Tissue Microtomy

Principle and Procedure

Dinna Rakhmina, S.Si., M.Sc

 01
Introduction
Histoteknologi
 Introduction
● Setelah embedding jaringan dan
penyiapan blok, langkah
selanjutnya adalah mikrotom.
● Kata "mikrotom" berasal dari
bahasa Yunani. Mikros artinya kecil
dan temnein artinya memotong.
● Jadi kata "microtomy" berarti
memotong jaringan menjadi bagian
yang tipis.
● Untuk pemeriksaan mikroskopis,
diperlukan potongan tipis jaringan
dengan mikrotom.
 02
Mikrotom

Histoteknologi
 Mikrotom
● Rotary microtome adalah mikrotom yang
paling umum digunakan di laboratorium rutin.
● Pisau pemotong disimpan dalam posisi
horizontal, dan balok yang berisi jaringan
bergerak naik turun dengan bantuan
pegangan putar yang dipasang dengan
mikrotom.
● Pada setiap putaran 360° pegangan roda,
balok bergerak ke bawah diikuti ke atas, dan
jaringan dipotong menjadi pita tipis.
● Mikrotom ini memiliki opsi semiotomatis atau
otomatis dengan penyesuaian dan kontrol
pergerakan balok dan sudut pisau.
 Kelebihan & Kekurangan
Rotary Microtome
Kualitas potongan yang baik dimungkinkan
Mahal.
pada potongan setipis 2–3 μm.

Mikrotom putar otomatis yang berat dan stabil

mengurangi bahaya kesehatan dan Tidak cocok untuk memotong balok besar.
memberikan potongan dengan kualitas terbaik.

Pisau menghadap ke atas sehingga dapat

Produksi pita jaringan yang baik.
berbahaya bagi staf teknis

Berbagai jenis jaringan yang mudah dipotong:

keras, rapuh, biopsi kecil, dll.
 Tipe Pisau Mikrotom

Digunakan untuk
mikrotom goyang- Digunakan untuk
Bergetar selama jaringan keras
pemotongan

Pisau yang sangat

tajam dan digunakan Paling umum
untuk memotong digunakan
jaringan lunak
 Kelebihan & Kekurangan
Pisau Mikrotom Disposable
Tidak terlalu kaku seperti pisau biasa,dan
Mudah diganti dalam hitungan detik.
karena itu efek getaran dapat terlihat.

Tidak perlu diasah

Biaya keseluruhan sistem pisau sekali pakai

rendah karena tidak perlu pengasah pisau atau
bubuk abrasif untuk mengasah pisau.

Berbagai jenis jaringan yang mudah dipotong:

keras, rapuh, biopsi kecil, dll.
Kemiringan Sudut Pisau
 Yg Mempengaruhi Cutting

Suhu Konsistensi Jar Sudut blok & pisau

Menurunkan suhu Jaringan lunak dipotong Membantu

memfasilitasi lebih lambat daripada kelancaran aliran pita
pemotongan blok jaringan keras.
 Instrumen Utk Memotong
Blok Parafin

Blok parafin
Waterbath
Cold plate (Suhu air 40–50°C
Mikrotom atau 5–10°C lebih
rendah dari titik leleh
paraffin)

Rak slide Kuas/Brush

Hotplate
Tahap Pemotongan Blok Parafin
Cooling the block

 Trimming (potong tebal) jaringan diperlukan

untuk meng-ekspose potongan jaringan di dalam
lilin parafin untuk dipotong.
 Blok dipasang di chuck mikrotom, dan parafin
dipotong sampai jaringan terekspose sepenuhnya.
 Hati-hatian saat trimming agar tidak memotong
jaringan secara berlebihan karena hal ini dapat
menghasilkan berbagai perubahan artifaktual.
 Trimming untuk jaringan berukuran kecil maka
ukuran ketebalan trimming sekitar 15-25µm
sedangkan jaringan berukuran besar sekitar 50µm
Trimming Jaringan

 Setelah trimming awal, balok

didinginkan selama 15–20 menit.
 Hal ini akan membantu menjaga
konsistensi parafin dan jaringan dan
membantu memudahkan dalam
pemotongan.
Pemotongan Yang Tepat

 Blok dipasang di chuck mikrotom. Permukaan

pemotongan balok harus sejajar dengan pisau.
 Sudut jarak bebas harus hanya 2–5° untuk
mendapatkan penampang yang baik.
 Blok jaringan dipotong dengan gerakan lembut,
halus dan lambat. Pita potongan jaringan
dihasilkan.
 Ujung pita dipegang dengan tangan dan bagian
ujung pita dilepas dari ujung pisau dengan kuas.
 Pasang ukuran mikrotom (2 - 4 mikron) 
potong tipis
Floating Pita Jaringan

 Pita jaringan diapungkan di waterbath, dan

tahap ini membuat jaringan menjadi rata
dan menghilangkan kerutan pada jaringan.
 Dengan bantuan forceps, masing-masing
bagian dipisahkan satu sama lain.
 Suhu air waterbath harus selalu dijaga di
bawah titik leleh lilin parafin. Jika terjadi
variasi suhu di waterbath, gelembung
udara dapat terbentuk yang dapat merusak
jaringan.
Picking up the tissue

 Slide ditempatkan secara vertikal di dalam

penangas air di depan jaringan, dan ketika
jaringan disentuh, slide ditarik secara
vertikal dari air.
 Proses pengambilan jaringan harus lembut
dan halus.
 Untuk mencegah tercampurnya setiap
potongan maka penangas air harus segera
dibersihkan setelah memotong setiap blok
parafin.
Drying the section

 Slide yang berisi potongan jaringan

sebelum diletakkan di rak slide
letakkan terlebih dahulu di hotplate.
 Suhu hotplate diatur sedikit lebih
tinggi dari titik leleh parafin.
 Meletakkan dihotplate jangan terlalu
lama, cukup sampai lilin paraffin
meleleh dan bersih dari slide
Mikrotom
Hal Perlu Diperhatikan

1. Pakai pisau baru dan berkualitas

2. Optimasi pemakaian sudut pisau
3. Trimming blok perlahan
4. Hindari kerusakan akibat suhu terlalu
rendah
5. Dinginkan blok sebelum dipotong
6. Potong blok secara perlahan
1. Pakai pisau baru dan berkualitas
2. Optimasi pemakaian sudut pisau
3. Trimming blok perlahan
4. Hindari kerusakan akibat suhu terlalu
rendah
5. Dinginkan blok sebelum dipotong
6. Potong blok secara perlahan
Hal Perlu Diperhatikan
1. Pakai air bersih
2. Pastikan slaid bersih
3. Hindari kontaminasi antar spesimen
4. Hindari kontaminasi dari teknisi
5. Kerjakan blok satu per satu
6. Cek suhu air
7. Hindari kerutan pada potongan
8. Hindari kondisi over-expanding pada potongan
9. Jangan rusak potongan
10.Perlahan pilih potongan yang dikehendaki
11.Hindari terjadinya gelembung
12.Hati-hati ketika pengangkatan potongan
1. Pakai air bersih
2. Pastikan slaid bersih
3. Hindari kontaminasi antar spesimen

jaringan Otot jantung

jaringan
tiroid
4. Hindari kontaminasi dari teknisi
5. Kerjakan blok satu per satu
6. Cek suhu air
7. Hindari kerutan pada potongan
8. Hindari kondisi over-expanding pada
potongan
9. Jangan rusak potongan
10. Perlahan pilih potongan yang
dikehendaki
11. Hindari terjadinya gelembung
12. Hati-hati ketika pengangkatan
potongan
Hal Perlu Diperhatikan

1. Drainase sebelum keringkan

2. Monitor suhu pengeringan
3. Keringkan sesuai waktu pengeringan

Section Drying
1. Drainase sebelum keringkan
2. Monitor suhu pengeringan
3. Keringkan sesuai waktu pengeringan
Lakukan Analisis Pada Jaringan
Berikut !
Lakukan Analisis Pada Jaringan
Berikut !
Lakukan Analisis Pada Jaringan
Berikut !
Lakukan Analisis Pada Jaringan
Berikut !
Lakukan Analisis Pada Jaringan
Berikut !
SEKIAN
Lakukan Analisis Pada Jaringan
Berikut !

Robek di jaringan karena ujung

pisau yang tidak rata
 Lakukan Analisis Pada Jaringan
Berikut !

Lubang besar di jaringan karena

pemrosesan yang buruk
Lakukan Analisis Pada Jaringan
Berikut !

Beberapa gelembung udara

menyebabkan rusak jaringan.
Gelembung udara dihasilkan
karena suhu yang tidak terkendali
di waterbath. Karakteristik robekan
jaringan tidak beraturan
 Lakukan Analisis Pada Jaringan
Berikut !

Artefak jaringan yang membeku

karena segera memasukkan
jaringan dari lemari es ke formalin.
Terdapat sekat-sekat ruang di
antara jaringan akibat pencairan
kristal es
Lakukan Analisis Pada Jaringan
Berikut !

Pola pewarnaan yang tidak rata

karena deparafinisasi jaringan
yang buruk