beralkali berpengaruh dalam penurunan

kadar MDA pada tikus yang terpapar asap rokok ?

 5

1.3. Tujuan penelitian

1.3.1. Tujuan umum

Menunjukan adanya pengaruh konsumsi air beralkali

terhadap penurunan kadar MDA pada mencit yang dipapar asap

rokok

1.3.2. Tujuan khusus

1) Untuk mengetahui adanya perbedaan kadar MDA serum pada

tikus yang dipapar asap rokok

2) Untuk mengetahui perbedaan selisih kadar MDA serum tikus

yang terpapar asap rokok setelah pemberian air alkali dengan

perbedaan konsentrasi pH 8,5 dan pH 9,5

3) Untuk mengetahui perbedaan efektivitas pH air alkali dalam

penelitian

1.4. Manfaat penelitian

1.4.1. Manfaat bagi peneliti

1) Penelitian ini diharapkan dapat menambah pengetahuan dan

keilmuan di bidang kedokteran

2) Membuktikan adanya manfaat pada air alkali sebagai penurun

kadar radikal bebas

 6

1.4.2. Manfaat bagi masyarakat

1) Memberikan informasi ilmiah kepada masyarakat mengenai

efektivitas pemberian air alkali terhadap kadar MDA pada tubuh

2) Sebagai referensi dan acuan untuk penelitian selanjutnya

mengenai manfaat dari konsumsi air alkali

1.5. Orisinalitas

Tabel 1. Orisinalitas Penelitian

Nama Peneliti Judul Metode Hasil

/Tahun Penelitian

Hidayatullah/201712 Perbedaan Kadar Penelitian bersifat Tidak terdapat

Malonaldehida ekperimental perbedaan bermakna
Serum Pada dengan sebelum dan sesudah
Perokok Sebelum
pendekatan kohort. pemberian air alkali
Dan Sesudah
Pemberian Air Menggunakan one pada perokok.
Alkali. group Pre test Post
test group design.

Variabel bebas :
Pemberian air
alkali.

Yohanes dkk/201711 Pengaruh Air Penelitian bersifat Pemberian air alkali

alkali terhadap ekperimental berpengaruh terhadap
neovaskularisasi dengan post test neovaskularisasi pada
tikus galur wistar
only control group tikus galur wistar
(Rattus
Norvegicus) design. (Rattus Norvegicus)
dengan luka dengan luka
hiperglikemia Variable bebas : hiperglikemia
Air alkali dengan
pH 9,5

TAN, dkk /2017/.4 Extra virgin olive Penelitian bersifat Pemberian ektak
oil menurunkan ekperimental virgin oil berpengaruh
kadarMDA berupa pre test- terhadap penurunan
(Malondialdehyd)
kadar MDA tikus
 7

pada tikus (Rattus post test control wiatar jantan yang

norvegicus) jantan group design. dipapar asap rokok
galur wistar yang secara signifikan.
dipapar asap
Variabel bebas :
rokok
pemberian ektrak
virgin oil

Herdiani dkk / Efek Rosella Penelitian bersifat Aktivitas antioksidan

2017.13 Merah Kering ekperimental rossela merah kering
Terhadap Kadar dengan post test berpengaruh terhadap
MDA Serum Tikus
only control group menurunkan kadar
Strain Wistar Yang
Di Papar Asap design. MDA serum tikus
Rokok strain wistar yang
dipapar asap rokok
Variable bebas :
rosella merah
kering

Perbedaan penelitian ini adalah pada konsentrasi variabel bebas yang

diujikan, yaitu dengan intervensi konsentrasi air alkali dengan pH bertingkat.

Penelitian ini menggunakan variabel bebas berupa air alkali dan variabel terikat

berupa kadar MDA serum setelah pemberian air alkali.

 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Rokok

2.1.1. Definisi

Merokok adalah kegiatan dengan menghisap batang rokok

dan menghirup asap dari pembakaran tembakau yang ada dirokok.

Merokok dalam jangka waktu yang panjang mempunyai prevalensi

terhadap beberapa penyakit seperti atherosclerosis dan chronic

obstructive pulmonary disease (COPD) dengan dampak sistemik

yang signifikan.3 Sedangkan disebut perokok adalah seseorang yang

melakukan kegiatan merokok. Masing-masing perokok biasanya

mempunyai kecenderungan yang berbeda, dari menghilangkan stres,

mengikuti ulama, ada pula yang merokok agar dianggap mengikuti

pergaulan.

Menurut penelitian Smet (1997) perokok sendiri dapat

dikategorikan berdasarkan jumlah batang rokok yang dihisap per

harinya, dengan dikategorikan menjadi 3 kelompok yaitu ringan,

sedang dan berat. Seseorang dikatakan perokok ringan apabila dia

menghisap 1-4 batang rokok dalam sehari, dikatakan sebagai

perokok sedang apbaila dia menghisap 5-14 batang rokok sehari,

dan dikatakan perokok berat apabila menghisap 20 batang rokok

sehari.14

8
 9

Rokok dibedakan menjadi beberapa jenis :

1) Berdasarkan bahan baku atau isinya

Terdapat rokok putih, rokok kretek dan rokok

klembak.

2) Berdasarkan penggunaan filter rokok dibedakan

menjadi rokok filter dan non filter.

Menurut penelitian sebelumnya yang dilakukan dengan

menguji jumlah konsumsi oksigen pada tikus, dengan di paparkan

asap rokok berfilter dan tanpa filter didapatkan selisih yang

signifikan. Rokok tanpa filter akan meningkatkan kadar CO2 di

bandingkan rokok berfilter.15

Kandungan nikotin yang terdapat dalam rokok kretek lebih

besar dari rokok filter. Hal ini disebabkan karena pada rokok kretek

tidak dilengkapi dengan filter, termasuk panjang dan kerapatan filter

yang berupa gabus berpori yang berfungsi mengurangi asap yang

keluar dari rokok seperti yang terdapat pada jenis filter.5,15

2.1.2 . Kandungan Rokok

Rokok merupakan gabungan bahan kimia yang komplek dari

bahan bahan organik dan bahan kimia spesifik dari pembakaran

tembakau. Rokok mengandung berbagai bahan kimia antara lain

nikotin, karbon monoksida, tar dan eugenol (dalam rokok kretek).6

Komponen rokok dapat dibagi menjadi 2 bagian, yaitu gas

(92%) dan komponen padat atau partikel (8%). Komponen gas

 10

terdiri dari : karbon monoksida, karbon dioksida, hidrogen sianida,

amoniak, oksida dari nitrogen dan senyawa hidrokarbon, dan

partikel rokok terdiri dari: tar, nikotin, benzanthracene,

benzopirena, fenol, kadmium, indol, karbazol, dan kresol.16

Adapun 3 zat kimia yang paling berbahaya yaitu tar, nikotin

dan karbon monoksida.

1) Tar atau getah tembakau adalah campuran beberapa zat

hidrokarbon, komponen tar dari bahan bahan kimia dalam

komponen padat asap rokok yang bersifat karsinogenik. Pada

saat menghisap rokok, tar masuk kedalam rongga mulut

sebagai uap. Setelah dingin akan menjadi padat dan

membentuk endapan berwarna coklat pada permukaan gigi,

saluran pernafasan dan paru. Pengendapan ini bervariasi antara

3-40 mg per batang rokok, sementara kadar tar dalam rokok

berkisar 24-45 mg.6

2) Nikotin adalah senyawa alkaloid toksis yang dipisahkan dari

tembakau dan merupakan senyawa amin tersier dengan rumus

empiris C10H14N2 dan dalam kimia organik sebagai 1- metil-2-

pirolidin (3-piridin). Nikotin dalam keadaan murni tidak

berwarna, berupa minyak cair mudah menguap, larut dalam

alkohol, eter dan petroleum eter. Mendidih pada suhu 246-

247oC dan membeku pada suhu dibawah 80oC. pada suhu

rendah, sedikit berbau tetapi jika dipanaskan akan dihasilkan

 11

uap yang berbau merangsang dan akan bereaksi dengan udara

yang ditandai dengan perubahan warna menjadi coklat.

Nikotin bersifat alkali kuat dan terdapat dalam bentuk bukan

ion sehingga dapat melalui membran sel saraf. Sifat racun

keras yang dimiliki nikotin dapat menyebabkan kelumpuhan

saraf dan mudah diserap melalui kulit. Rata-rata kadar nikotin

dalam tembakau berkisar antara 0,5-4%. Kadar nikotin

beberapa jenis tembakau di Indonesia berkisar antara 0,5-

2,5%.17

3) Gas karbonmonoksida (CO) memiliki afinitas yang kuat untuk

berikatan dengan hemoglobin dalam sel sel darah merah

sehingga membentuk karboksi hemoglobin. Hb yang

seharusnya berikatan dengan oksigen yang sangat penting

untuk pernafasan sel – sel tubuh, tetapi karena afinitas gas CO

terhadap Hb lebih kuat daripada O2 sehingga akan terbentuk

hemoglobin CO lebih banyak.6 Dalam rokok terdapat sejumlah

2 % - 6% pada saat merokok sedangkan CO yang dihisap oleh

perokok paling rendah sejumlah 400 ppm sudah dapat

meningkatkan kadar karboksihemoglobin dalam darah

sejumlah 2-16%, hal tersebut menandakan bahwa kadar CO

berpengaruh pada keadaan hemoglobin di dalam tubuh.

Ketiga kandungan asap rokok bersifat asam (pH 5,5),

dan nikotin berada dalam bentuk ion tetapi tidak dapat

 12

melewati membran secara cepat sehingga pada selaput lendir

(mukosa) pipi terjadi absorpsi nikotin dari asap rokok.

2.1.3. Asap rokok terhadap kadar MDA

Asap rokok dapat dibagi menjadi 2 yaitu asap primer dan

asap sekunder. Asap primer adalah asap yang langsung dihirup

perokok (perokok aktif) melalui mulut, sedangkan asap sekunder

adalah asap rokok yang terbentuk pada ujung rokok dan asap rokok

yang dihembuskan ke udara oleh perokok. Asap sekunder

mempunyai kadar racun yang jauh lebih tinggi dari asap primer dan

akibat yang timbul pada orang yang terus menerus terpapar asap

rokok (perokok pasif) tidak berbeda dengan perokok aktif.14

1. Radikal bebas
Asap rokok dapat menyebabkan pembentukan radikal

bebas dan dapat menurunkan kadar antioksidan di dalam tubuh.

Target utama pada radikal bebas ini adalah ikatan lipid tak

jenuh pada membran sel, sehingga akan mengganggu

pertukaran cairan pada tingkat sel dan dapat berpotensi

menyebabkan sel menjadi lisis.18

Setiap sel dalam tubuh menjalankan proses

metabolisme yang akan menghasilkan radikal bebas dan

ditandai dengan pembentukan reactive oxygen spesies (ROS).

Radikal bebas dapat terbentuk karena dipicu oleh adanya

stresor, yaitu sinar ultraviolet, radiasi, serta aktivitas fisik. 9

 13

Pada dasarnya radikal bebas diperlukan untuk

keberlangsungan beberapa proses fisiologis tubuh, yaitu pada

transportasi elektron. Dalam kadar normal radikal bebas

dibutuhkan untuk perkembangan sel dan membantu leukosit

untuk menghancurkan kuman yang masuk kedalam tubuh.

Dengan itu, kadar radikal bebas mempunyai peran terhadap

sistem imun dalam tubuh. Apabila terjadi ketidak seimbangan

radikal bebas dengan antioksidan dalam tubuh maka akan

terjadi stres oksidatif, dan akan mengganggu sistem imun. 19

Radikal bebas dapat berasal dari 2 sumber yaitu :

1) Sumber endogen

a. Mitochondrial leak

Dalam mitokondria terjadi rangkaian

transport elektron fosforilasi oksidatif yang

menghasilkan ROS sebagai hasil samping yang tidak

dapat dihindari. Rangkaian transport elektron

tersebut meliputi komplek 1-4 dan ATP yang terletak

pada membran dalam mitokondria. Kurang lebih 80

% superoksida yang dibentuk pada komplek I dan III,

dilepas pada ruang diantara membran dalam

mitokondria, sedangkan 20% sisanya dilepas ke

matriks mitokondria.20
 14

b. Respiratory burst

Merupakan proses saat sel fagositik

menggunakan oksigen dalam jumlah yang besar pada

proses fagositosis. Sekitar 70-90 penggunaan

oksigen tersebut berperan dalam produksi

superoksida yang merupakan bentukan awal dari

radikal bebas.

c. Oxidasi Enzimatik

Terdapat beberapa jenis enzim yang dapat

menghasilkan radikal bebas seperti, xantine

oksidase, lipoksigenase, aldehid oksidase, amino

acid oksdase, dan sintesis prostaglandin.

d. Reaksi Auto oksidasi

Merupakan produk dari proses metabolisme

aerob. Jenis molekulnya berasal dari hemoglobin,

katekolamin, myoglobin, sitkrom C yang tereduksi,

serta thiol. Auto oksidasi dari produk diatas dapat

menghasilkan kelompok oksigen reaktif.

2) Sumber eksogen

a. Asap rokok

Rokok yang dihisap akan mengandung

jumlah senyawa oksidan yang besar, meliputi

 15

aldehid, proxida, epoxide, dan radikal bebas yang

bersifat reaktif dan destruktif.21

b. Paparan polutan

Polusi dengan jumlah senyawa terbanyak

yaitu CO2. CO2 ini termasuk radikal bebas yang bisa

mendetruksi hingga perubahan struktur endotel.21

c. Radiasi terinonisasi

Penggunaan radioterapi memungkinkan

terjadinya kerusakan jaringan yang disebabakan oleh

radikal bebas yang terbentuk saat dilakukan radiasi

partikel maupun radiasi elektromagnetik.

d. Xenobiotik

Zat asing yang diperoleh tanpa adanya

mekanisme alami atau dalam kata lain dapat disebut

sebagai zat buatan. Xenobiotik berhubungan erat

dengan konteks polutan seperti dioksin dan bifenil

poliklorinasi.22

Radikal bebas dari asap rokok tar memiliki paruh waktu yang

lama (beberapa jam sampai bulan) sedangkan radikal bebas dari asap

gas hanya memiliki waktu paruh beberapa detik. Peningkatan

senyawa radikal bebas pada perokok dapat disebabkan oleh : 1.

Molekul dalam asap rokok fase tar dan gas, 2. Aktivasi makrofag
 16

dan neutrophil, dan 3. Senyawa radikal oksigen endogen yang

terbentuk saat reaksi rantai pernafasan dalam mitokondria. 23

Gambar 1. Pengaruh asap rokok terhadap pembentukan radikal dan penyakit

aterotrombosis.24

Tar dan gas pada asap rokok yang terhirup pada perokok aktif

maupun pasif akan menyebabkan terakumulasinya komponen tersebut di

paru. Yang mana akan menyebabkan adanya radikal bebas yang masuk

kedalam tubuh dan terserap pada pembuluh darah menjadi ROS,

mengaktivasi radikal bebas endogen dalam tubuh seperti xanthine oxidase,

 17

NADPH oxidase, METC dan mengaktivasi seluler. Dari ketiga hal diatas

akan menyebabkan peningkatan stress oksidatif (O2, H2O2, ONOO).

Peningkatan stress oksidatif menyebabkan terjadinya penurunan elastisitas

vaskuler, peningkatan prothrombin dan penurunan fibrinolitik faktor yang

akan menyebabkan peningkatan terbentuknya benang benang thrombin/

koagulasi dan akan sebabkanan obstruksi di vaskuler. Sedangkan faktor

fibrinolitik terjadi penurunan dan akan menyebabkan penurunan daya untuk

melisiskan benang fibrin sehingga akan tetep terdapat obstruksi di vaskuler.

Peningkatan stress oksidatif juga mengaktifasi leukosit dan platelet,

peningkatan lipid peroxidase, peningkatan adhesi dan inflamasi dan

menyebabkan proliferasi pada otot halus. Dari ke lima mekanisme yang

disasebabkan dengan adanya peningkatan stress okidatif dan dengan

diperberat dengan predisposisi genetik seperti hipertensi, reisiten insulin

akan mempengaruhi dan meningkatkan kejadian atherotrombotik disease

atau penyakit yang disebabkan adanya penyumbatan di vaskuler.

2.2. Malondialdehida (MDA)

2.2.1 Definisi

Malondialdehid (MDA) adalah senyawa dialdehid yang

merupakan produk akhir peroksidasi lipid didalam tubuh.(25) MDA

menggambarkan aktivitas radikal bebas di dalam sel sehingga

dijadikan sebagai salah satu petunjuk terjadinya stress oksidatif

akibat radikal bebas. Selain itu sifat MDA yang lebih stabil secara

kimiawi dibandingkan senyawa yang lain, menjadikan senyawa

 18

MDA ini yang lebih baik digunakan sebagai petanda adanya stress

oksidatif. 26

MDA sangat tepat sebagai biomarker untuk stres oksidatif

karena beberapa alasan, yaitu :

1) Pembentukan MDA meningkat sesuai stress oksidatif,

2) Kadarnya dapat diukur secara akurat dengan berbagai metode,

3) Bersifat stabil dalam sampel cairan tubuh yang diisolasi,

4) Tidak dipengaruhi oleh variasi diurnal (kebiasaan tubuh yang

dipengaruhi perasaan dan dipengaruhi apa yang dilakukan

setiap hari)

5) Merupakan produk spesifik dari peroksidasi lemak,

6) Terdapat dalam jumlah yang dapat dideteksi pada semua

jaringan tubuh dan cairan biologis, sehingga memungkinkan

untuk menentukan referensi interval.25

Menurut Biomarker Working Group, penanda biologis dapat

di definisikan yaitu suatu karakteristik yang bisa diukur dan

dievaluasi sebagai indikator proses biologis normal, proses patologis

dan respon farmakologis terhadap intervensi terapi.27

International Programme On Chemical Safety WHO juga

mendefinisikan penanda biologis sebagai suatu substansi , struktur

atau proses yang dapat diukur pada tubuh dan produk tersebut dapat

berpengaruh atau memprediksi insiden keluaran penyakit, selain itu

sebagai perediktor suatu penyakit harus mempunyai validitas berupa

 19

sensitifitas, spesifitas dan pengetahuan mengenai faktor faktor yang

mempengaruhi.27

Konsentrasi yang tinggi pada MDA menunjukan adanya

proses oksidasi dalam membran sel. Kadar MDA eritrosit dan

plasma telah digunakan sebagai marker kerusakan jaringan akibat

radikal bebas in vivo.28

2.2.2. MDA biomarker stress oksidatif

Validasi petanda biologis membutuhkan beberapa tahapan

yang berbeda. Satu tahapan yang meliputi pengembangan prosedur,

analisa referensi material, dan kontrol kualitas. Tahapan yang lain

dengan melihat adanya perubahan konsentrasi petanda biologis

menyebabkan perkembangan penyakit. Banyak petanda biologis

stres oksidatif dan status antioksidan telah dievaluasi, tetapi hanya

sedikit dilakukan validasi untuk mengetahui sensitifitas dan

spesifitas secara sistematik dengan menggunakan model binatang.27

Ada berbagai subtansi biologis yang digunakan sebagai

biomarker adanya stres oksidatif. Pengukuran radikal bebas secara

langsung sebenarnya sulit dilakukan, karena radikal bebas

mempunyai waktu paruh yang pendek dan menghilang dalam

hitungan detik dan bersifat tidak menetap. Reaksi ionisasi senyawa-

senyawa radikal bebas juga dapat membentuk MDA yang juga

merupakan produksi samping dari biosintesis prostaglandin.

Terdapat berbagai macam mediator stres oksidatif, diantaranya ialah

 20

radikal bebas, radikal hidroksil, radikal superoksidasi, non radikal,

hidrogen peroksida, produk perosida lipid, radikal peroksil, radikal

alkoksil, produk sekunder, malondialdehida, dan 4

hidroksialkenal.12

Menurut penelitian BOSS (biomarker oxidative stress study)

untuk menilai beberapa marker stress oksidatif dengan model yang

sama untuk menentukan petanda biologis yang tidak invasive,

mempunyai spesifitas, sensifitas dan selektifitas terbaik. Peneliti

menyimpulkan kadar plasma MDA, kadar isoprostan dalam plasma

dan urin, sebagai petanda biologis stress oksidatif yang reliabel. 29

MDA merupakan produk utama hasil oksidasi PUFA dan

MDA menjadi indikator adanya peroksidasi lipid yang paling sering

digunakan. MDA menjadi biomarker pilihan karena merupakan

hasil reaksi dari radikal bebas yang diproduksi secara konstan

sehingga baik untuk melihat kecepatan (rate) peroksidasi lipid in

vivo.12

Tingginya kadar MDA dipengaruhi oleh kadar peroksidasi

lipid, yang secara tidak langsung menunjukan tingginya jumlah

radikal bebas dan menunjukan adanya proses oksidasi dalam

membran sel. Status antioksidan yang tinggi akan diikuti oleh

penurunan kadar MDA.4

Analisis MDA merupakan analisis radikal bebas secara tidak

langsung dan mudah dalam menentukan jumlah radikal bebas yang

 21

terbentuk. Sedangkan analisa MDA secara langsung sangat sulit

dilakukan karena senyawa radikal yang sangat tidak stabil dan

bersifat elektrofil dan reaksinya pun berlangsung cepat.12

2.2.3. Mekanisme Pembentukan MDA

Mekanisme pembentukan MDA yaitu melalui peroksidasi

lipid yang diawali oleh aktivitas radikal bebas pada ikatan lemak tak

jenuh pada membran sel. Suatu rangkaian peroksidasi lipid terbagi

menjadi 3 tahap. 12

Tahap pertama ialah proses inisiasi, yaitu terbentuknya

radikal bebas (R) ketika radikal bebas berinteraksi dengan

polyunsaturated fatty acid (PUFA) pada membran sel dan

lipoprotein plasma.26 Terjadi abstraksi ion H dari ikatan C-H lipid

dengan paparan oksidan dan terbentuk carbon centered lipid

radical.

Tahap selanjutnya ialah tahap propagasi dimana terjadi

autooksidasi atau penggabungan O2 ketika radikal lipid (R*) hasil

tahap inisiasi bereaksi dengan oksigen membentuk radikal lipid

peroksida (ROO*). Radikal peroksida yang terbentuk akan

mengekstrak ion hidrogen dari molekul lipid yang lain (R1)

membentuk lipid hidroperoksida ROOH dan molekul radikal lipid

baru (R1*).26, 12

Tahap terakhir dari oksidasi lipid ialah tahap terminasi,

dimana lipid hidroperoksida dan radikal lipid baru akan bereaksi

 22

dengan radikal yang lain dan menghasilkan senyawa non radikal.

Hal ini bisa terjadi apabila konsentrasi yang dimiliki pada lipid

radikal sudah sangat tinggi dan memungkinkan untuk terjadinya

reaksi. Adapun senyawa sekunder yang terbentuk yaitu MDA, 4

hidroksi-2- alkanal dan 2 alkanal. Produksi sekunder tersebut dapat

digunakan sebagai parameter peroksidase lipid.30,31

Berikut adalah mekanisme peroksidasi lipid yang

menghasilkan produksi sekunder yaitu MDA.

Gambar 2. Mekanisme Pembentukan MDA.26

 23

2.2.4. Metode Pengukuran MDA

Pengukuran radikal bebas sebenarnya sulit untuk dilakukan

pengukuran, hal ini berkaitan dengan radikal bebas yang memiliki

waktu paruh yang sangat pendek. Kerusakan jaringan lipid akibat

ROS dapat diperiksa dengan mengukur senyawa MDA yang

merupakan produk peroksidasi lipid. Produksi ROS secara tidak

langsung dinilai dengan kadar peroksidasi lipid.32,33

Pengukuran kadar MDA serum dapat dilakukan melalui

beberapa cara, yaitu sebagai berikut :

1. Tes thiobarbituric acid-reactive subtance (TBARS)

Dasar pemeriksaan adalah reaksi spektrofotometrik

sederhana dimana satu molekul MDA akan terpecah menjadi 2

molekul 2-asam thiobarbiturat. Reaksi ini berjalan pada suasana

asam yaitu pH 2-3. TBARS ini didasarkan pada reaktivitas TBA

terhadap MDA yang menghasilkan aduksi floresen kromogen

berwarna merah.34

Gambar 3. Proses reaksi MDA-TBA32

 24

Prinsip analisis yang digunakan yaitu pemanasan akan

menghidrolisis peroksidasi lipid sehingga MDA yang terikat akan di

bebaskan dan akan bereaksi dengan TBA dalam suasana asam yang

membentuk kompleks MDA-TBA. Metode TBARS ini dilakukan

dengan mengukur kadar MDA menggunakan spektofotometer pada

panjang gelombang 532 nm.32 Kadar MDA dapat diperiksa baik di

plasma, jaringan maupun urin.35

2. Pengukuran reaksi TBA dengan kolorimetri

Metode yang digunakan adalah metode Yagi. Metode ini

paling sering digunakan karena mudah dilakukan, akan tetapi

bersifat tidak spesifik oleh karena proses peroksidasi lipid juga

mengukur produk aldehid lainnya.

3. Pengukuran reaksi TBA dengan metode fluorosens

Metode ini memiliki keunggulan dibanding metode

kolorimetri oleh karena tidak terganggu oleh beberapa substansi

produk reaksi TBA yang larut air. Pemeriksaan dilakukan

dengan metode spektrofluorometri.35

4. Pengukuran kadar MDA TBA dengan metode HPLC (High

Performance Liqiud Chromatography)

Merupakan metode pengukuran kadar MDA serum yang

paling sensitif dan spesifik.34 Namun, metode ini membutuhkan

kondisi asam dengan suhu yang tinggi, selain itu pada

pemeriksaan HPLC pada MDA serum bebas. MDA bukan

 25

produk yang spesifik dari proses peroksidasi lipid sehingga

dapat menimbulkan positif palsu yang berakibat nilai duga

positif yang rendah, dan telah dilaporkan dapat meningkatkan

spesifisitas pada pemeriksaan kadar MDA serum.34,35

Penelitian kali ini akan mengunakan metode TBARS , sebab

metode ini mempunyai nilai kepekaan yang cukup tinggi terhadap

radikal bebas dan mudah diaplikasikan untuk sampel dalam berbagai

tahap oksidasi.

2.3 Air Alkali

2.3.1. Definisi

Air alkali adalah air yang bersifat basa atau mempunyai pH

di atas 7. Air alkali terionisasi merupakan air yang memiliki nilai

potensial redoks yang tinggi (yakni merupakan antioksidan yang

baik karena nilai ORP (Oxydation Reduction Potensial) yang sangat

negatif) dan memiliki molekul air dalam kelompok yang lebih kecil

daripada air biasa (micro-clustred).36 Air alkali ini adalah hasil

elektrolisis menggunakan unit ionisasi air, dan telah mengalami

reduksi sehingga menyediakan sejumlah besar elektron untuk

berpasangan dengan oksigen aktif di dalam sel.37

Air alkali diolah melalui proses elektrolisis untuk

ditingkatkan potensi reduksinya sebagai solusi yang baik terkait

masalah penyediaan sumber yang aman atas elektron bebas yang

 26

bertujuan untuk menghambat oksidasi dari jaringan normal yang

disebabkan oleh radikal oksigen bebas (free oxygen radicals).37

Air alkali pertama kali digunakan yaitu pada industri

pertanian tahun 1954 dan industri medis pada tahun 1960 di Negara

Jepang dengan sebelumnya telah dilakukan penelitian sejak 1931.

Pada tahun 1966 air alkali telah diakui kegunaannya oleh

departemen kesehatan di Jepang dengan keefektifannya yaitu dalam

hal gangguan pencernaan, antasida, diare kronis dan hiperasiditas.

Dengan kegunaan yang besar, departemen kesehatan

mempromosikan penggunaan air alkali pada masyarakat Jepang

dengan membentuk Functional Water Foundation di tahun 1994.37

Pada penelitian kali ini peneliti bermaksud melakukan

penelitian menggunakan air alkali yang didapat dari proses

elektrolisis dengan mesin Kangen Water Leveluk type JR II.

Menurut penelitian yang sudah dilakukan penggunaan air alkali

kangen water sudah terstandarisasi sebagai air minum terionisasi

yang ditetapkan berdasarkan Peraturan Menteri Kesehatan Republik

Indonesia No.492/MENKES/PER/IV/2010. Konsentrasi air alkali

sebagai konsumtif yaitu dengan pH 7,0 – pH 9,5. Air alkali dengan

pH strong basa yaitu 11,5 pada penelitian sebelumnya didapatkan

efektif sebagai pengobatan penyakit degeneratif.38,39

 27

2.3.2 Struktur dan Proses pembuatan alkali

Air alkali mengacu pada elektrolisis air yang dihasilkan dari

mineral seperti magnesium dan kalsium, karena mengandung

hidrogen yang tinggi, pH tinggi dan potensial reduksi oksidasi yang

negatif. Air dengan hidrogen tinggi dalam air alkali bermanfaat

untuk membersihkan ROS, melindungi DNA dari stress oksidatif,

dan memacu metabolisme.40,41

Dalam pembuatan air alkali pertama kali yang terjadi yaitu

proses filtrasi dengan melalui arang yang aktif. Kemudian air yang

telah difiltrasi ini akan melewati ruangan berlapiskan platinum

dengan elektroda dari titanium dimana merupakan proses

elektrolisis berlangsung. Ion positif akan tertarik ke elektroda

negatif dan akan membentuk air alkali, sedangkan ion negatif akan

tertarik ke elektroda positif membentuk air teroksidasi. Air alkali ini

akan keluar melalui keran dan dapat kita minum, sedangkan air yang

teroksidasi akan dikeluarkan pada saluran yang lain.37,42

Gambar 4. Gambaran alat tahapan elektrolisis air alkali .37

 28

Perbandingan potensial redoks setelah air dielektrolisis di

dalam unit air terionisasi, air tereduksi datang keluar dari sisi katodik

dan air teroksidasi keluar dari sisi anodik. Dengan elektrolisis dapat

memperoleh air tereduksi dengan negative potensi yang baik untuk

tubuh.37

Berikut gambaran tipe air dengan potensial reduksi :

Tabel 2. Perbandingan potensial redoks pada tipe air hasil elektrolisis.12,37

Potensial reduksi-oksidasi (redoks)

Tipe Air Potensial pH Efek yang ditimbulkan
redoks
Air keran +400 to +500 7 Potensial oksidasi kecil
mV
Air tereduksi -250 to -350 8 Potensial reduksi kuat,
mV mengandung elektron
yang dapat didonasikan
Air +700 to +800 4 Potensial oksidasi kuat,
Teroksidasi mV kurangnya elektron
memberikan
kemampuan untuk
mengoksidasi dan
sterilisasi

2.3.3. Air Alkali sebagai antioksidan

Antioksidan dapat didefinisikan sebagai senyawa dengan

konsentrasi rendah dibandingkan substrat yang dapat teroksidasi

dan secara signifikan yang dapat menunda, memperlambat dan

mencegah proses oksidasi.37 Antioksidan juga mampu menghambat

laju oksidasi molekuler target. Antioksidan merupakan senyawa

yang diperlukan oleh tubuh untuk melindungi sel sel tubuh dari

kerusakan yang diakibatkan oleh radikal bebas, antioksidan sangat

beragam jenisnya.43
 29

Berdasarkan sumbernya antioksidan dibagi menjadi 2

kelompok, yaitu antioksidan dalam tubuh (endogen) dan antioksidan

dari luar (eksogen).44 Antioksidan endogen adalah bilirubin, thiols

seperti glutathione, N-acetyl sisteine, NADPH dan NADH, koenzim

Q10,asam urat, serta superoxide dismutase (SOD).37,45 Sedangkan,

antioksidan eksogen dibedakan menurut dapatannya dibagi menjadi

antioksidan alami dan antioksidan sintetik.

A. Antioksidan alami

Kandungan antioksidan alami dapat berasal dari:

1. Senyawa antioksidan yang sudah ada dari 1 atau 2 komponen

makanan seperti mikroorganisme, jamur, hewan dan

tumbuhan

2. Senyawa antioksidan yang terbentuk dari reaksi selama proses

pengolahan, seperti pada penelitian kali ini air alkali yang

didapatkan adalah air alkali teroksidasi dengan proses

elektrolisis.

3. Senyawa antioksidan yang diisolasi dari sumber alami dan

ditambahkan ke makanan sebagai bahan tambahan pangan.46

Antioksidan alam mempunyai derajat toksisitas yang rendah

sehingga lebih banyak dipakai daripada antioksidan sintesis.

B. Antioksidan Sintesis

Merupakan antioksidan yang diproduksi oleh manusia

dengan mensintesis di bidang industri. Termasuk antioksidan

 30

sintesis dan banyak dipakai dalam industri makanan adalah butyl

hidroksilanisol (BHA), butyl hidroksittoluen (BHT),

propilgallat, dan etoksiquin.43

 BAB III

KERANGKA TEORI, KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS

3.1. Kerangka teori

Berdasarkan tinjauan pustaka diatas, maka dapat disusun kerangka
teori sebagai berikut :

Zat aktif dari asap rokok

Peningkatan produksi ROS

Stres oksidatif

Kadar MDA serum

Menghambat reaksi peroksidasi lipid

Efek protektif Kemampuan mereduksi kadar MDA

Air alkali pH bertingkat

Gambar 5. Kerangka Teori.4,47

31
 32

3.2. Kerangka Konsep

Air alkali dengan pH 8,5 dan air Kadar MDA serum

alkali dengan pH 9,5

Gambar 6. Kerangka konsep

3.3. Hipotesis
3.3.1 Hipotesis Mayor

Terdapat perbedaan kadar MDA serum dengan pemberian

air alkali dengan pH bertingkat

3.3.2. Hipotesis Minor

a. Kadar MDA serum pada pH alkali 9,5 akan didapatkan kadar

MDA serum yang lebih rendah

b. Didapatkan ke efektifan penggunaan air alkali dalam penurunan

kadar MDA serum dibandingkan dengan air biasa/ clean water

dengan rerata pH 7.
 BAB IV

METODE PENELITIAN

4.1. Ruang Lingkup Penelitian

Ruang lingkup penelitian ini ialah mencakup bidang ilmu

kedokteran terutama pada bidang Biokimia dan Patologi Klinik.

4.2. Tempat dan Waktu Penelitian

4.2.1. Tempat Penelitian

Penelitian ini akan dilakukan di Laboratorium Biologi

Universitas Negeri Semarang untuk perlakuan hewan coba dan

Laboratorium Kimia Universitas Sultan Agung Semarang untuk

dilakukan pengukuran kadar MDA serum.

4.2.2. Waktu Penelitian

Penelitian akan dilaksanakan dimulai dari bulan Januari 2021

4.3. Jenis dan Rancangan Penelitian

Jenis penelitian ini menggunakan desain penelitian eksperimental

dengan rancangan penelitian yang digunakan adalah post test only control

group design yaitu dengan memeriksa kelompok perlakuan setelah

diberikan perlakuan.

33
 34

P0 O1

P S

P1 O2
Gambar 7. Skema Rancangan penelitian
Keterangan :
P : Populasi
S : Sampel
R : Randomisasi
P0 : Perlakuan pada kelompok kontrol
O1 : Observasi MDA kelompok kontrol post test (aquabides 1 ml + Asap
rokok)
P1 : Perlakuan dengan pemberian air alkali + asap rokok
O2 : Observasi MDA kelompok perlakuan post test (air alkali + asap rokok)
4.4 Populasi dan Sampel

4.4.1 Populasi Penelitian

Populasi penelitian yang digunakan adalah tikus putih

jantan galur wistar.

4.4.2 Sampel penelitian

4.4.2.1 Besar Sampel

Besar sampel yang digunakan pada penelitian

menggunakan ketentuan WHO. Di mana jumlah minimal sampel

perkelompok adalah 5 ekor dengan faktor koreksi 10%, sehingga

hewan coba yang digunakan adalah berjumlah 6 ekor untuk

mengantisipasi adanya droup out.

 35

𝑛
𝑛′ = ( )
1−𝑓

5
=( )
1 − 0,1

5
=( )
0,9

= 5,56 = 6-5 = 1 ekor

Keterangan:
n’ = besar sampel koreksi
n = besar sampel awal
f = perkiraan proporsi droup out, kira-kira 10%
Maka pada penelitian ini menggunakan 5 sampel dan 1

sampel untuk memenuhi kriteria drop out setiap kelompoknya.

Sehingga didapatkan seluruh sampel penelitian menggunakan

hewan percobaan sebanyak 24 ekor. Hewan uji dibagi menjadi 4

kelompok yang masing - masing kelompok terdiri dari 6 ekor

tikus putih jantan Wistar dengan pembagian kelompok sebagai

berikut:

1. Kelompok 1: kontrol sehat/ teknis (pemberian aquades dan

tanpa paparan asap rokok)

2. Kelompok 2: kontrol positif (pemberian aquades dan

paparan asap rokok)

3. Kelompok 3: perlakuan dengan pemberian air alkali pH

8,5 dan paparan asap rokok

4. Kelompok 4: perlakuan dengan pemberian air alkali pH 9,5

dan paparan asap rokok

 36

4.4.3.1 Kriteria Inklusi

1) Tikus jantan galur wistar
2) Umur 2-3 bulan
3) Berat badan 150-200 gram
4) Sehat dan aktif
5) Belum pernah digunakan untuk penelitian
4.4.3.2 Kriteria Eksklusi
1) Sakit selama masa adaptasi
2) Mati selama perlakuan percobaan berlangsung

4.5 Variabel Penelitian

a. Variabel bebas: Air alkali pH 8,5 dan 9,5 dan kelompok perlakuan

paparan asap rokok

b. Variabel terikat: Kadar MDA serum

4.6 Definisi operasional

Tabel 3. Definisi operasional

No Variabel Unit Skala

1 Air Alkali Rasio

Air alkali yang digunakan pada
penelitian ini yaitu air alkali dengan
pH 8,5 dan 9,5 yang dibuat dengan
proses elektrolisis menggunakan
mesin kangen water levelux JR II
2 Kadar MDA serum Nmol/ml Numerik
Kadar MDA serum dinilai dengan
metode spektrofotometri dan
dilakukan penghitungan dengan
konversi ke dalam rumus untuk
didapatkan kadar MDA serum.
 37

4.7 Cara pengumpulan data

4.7.1. Alat dan Bahan

4.7.1.1 Pembuatan Air Alkali

Alat yang digunakan dalam pembuatan air alkali ini

menggunakan mesin kangen water lavelux JR II, dengan

bahan yang digunakan yaitu air minum biasa/clean water.

4.7.1.2 Pembuatan Asap Rokok

Alat yang digunakan dalam pembuatan asap rokok

yaitu menggunaaan mesin aerator dengan prinsip meniup

rokok sehingga asap rokok terbentuk dengan stabil. Bahan

yang digunakan adalah rokok kretek tanpa filter.

4.7.1.3 Pengukuran MDA serum

Alat yang digunakan pada pengukuran MDA seum

yaitu menggunakan spektrofotometer, vortex, sentrifuge,

mikropipet, penangas air dan tabunng reaksi. Sedangkan

bahan yang diperlukan dalam pengukuran MDA serum yaitu

sampel darah tikus, larutan asam trikloroasetat (TCA) 20%,

larutan asam tiobarbiturat (TBA) 0,67%, larutan standar

tetrametoxypropan 96% malondialdehida (dimethyl asetat)

99% dan aquades.

 38

4.7.2. Jenis data

Jenis data yang digunakan pada penelitian ini adalah jenis

data primer karena data yang diperoleh dari penelitian ini diperoleh

sendiri, dengan cara melakukan pengamatan langsung terhadap

hewan coba.

4.7.3. Cara Kerja

A. Persiapan Hewan Coba

Tikus jantan, galur Wistar usia 2-3 bulan dengan berat badan

antara 150 sampai 200 gram, sehat, dilakukan adaptasi selama tujuh

hari di tempat penelitian dengan kandang individu, untuk

penyesuaian dengan lingkungan. Ukuran kandang tikus yang

digunakan yaitu tinggi 15 cm, lebar 50 cm, panjang 30 cm dengan

kandang terbuat dari plastik, kedap air dan mudah dibersihkan.

Selama proses adaptasi tikus tetap diberi makan yaitu voer ayam dan

air minum aquades yang diletakan dibotol dan disertai sipper tube

diberikan secara ad libitum (tanpa batas).

B. Pembuatan air alkali

Menyiapkan air minum matang yang dipesan pada air galon

kemasan. Selanjutnya dilakukan penyaluran air galon melalui selang

dan dimasukan ke mesin lavelux Kangen water JR II, selanjutnya

dilakukan penyaringan air seperti prinsip pembuatan air alkali yaitu

dengan melewati platinum dengan titanium berkatoda. Atur kadar

pH yang diinginkan sesuai petunjuk pemakaian mesin. Saat air alkali

 39

yang terbentuk mulai keluar dari saluran air, pada penelitian kali ini

akan dipastikan kembali kadar pH pada air alkali yaitu

menggunakan pH meter dan pH tester cair. Pada pH meter akan

muncul angka pH air yang terdeteksi sedangkan pada pH tester cair

akan terlihat air alkali dengan pH 9,5 akan memunculkan warna

ungu tua dan pada air alkali pH 8,5 akan memunculkan warna yang

lebih muda.

C. Tahapan Penelitian

Tikus pada kandang adaptasi diletakan pada kandang

pemaparan asap rokok. Untuk kandang tempat pemaparan asap

rokok disediakan kandang dengan ukuran tinggi 50cm, lebar 50 cm,

panjang 100 cm. Kandang tersebut adalah kandang khusus yang

sudah tersedia pada laboratorium dengan disertai mesin aerator

untuk pengeluaran asap rokok supaya tetap stabil. Dan terdapat juga

ventilasi disalah satu sisi kandang sebagai sirkulasi oksigen. Selama

penelitian nantinya hewan coba tetap akan diberikan makan dan

minuman yang digantikan dengan konsumsi air minum beralkali

pada hewan perlakuan dan pemberian air minum aquades pada

kelompok kontrol yang diberikan secara ad libitum (tanpa batasan).

Penelitian dengan urutan kerja (protokol penelitian) seperti

di bawah ini :
 40

1. Pada satu minggu pertama yaitu hari ke 1 – hari ke 7, tikus

diadaptasi di kandang tikus secara individu dengan tetap

diberikan voer ayam dan minum aquades.

2. Selanjutnya hari ke 8 tikus dimasukkan ke kandang yang telah

disiapkan khusus untuk diberikan paparan asap rokok. Pemberian

asap rokok dilakukan selama 3x waktu paparan dalam satu hari

dan setiap paparan diberikan 1 putung rokok.

3. Air alkali diberikan secara ad libitum sehari setelah masa adaptasi

tikus yaitu sebagai konsumsi minum pada kelompok tikus dengan

perlakuan. Pada kelompok kontrol negative pemberian air minum

aquades akan dilanjutkan.

4. Pengambilan darah diambil sehari setelah dilakukan proses

pemaparan (Post-Test) atau pada hari ke 9.

5. Setelah itu dilakukan pemeriksaan kadar MDA dengan metode

spektrofotometri pada masing-masing kelompok dengan prosedur

yang sama

D. Prosedur Pengambilan Darah

Pengambilan darah diambil sebanyak 1 ml melalui medial

canthus sinus orbitalis menggunakan pipet kapiler hematokrit non

EDTA. Darah ditampung menggunakan tabung yang sudah

disediakan dan diamkan selama 15 menit. Untuk mendapatkan

serum selanjutnya darah disentrifuge dengan kecepatan 3500 rpm

 41

selama 5 menit. Serum yang sudah terpisah diambil melalui

mikropipet. Serum ditampung menggunakan tabung 1,5 cc.

E. Prosedur penangan hewan coba setelah selesai penelitian

Hewan coba yang telah dilakukan pengambilan darah pada

medial canthus sinus orbitalis, harus dipastikan bahwa hewan coba

tidak mengalami recovery. Selanjutnya dilakukan terminasi pada

hewan dengan pemberian anastesi sebelum mengubur hewan coba, dan

dipastikan bahwa denyut nadi sudah berhenti. Selanjutnya hewan coba

yang sudah dipastikan mati, dikumpulkan menjadi satu lalu dikubur

F. Prosedur Pengukuran MDA

1. Serum diambil sebanyak 1 ml, dimasukan kedalam tabungreaksi.

2. Tambahkan 1 ml TCA 20%.

3. Tambahkan TBA 1 % dengan pelarut CH2COOH 5% glasial 50%

4. Semua tabung dimasukkan ke dalam rak tabung, kemudian

dimasukkan kedalam penangas air / water bath dengan suhu 95

ºC 100ºC selama 45 menit.

5. Setelah itu dikeluarkan dan didinginkan.

6. Sentrifuge 3000 rpm selama 15 menit.

7. Supernatan diambil sebanyak 1 ml dimasukan dalam kuvet dan

diukur dengan spektrofotometer dengan panjang gelombang 530

nm.

8. Pada layer akan terlihat angka dan dilanjutkan dengan dikonversi

ke dalam rumus untuk mendapatkan kadar MDA (nmol/ml).

 42

4.8 Alur Penelitian

24 ekor tikus putih jantan galur wistar

Adaptasi 7 hari

Randomisasi

Kelompok 1 Kelompok 2 Kelompok 3 Kelompok 4

@6 ekor sebagai @6 ekor sebagai @6 ekor sebagai @6 ekor sebagai
kontrol sehat kontrol positif kelompok perlakuan kelompok perlakuan
diberikan minum diberikan minum diberikan minum air diberikan minum air
aquades dan tanpa aquades dan alkali pH 8,5 dan alkali pH 9,5 dan
diberikan intervensi diberikan intervensi diberikan intervensi diberikan intervensi
paparan asap rokok paparan asap rokok paparan asap rokok paparan asap rokok

Pengambilan sampel
darah pada hari ke 9

Analisa MDA serum

Post test

Analisis data

Gambar 8. Alur penelitian

 43

4.9 Analisis Data

Data penelitian ini semua data diolah dengan program SPSS

for windows. Metode analisis data dalam penelitian meliputi:

1. Analisis Deskriptif

Analisis deskriptif dilakukan untuk mengetahui

karakteristik data yang dimiliki dengan cara mencari sum, mean,

median, nilai maksimal dan nilai minimal pada data.

2. Uji Normalitas

Uji normalitas data dilakukan dengan Uji Shapiro-Wilk

karena jumlah sampel per kelompok kurang dari 50. Data

berdistribusi normal dengan p>0,05.

3. Uji homogenitas

Homogenitas data dilakukan dengan Uji Levene, varian

data homogenya dengan p>0,05. Apabila hasil uji normalitas dan

homogenitasnya bermakna (p>0.05) dan homogen maka

dilanjutkan dengan uji One Way ANOVA, kemudian dilanjutkan

dengan uji beda Post Hoc, sedangkan apabila hasil uji normalitas

dan homogenitasnya tidak bermakna (p<0.05) dan tidak homogen

maka dilanjutkan dengan uji Kruskall-Wallis kemudian

dilanjutkan dengan uji beda Mann-Whitney.48

 44

4.10. Jadwal Penelitian

Tabel 4. Jadwal Penelitian

Kegiatan Bulan ke-1 Bulan ke-2 Bulan ke-3 Bulan ke-4 Bulan ke-5 Bulan ke-6 Bulan ke-7

1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
Pengajuan
judul dan
pembuatan
proposal
Seminar
proposal
Pengajuan
Etichal
Clearance
Penelitian
Berlangsung
Pengolahan
dan analisa
data
Seminar
hasil
 BAB V

HASIL PENELITIAN

Penelitian ini menggunakan 24 ekor tikus (Rattus Norvegicus) jantan

galur wistar sehat, umur 2-3 bulan, berat badan 150- 200 gram sebagai sampel.

Sampel dibagi menjadi 4 kelompok dengan masing masing berisi 6 ekor tikus.

Tahap penelitian pertama tikus di adaptasi dengan kandang individu selama 7

hari. Dengan pemberian air minum diberikan ad libitum. Pada hari ke 8 tikus

adapatasi dikelompokan menjadi 4 kelompok dengan cara random sampling.

Kelompok pertama adalah kelompok kontrol sehat/ teknis yang tidak dilakukan

intervensi apapun, kelompok kedua adalah kelompok kontrol positif yang

dilakukan intervensi asap rokok tanpa pemberian air alkali. Kelompok ke tiga

adalah kelompok yang dilakukan intervensi asap rokok dan diberikan air alkali

dengan pH 8,5. Kelompok ke empat adalah kelompok perlakuan yang diberikan

intervensi asap rokok dan air alkali dengan pH 9,5.

5.1 Pengukuran pemberian air minum pada hewan uji

Pemberian air minum selama perlakuan pada hewan uji diberikan secara ad

libitum (tanpa batas) dengan hal itu perlu dilakukan kontrol pemberian untuk

menilai kefektifan air yang terminum antar hewan uji. Pada penelitian ini dilakukan

pengukuran air minum disetiap tikus yang akan di intervensi paparan asap rokok.

Dari data pengukuran air yang diberikan rata rata air yang terminum oleh hewan uji

selama 2 hari yaitu 65 ml. Adapun rincian data pengukuran air minum sebagai

berikut :

45
 46

Tabel 5. Pengukuran minum ad libitum

KELOMPOK Pemberian Pengukuran Pengukuran Pemberian Pengukuran Volume

Awal pertama Kedua tambahan Ketiga yang
100 ml (Pagi hari) terinum
Kontrol sehat 1.1 100 ml - - - 24 ml 76 ml
1.2 100 ml - - - 22 ml 78 ml
1.3 100 ml - - - 16 ml 84 ml
1.4 100 ml - - - 18 ml 82 ml
1.5 100 ml - - - 45 ml 55 ml
1.6 100 ml - - - 40 ml 60 ml
Kontrol positif 2.1 50 ml 48 ml 45 ml 145 ml 132 ml 18 ml
2.2 50 ml 47ml 47 ml 147 ml 130 ml 20 ml
2.3 50 ml 47 ml 43 ml 143 ml 135 ml 15 ml
2.4 50 ml 50 ml 48 ml 148 ml 60 ml 90 ml
2.5 50 ml 45ml 42 ml 142 ml 48 ml 102 ml
2.6 50 ml 50 ml 50 ml 150 ml 110 ml 40 ml
Perlakuan 1 3.1 50 ml 50 ml 50 ml 150 ml 120 ml 30 ml
3.2 50 ml 50 ml 50 ml 150 ml 125 ml 25 ml
3.3 50 ml 50 ml 50 ml 150 ml 123 ml 27 ml
3.4 50 ml 48 ml 44 ml 144 ml 107 ml 43 ml
3.5 50 ml 43 ml 30 ml 130 ml 120 ml 50 ml
3.6 50 ml 50 ml 46 ml 146 ml 122 ml 28 ml
Perlakuan 2 4.1 50 ml 43 ml 39 ml 139 ml 100 ml 50 ml
4.2 50 ml 45 ml 42 ml 142 ml 100 ml 50 ml
4.3 50 ml 42 ml 35 ml 135 ml 75 ml 75 ml
4.4 50 ml 43 ml 37 ml 137 ml 60 ml 92 ml
4.5 50 ml 47 ml 41 ml 141 ml 117 ml 33 ml
4.6 50 ml 50 ml 41 ml 141 ml 125 ml 25 ml

5.2 Proses pembuatan supernatan MDA serum

Sampel darah yang sudah disentrifuge dan didapatkan serum dipindahkan

ke tabung reaksi 1 ml. Selanjutnya diberikan larutan TCA 20% sebanyak 1 ml. Pada

saat ditambahkan Larutan TCA terjadi perubahan warna dari sampel menjadi putih

kekeruhan. Hal ini disebabkan dari sifat larutan TCA yaitu mengendapkan protein

yang terdapat di dalam plasma. Selanjutnya diberikan larutan TBA sebanyak 1 ml.

larutan TBA berfungsi sebagai pengikat MDA pada plasma. TBA akan bereaksi

dengan MDA dalam kondisi asam dan pada suhu 95 derajat C. Oleh karena itu

pemberian larutan TBA dengan pelarut CH2COOH 5% glasial 50% untuk

 47

didapatkan kondisi asam dan tahap selanjutnya dilakukan inkubasi sampel.

Inkubasi sampel dilakukan di penangas air/ water bath selama 45 menit. Tahap

terakhir yaitu sampel didinginkan dan disentrifuge untuk didapatkan supernatan

akhir yaitu MDA serum. Dengan pengamatan makroskopis supernatan yang

terbentuk pada kelompok perlakuan didapatkan lebih jernih dibandingkan dengan

kelompok kontrol. Metode yang digunakan untuk medapatkan MDA adalah reaksi

TBARS yaitu reaksi dengan nilai kepekaan yang tinggi terhadap radikal bebas dan

mudah diaplikasikan dalam sampel dalam berbagai tahap oksidasi.

5.3 Pengukuran MDA serum dengan spektrofotometri

5.3.1. Penentuan Kurva Baku

Pengukuran kadar MDA dilakukan dengan menggunakan alat

spektrofotometer UV- Vis. Baku standar yang digunakan adalah TEP

(tetramethoxypropan 96%). TEP tereaksikan dengan TBA akan membentuk

MDA dan methanol sebagai produk samping. Panjang gelombang maksimal

optimasi yang dihasilkan dari penentuan kurva baku yaitu 532 nm. Hasil nilai r

yang diperoleh yaitu 0,9918. Persamaan kurva baku yang didapat yaitu y =

0,6837 x – 0,0296.

5.3.2. Pengukuran MDA serum pada sampel

Pengukuran konsentrasi dari sampel percobaan dilakukan dengan cara

yang sama seperti pembuatan kurva standar yaitu serum darah direaksikan

dengan larutan TCA 20 % 1 ml dan larutan TBA 1 ml dilanjutkan dengan

inkubasi dan sentrifugasi. Supernatan yang terbentuk dipisahkan dan

dipindahkan ke dalam kuvet untuk diukur absorbansinya menggunakan

 48

spektrofotometer dengan Panjang gelombang 532 nm. Konsentrasi sampel

diperoleh dengan memplot data absorbansi sampel ke dalam kurva standar.

5.4 Analisa Data

Analisa data pada penelitian ini menggunakan uji One Way Anova untuk

melihat adanya pengaruh antar kelompok perlakuan yang memiliki perbedaan yang

bermakna setelah diberikan intervensi paparan asap rokok dan air alkali. Sebelum

dilakukan uji pengaruh maka terlebih dahulu untuk menilai syarat-syarat dalam uji

tersebut. Syarat untuk dilakukan uji tersebut yaitu perlu dilakukan uji normalitas

dan uji homogenitas untuk melihat varians data sama atau terdapat perbedaan

varians data.

Berdasarkan uji normalitas data dengan menggunakan uji shapiro wilk

didapatkan nilai sig Shapiro Wilk (0.495) > α (0.05). Pada taraf signifikansi α =

5%, sehingga dapat disimpulkan bahwa residual data kadar MDA berdistribusi

normal. Pada uji homogenitas menggunakan uji levene dengan nilai sig (0.184) > α

(0.05). Pada taraf signifikansi α = 5%, sehingga dapat disimpulkan bahwa varian

dari residual homogen. Dari varians data terdistribusi normal dan homogen maka

uji pengaruh dengan uji One Way ANOVA yang didapatkan nilai sig (0.00) < α

(0.05). Pada taraf signifikansi α = 5%, sehingga dapat disimpulkan bahwa perlakuan

memberikan pengaruh terhadap kadar MDA pada tikus putih jantan galur wistar.

Uji lanjutan yang dapat digunakan yaitu uji beda post hoc dengan uji Tukey HSD.

Uji ini merupakan pengujian perbandingan untuk menentukan rata rata beberapa

kelompok dengan nilai signifikansi (p-value) < α=0.05, hal ini menunjukan antar

perlakuan terdapat perbedaan.

 49

Pada penelitian ini terdapat 4 kelompok perlakuan yang berbeda, sehingga

pada uji Tukey HSD penelitian ini digunakan untuk menentukan signifikansi ke-

empat rata rata perlakuan. Perlakuan 1 dan perlakuan 2 memiliki nilai sig=0.026 <

α=0.05, sehingga kedua perlakuan tersebut berbeda. Perlakuan 1 dan perlakuan 3

memiliki nilai sig=0.084 > α=0.05, sehingga kedua perlakuan tersebut tidak

berbeda. Perlakuan 1 dan perlakuan 4 memiliki nilai sig=0.019< α=0.05, sehingga

kedua perlakuan tersebut berbeda. Perlakuan 2 dan perlakuan 3 memiliki nilai

sig=0.000< α=0.05, sehingga kedua perlakuan tersebut berbeda. Perlakuan 2 dan

perlakuan 4 memiliki nilai sig=0.000< α=0.05, sehingga kedua perlakuan tersebut

berbeda. Perlakuan 3 dan perlakuan 4 memiliki nilai sig=0.886> α=0.05, sehingga

kedua perlakuan tersebut tidak berbeda

Untuk melihat kesamaan rata-rata pada setiap perlakuan, digunakan output Tukey

HSD. Sehingga dapat disimpulkan sebagai berikut :

 50

• Pada subset 1 terdapat perlakuan 4 dan perlakuan 3, artinya rata rata kadar MDA

pada perlakuan 4 dan perlakuan 3 tidak mempuanyai perbedaan yang signifikan.

Sehingga, rata rata kadar MDA perlakuan 4 dan perlakuan 3 sama secara

statistik.

• Pada subset 2 terdapat perlakuan 3 dan perlakuan 1, artinya rata rata kadar MDA

pada perlakuan 3 dan perlakuan 1 tidak mempuanyai perbedaan yang signifikan.

Sehingga, rata rata kadar MDA perlakuan 3 dan perlakuan 1 sama secara

statistik.

• Pada subset 3 hanya terdapat perlakuan 2

Disimpulkan bahwa perlakuan 2 memiliki rata rata kadar MDA yang berbeda

dari perlakuan perlakuan yang lainnya.

 BAB VI

PEMBAHASAN

Asap rokok mengandung berbagai macam radikal bebas, salah satu radikal

bebas yang memiliki reaktivitas tinggi dan paling berbahaya bagi tubuh adalah

reactive oxygen species (ROS). ROS merupakan radikal bebas yang dapat

menimbulkan stress oksidatif serta kerusakan oksidatif dengan cara memicu

kerusakan DNA, membran sel, protein dan lipid peroksida.9 Paparan asap rokok

dapat meningkatkan stress oksidatif bukan hanya melalui produksi ROS dalam tar

rokok dan asap, tetapi juga melalui penurunan sistem pertahanan antioksidan. 18

Kondisi stress oksidatif yang meningkat dapat diukur dengan menganalisis kadar

MDA serum yang merupakan produksi akhir yang paling stabil untuk dilakukan

pemeriksaan dari proses peroksidasi lipid yang disebabkan oleh adanya radikal

bebas.49

Pada penelitian ini pengukuran kadar MDA pada kelompok kontrol sehat

digunakan untuk mengetahui kadar MDA normal sehingga saat dibandingkan

dengan kelompok perlakuan akan diketahui adanya perbedaan peningkatan maupun

penurunan stress oksidatif yang terjadi. Dalam keadaan normal, peroksidasi lipid

didalam tubuh masih dapat diatasi oleh antioksidan alami/ endogen dalam tubuh

yaitu seperti pada proses katalase, superoxide dismutate (SOD) dan glutation

peroksiade.50

Pada saat hasil MDA dibandingkan dengan kelompok kontrol positif,

kelompok sehat memiliki kadar MDA yang berbeda secara signifikan. Kelompok

51
 52

kontrol positif memiliki kadar MDA yang tinggi dibandingkan dengan kelompok

sehat. Kadar MDA yang tinggi disebabkan oleh kelompok kontrol positif yang

diberikan paparan asap rokok tanpa ada pemberian antioksidan eksogen yaitu air

alkali. Penelitian yang dilakukan Nabel et al (2013) menunjukan bahwa kadar MDA

pada tikus wistar yang dipapar asap rokok lebih tinggi dibandingkan yang tidak

dipapar asap rokok.51 Penelitian yang sama juga dilakukan pada manusia, yaitu

pada penelitian Sibel et al (2011) menyatakan bahwasanya manusia yang terpapar

asap rokok memiliki kadar MDA plasma yang tinggi dibandingkan yang tidak

terpapar asap rokok.52

Kelompok perlakuan merupakan kelompok yang diberi paparan asap rokok

dan pemberian air alkali. Pada penelitian ini dilakukan dengan 2 konsentrasi yang

berbeda / bertingkat yang digunakan. Kelompok perlakuan dengan pemberian air

alkali dengan pH 8,5 dan konsentrasi pH air alkali 9,5 memiliki kadar MDA yang

berbeda secara signifikan terhadap kelompok kontrol sehat maupun kontrol positif.

Kadar MDA pada kelompok kontrol perlakuan lebih rendah dibandingkan

kelompok kontrol sehat maupaun kontrol positif, hal ini dimungkinkan karena

adanya pengaruh dari air alkali sebagai antioksidan yang berfungsi dapat

menghambat dan menetralisir terjadinya reaksi oksidasi yang melibatkan radikal

bebas.

Mekanisme hambatan dari antioksidan biasanya terjadi pada saat reaksi

insiasi atau propagasi pada reaksi oksidasi lemak atau molekul lainya didalam tubuh

dengan cara menyerap dan mentralisisr radikal bebas atau mendekomposisi

peroksida. Menetralisir yang dimaksud dilakukan dengan cara memberikan satu

 53

elektronnnya sehingga menjadi senyawa yang lebih stabil atau terjadi reaksi

terminasi dan reaksi reaksi dari radikal bebas tidak menyebabkan peningkatan

stress oksidatif pada sel.53 Disamping mencegah penghambatan terjadinya stress

oksidatif dan kerusakan jaringan sel, antioksidan juga berperan dalam menghambat

peningkatan produksi sitokin seperti interleukin-6 (II-6) atau TNF- a yang

merupakan sitokin proinflamasi atau peradangan yang apabila tidak terjadi

penghambatan akan terbentuk peningkatan peroksidasi lipid, adhesi molekuler dan

proliferasi otot halus yang menyebabkan penyakit kardiovaskuler dijangka

panjang.53,54

Pada analisa data uji beda didapatkan bahwasanya hasil kadar MDA yang

didapatkan pada kelompok kontrol sehat tidak berbeda signifikan dengan kelompok

perlakuan dengan pemberian air alkali dengan konsentrasi 8,5. Hal ini disebabkan

karena nilai signifikansi dari kedua kelompok tersebut didaptakan nilai sig 0,084

yang artinya nilai sig lebih besar dari p-value uji beda dan mengartikan bahwasnaya

kedua hasil kelompok tersebut dari rata rata keduanya mempunya hasil yang tidak

berbeda signifikan secara statistik. Dengan demikian pH air alkali 8,5 sudah secara

baik menurunkan kadar MDA serum untuk memiliki kadar MDA serum yang baik

pada kondisi normal.

 BAB VII

SIMPULAN DAN SARAN

7.1 SIMPULAN

Berdasarkan hasil penelitian pemberian air alkali pada tikus jantan

yang dipapar asap rokok dapat disimpulkan sebagai berikut:

1. Kadar MDA serum pada tikus meningkat dengan intervensi paparan asap

rokok

2. Air alkali dengan pH 8,5 dan 9,5 terbukti dapat menurunkan kadar MDA

serum pada tikus jantan galur wistar yang dipapar asap rokok.

3. Air alkali dengan pH 9,5 tidak menunjukan penurunan kadar MDA serum

yang lebih rendah secara signifikan dibandingkan air alkali dengan pH 8,5.

7.2 SARAN

1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang kadar pH yang optimal

sebagai pencegah terjadinya stress oksidatif dijangka panjang.
2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang efek samping pemberian air
alkali dalam jangka panjang
3. Pelu dilakukan penelitian lanjutan dengan pemberian cairan yang terkontrol
(sonde)
4. Perlu dilakukan penelitian dengan jangka waktu yang lebih lama untuk
menilai kefektifan jangka panjang dalam pengguanaan air alkali sebagai
penurun kadar radikal bebas.

54
 DAFTAR PUSTAKA

1. Angelo Dd, Ahluwalia Ib, Pun E, Yin S. Current Cigarette Smoking , Access
, And Purchases From Retail Outlets Among Students Aged 13 – 15 Years
— Global Youth Tobacco Survey , 45 Countries , 2013 And 2014.
2016;(Cdc).
2. Report Who, The On, Tobacco G. Monitoring Tobacco Use And Prevention
Policies. 2017.
3. Kemenkes R. Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas). Jakarta Badan Penelit Dan
Pengemb Kesehat. 2013;
4. Meilina T. ( Malondialdehyde ) Pada Tikus ( Rattus Norvegicus ) Jantan
Galur Wistar Yang Dipapar Asap Rokok. 2017;8(2):97–101.
5. Susanna D, Hartono B Fh. Penentuan Kadar Nikotin Dalam Asap Rokok.
Makara Kesehat [Internet]. 2010;(Print Issn 2356-3664):47-49. Available
From: Https://Doi/Org/10.7454/Msk.V7i2.208%0a%0a%0a
6. Rochmah Ww. Pengaruh Pemberian Sari Buah Kurma (Phoenix Dactylifera)
Terhadap Kadar Malondialdehid (Mda) Mencit Balb/C Yang Dipapar Asap
Rokok. Skripsi. 2017;Jember:Fakultas Farmasi Universitas Jember.
7. Studi P, Ilmu M, Kedokteran F, Islam U, Agung S. Pengaruh Pemberian
Ekstrak Bunga Rosella ( Hibiscus Sabdariffa ) Terhadap Kadar Trigliserida
, Kadar Kolesterol Total Dan Kadar Malondialdehid ( Mda ) Tikus Jantan (
Galur Wistar ) Hiperkolesterolemia Tesis Pernyataan Yang Bertanda Tangan
Dibawah Ini : 2018;
8. Murray, R.K., Granner, D.K., & Rodwell Vw. Biokimia Harper. Jakarta:
Buku Kedokteran Egc; 2009.
9. E. W. Oxidasi Biologi, Radikal Bebas, Dan Antioxidant. Maj Ilm Sultan
Agung. 2012;50(128).
10. Pengawas B, Dan O, Indonesia R. Badan Pengawas Obat Dan Makanan
Republik Indonesia. 2016;
11. Yohanes, A., Eka, Y. Penelitian H, Pengabdian Dan, Seri M. Pengaruh Air

55
 56

Alkali Terhadap Neovaskularisasi Tikus Galur Wistar ( Rattus Norvegicus ).

2017;205–10.
12. Hidayatullah R. Perbedaan Kadar Malondialdehida Serum Pada Perokok
Sebelum Dan Sesudah Pemberian Air Alkali. 2016;
13. Herdiani N, Afridah W. Efek Rosella Merah Kering Terhadap Kadar Mda
Serum. 2020;47–56.
14. Hendriani W Ps. Proses Berhenti Merokok Secara Mandiri Pada Mantan
Pecandu Rokok Dalam Usia Dewasa Awal. 2012;
15. Endang Setyaningsih. Konsumsi Oksigen Tikus Putih (Rattus Norvegicus
L.) Strain Wistar Yang Terdedah Asap Rokok - Berfilter Dan Tanpa Filter.
Pros Semin Nas Pendidik Sains. 2015;(Issn : 2407-4659):573–81.
16. Kusuma, Dani Ali; Yuwono, Sudarminto S.; Wulan Sn. Studi Kadar Nikotin
Dan Tar Sembilan Merk Rokok Kretek Filter Yang Beredar Di Wilayah
Kabupaten Nganjuk. Jurnal Teknologi Pertanian, 2012, 5.3. J Teknol
Pertanian Ub. 2012;5(3):151–5.
17. Nururrahmah. Pengaruh Rokok Terhadap Kesehatan Dan Pembentukan
Karakter Manusia. Pros Semin Nas. 2015;01(1):78.
18. Nesamony G, Peramaiyanr Nn Dkk. Antioxidants And Human Disease.
Elsevier [Internet]. 2014;436:332–47. Available From:
Https://Doi.Org/10.1016/J.Cca.2014.06.004
19. Christian Sirait R. Pengaruh Pemberian Ekstrak Jintan Hitam (Nigella
Sativa) Terhadap Kadar Mda Serum Tikus Sprague Dawley Setelah
Diberikan Paparan Asap Rokok. 2016;
20. Ahmed Rg, Incerpi S, Ahmed F, Gaber A. The Developmental And
Physiological Interactions Between Free Radicals And Antioxidant Defense
System : Effect Of Environmental Pollutants. 2013;3(13):74–111.
21. Fitria, Triandini R, C.Mangimbulude J, Karwur Ff. Merokok Dan Oksidasi
Dna. Sains Med. 2014;5(2):121–7.
22. Omiecinski, Curtis J. Et Al. Xenobiotic Metabolism, Disposition, And
Regulation By Receptors: From Biochemical Phenomenon To Predictors Of
Major Toxicities. Toxicol Sci. 2011;S49-S75.
 57

23. Komala Psr (Diponegoro U. Efek Fluvastatin Terhadap Selisih Jumlah

Leukosit, Neutrofil, Dan Alkali Fosfatase Serum Pada Tikus Wistar Sebelum
Dan Sesudah Paparan Asap Rokok. Eprints Undip [Internet]. 2011;7–17.
Available From: Http://Eprints.Undip.Ac.Id/31386/3/Bab_2.Pdf
24. Ambrose, John A. And Rsb. The Pathophysiology Of Cigarette Smoking
And Cardiovascular Disease: An Update. J Am Coll Cardiol.
2004;43(10):1731–7.
25. Mulianto N. Malondialdehid Sebagai Penanda Stres Oksidatif Pada Berbagai
Penyakit Kulit. Cermin Dunia Kedokt. 2020;
26. Ayala A, Muñoz Mf, Argüelles S. Lipid Peroxidation : Production ,
Metabolism , And Signaling Mechanisms Of Malondialdehyde And 4-
Hydroxy-2-Nonenal. 2014;2014.
27. Siswonoto S. Hubungan Kadar Malondialdehid Plasma Stroke Iskemik Akut
Correlation Of Plasma Malondyaldehyde With Program Pasca Sarjana
Program Pendidikan Dokter Spesialis I. 2008;1–116.
28. Seçkin Hy. Oxidative Stress Status In Patients With Melasma. Cutan Ocul
Toxicol [Internet]. 33(3):212-217. Available From:
Https://Doi.Org/10.3109/15569527.2013.834496
29. Halliwell, Barry; Gutteridge Jm. Free Radicals In Biology And Medicine.
Usa: Oxford University Press,; 2015.
30. Yasa Gp. Peranan Peroksidasi Lipid Pada Patogenesis Preeklamsia. Univ
Udayana. 2013;7–9.
31. Nabila R. Pengaruh Mentega Putih Terhadap Kadar Malondialdehid (Mda)
Hepar Pada Tikus Jantan Galur Wistar (Rattus Norvegicus). 2017;1:1–476.
32. Situmorang N, Utara Us, Utara S. Malondialdehyde ( Mda ). 2020;2(2).
33. Frijhoff J, Winyard Pg, Zarkovic N, Davies Ss, Stocker R, Cheng D, Et Al.
Clinical Relevance Of Biomarkers Of Oxidative Stress 1. 2015;23(14).
34. Spirlandeli Al, Deminice R, Jordao Aa, Preto R. Plasma Malondialdehyde
As Biomarker Of Lipid Peroxidation : E Ff Ects Of Acute Exercise. 2014;14–
8.
35. Nahwa Arkhaesi. Kadar Malondialdehyde (Mda) Serum Sebagai Indikator
 58

Prognosis Keluaran Pada Sepsis Neonatorum. 2008;

36. Rosa Mci K-Bj And K-Jl. Clinical Effect And Mechanism Of Alkaline
Reduced Water. J Food Drug Anal. 2012;1((20)):394–7.
37. Hayashi Bh. Benefits Of Alkaline , Ionized Water. 2010;2–5.
38. Ita Emilia Dm. Parameter Fisika, Kimia Dan Bakteriologi Terionisasi, Air
Minum Alkali 501p, Yang Diproduksi Mesin Kangen Water Leveluk Sd.
Sainmatika J Ilm Mat Dan Ilmu Pengetah Alam. 2019;16(1):67–73.
39. Edy Siswantoro, Nasrul Hadi Purwanto S. Efektivitas Konsumsi Air Alkali
Terhadap Penurunan Kadar Gula Darah Acak Pada Penderita Diabetes
Mellitus Tipe 2. J Keperawatan. 2018;11((1)):10–21.
40. Mistica R, Ignacio C, Kang T, Kim C, Kim S, Yang Y, Et Al. Anti-Obesity
Effect Of Alkaline Reduced Water In High Fat-Fed Obese Mice.
2013;36(7):1052–9.
41. Farmakologi B, Kedokteran F, Lampung U. Air Alkali Terionisasi
Pencegahan Termutakhir Timbulnya Kanker Ionized Alkaline Water As The
Latest Prevention Of Cancer Emergence. 2016;5(April).
42. Khushboo P, Lipsa S, Priti Y, Divya P, Kaenat S, Shivani P Et Al. Alkaline
Water : The Disease Fighting Water. World J Pharm Res. 2014;3(3):45–53.
43. Widyaningsih, Tri Dewanti, Novita Wijayanti And Nipn. Pangan
Fungsional: Aspek Kesehatan, Evaluasi, Dan Regulasi. Univ Brawijaya
Press. 2017;
44. Cirillo, Giuseppe, And Francesca Iemma Eds. Antioxidant Polymers:
Synthesis, Properties, And Applications. 2012.
45. Poljsak B, Šuput D, Milisav I. Achieving The Balance Between Ros And
Antioxidants : When To Use The Synthetic Antioxidants. 2013;2013.
46. Winarsi H. Antioksidan Alami Dan Radikal Bebas. Kanisius. 2012;20(C):2–
6.
47. Mulianto N. Malondialdehid Sebagai Penanda Stres Oksidatif Pada Berbagai
Penyakit Kulit. Cermin Dunia Kedokt. 2020;47(1):39–44.
48. Sastroasmoro, Sudigdo And Si. Dasar-Dasar Metodologi Penelitian Klinis.
Jakarta: Sagung Seto; 2011.
 59

49. Berawi Kn, Agverianti T. Efek Aktivitas Fisik Pada Proses Pembentukan
Radikal Bebas Sebagai Faktor Risiko Aterosklerosis Physical Activity
Effects On Free Radicals Development As Risk Factor Of Atherosclerosis.
2017;6:85–90.
50. Andiriyani Mm. Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Daun Bawang Mekah
( Eleutherine Americana Merr .) Terhadap Kadar Malondialdehyde ( Mda )
Tikus ( Rattus Norvegicus ) Wistar Jantan Pasca Paparan Asap Rokok
Naskah Publikasi Oleh : Melda Mery Andiriyani Program Studi Farma.
2014;
51. Nabel, A. A. M. And Jka. Garciniamangostana Linn. Pericarp Extract
Reduced Malondialdehyde (Mda) Level In Cigarette Smoke Exposed Rats.
Irjes. 2013;2(9):1–5.
52. Sibel D, Huseyin O, Handan I U, E, Oguzhan S Zs. Oxidative Stress In The
Lungs Associated With Tobacco Smoke Exposure. Clin Chem Lab Med.
2011;49(12).
53. Dr. Drs I Made Oka Adi Parwata Ms. Bahan Ajar Antioksidan.
2016;(April):1–54.
54. Salahuddin S, Prabhakaran D, Roy A. Pathophysiological Mechanisms Of
Tobacco-Related Cvd. Glob Heart [Internet]. 2012;7(2):113–20. Available
From: Http://Dx.Doi.Org/10.1016/J.Gheart.2012.05.003
 60

LAMPIRAN

Lampiran 1 : Ethical clearance

 61

Lampiran 2 : Surat Ijin Penelitian

 62

Lampiran 3 : Surat Ijin Penelitian

 63

Lampiran 4 : Determinasi hewan

 64

Lampiran 5 : Hasil pemeriksaan MDA dengan spektrofotometer

Standar kurva baku MDA

0,6 0,295
0,8 0,416
1,2 0,612 Standart Kurva Baku
1,4 0,713 2 y = 0,4508x + 0,0511
1,8 0,91 R² = 0,9924

Absorbansi
1,5
2 0,878
2,4 1,128 1
Series1
2,6 1,213 0,5 Linear (Series1)
3,4 1,598
0
0 1 2 3 4
konsentrasi (ppm)

Absorbansi sample
Kode sample Absorbansi kons.MDA
1.1 1,004 2,1
1.2 0,853 1,8
1.3 0,752 1,6
1.4 0,763 1,6
1.5 1,297 2,8
1.6 1,308 2,8
2.1 1,319 2,8
2.2 1,355 2,9
2.3 1,316 2,8
2.4 1,382 3,0
2.5 1,1 2,3
2.6 1,495 3,2
3.1 0,526 1,1
3.2 0,773 1,6
3.3 0,864 1,8
3.4 0,712 1,5
3.5 0,699 1,4
3.6 0,866 1,8
4.1 0,643 1,3
4.2 0,739 1,5
4.3 0,819 1,7
4.4 0,341 0,6
4.5 0,735 1,5
4.6 0,773 1,6
 65

Lampiran 6 : Hasil Analisis SPSS

LAMPIRAN OUTPUT

Tabel hasil uji normalitas data

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic Df Sig.
Residual for
.137 24 .200* .963 24 .495
kons_MDA
*. This is a lower bound of the true significance.
a. Lilliefors Significance Correction

Tabel hasil uji homogenitas data

Levene Statistic df1 df2 Sig.
1.778 3 20 .184

Tabel hasil uji data pengaruh perlakuan

Sum of Squares Df Mean Square F Sig.

Between Groups 7.928 3 2.643 16.682 .000

Within Groups 3.168 20 .158
Total 11.096 23

Tabel hasil uji data beda perlakuan

Multiple Comparisons
Dependent Variable:
95% Confidence Interval
Mean
Difference Lower
(I) kode_sampel (I-J) Std. Error Sig. Bound Upper Bound
Tukey HSD 1 2 -.71667* .22979 .026 -1.3598 -.0735
3 .58333 .22979 .084 -.0598 1.2265
4 .75000* .22979 .019 .1068 1.3932
2 1 .71667* .22979 .026 .0735 1.3598
3 1.30000* .22979 .000 .6568 1.9432
4 1.46667* .22979 .000 .8235 2.1098
3 1 -.58333 .22979 .084 -1.2265 .0598
2 -1.30000* .22979 .000 -1.9432 -.6568
4 .16667 .22979 .886 -.4765 .8098
4 1 -.75000* .22979 .019 -1.3932 -.1068
2 -1.46667* .22979 .000 -2.1098 -.8235
3 -.16667 .22979 .886 -.8098 .4765
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
 66

Lampiran 7 : Dokumentasi penelitian

LAMPIRAN DOKUMENTASI

Cleaning mesin pada awal Tanda ( ) Atur mesin sesuai kadar alkali yang diperlukan
sebelum digunakan dan setelah
di gunakan

Proses pembuatan air alkali pada mesin Proses pembuatan air alkali pada mesin
Levelux Kangen Water JR II , saluran Levelux Kangen Water JR II , saluran
air berisi air teroksidasi siap diminum air berisi air terionisasi
sebagai air dengan ber pH alkal
 67

Tes pH dengan pH tester tetes

Tes pH dengan pH meter

Dilakukan penampungan air pada

tabung untuk dibawa ke tempat
perlakuan pada tikus
 68

Penggantian sekam tiap 2 hari

Tikus di adaptasi selama 7 hari

Pengukuran pH saat sebelum diberikan pada hewan coba

Pemindahan tikus dari kandang individu ke 1 kandang

untuk dimasukan di kandang pengasapan
 69

Proses intervensi tikus dengan pemberian asap rokok

dengan mesin aerator

Saat tikus diberikan perlakuan pengasapan rokok pada kandang tertutup

 70

Pengukuran air minum secara berkala pada masing masing tube agar pemberian tetap terkontrol

Pengambilan darah melalui medial canthus orbitalis menggunakan mikrohematokrit

Darah didiamkan 15 menit pada ependorf Sentrifuge sampel darah untuk didpatkan
sampel serum
 71

Serum yang didapatkan setelah sentrifuge Pengambilan serum dengan mikropipet

Pemberian tanda pada sampe Media transport menggunakan cooler bag

 72

Serum dinginkan pada suhu ruang Serum diambil 1 ml ke tabung reaksi

Serum pada tabung Penambahan TCA 20 %

Terjadi reaksi setelah di berikan TCA Penambahan TBA

 73

Kondisi sampel saat dimasukan ke alat waterbath

Alat waterbath untuk memanasakan sampel

Kondisi sampel setelah 45 menit dipanaskan

Sampel yang telah dipanaskan disentrifuge Kondisi sampel setelah 45 menit dipanaskan

3000 rpm
 74

Supernatan yang terbentuk pada kelompok 1 Supernatan yang terbentuk pada kelompok 2

Supernatan yang terbentuk pada kelompok 3 Supernatan yang terbentuk pada kelompok 4

Supernatan diambil sebanyak 1 ml dimasukan dalam kuvet dan diukur dengan

spektrofotometer dengan panjang gelombang 530 nm.
 75

Lampiran 8 : Biodata diri

CURRICULUM VITAE (CV)

Nama : Dina Fulaisifa
TTL : Kebumen, 8 Mei 1999
Jenis Kelamin : Perempuan
TB/BB : 160/60
Agama : Islam
Alamat Asal : Desa Kawedusan rt 03/rw01 Kec Kebumen Kab Kebumen Jawa
Tengah
Alamat tinggal : Jln Manyaran gunung pati, nongko sawit rt 02/ rw 04
No telp : 082225159656
Email : fulaisifadina@gmail.com

RIWAYAT PENDIDIKAN
TK Raudhatul Athfal Al Islam 2004 - 2006
SD N Kawedusan Kebumen 2006 - 2012
SMP Al Muayyad Solo 2012 - 2015
Boarding School MAN 1 Solo 2015 - 2017
Fakultas Kedokteran Unwahas Semarang 2017 – sekarang

PENGALAMAN ORGANISASI

1. Sekretaris umum Ikatan Pelajar Ma'had Almuayyad SMP 2012-2013

2. Ketua Badan Pengawas umum Ikatan Pelajar Ma'had Almuayyad SMP 2013-2014

3. Pengurus Harian Organisasi Pelajar Boarding School MAN 1 Surakarta 2015-2016

4. Ketua umum Tim Bantuan Medis Axon FK UNWAHAS 2020- 2021