SODIUM DODECYL SULFATE

POLYACRILAMIDE GEL
ELCTROFORESIS (SDS PAGE)
SDS-PAGE

SDS-PAGE adalah Teknik untuk memisahkan

polipeptida pada protein berdasarkan kemampuannya
untuk bergerak dalam arus listrik.

Tujuan: Mengidentifikasi suatu protein berdasarkan berat

molekulnya
SDS (SODIUM DODECYL SULFATE)

SDS berfungsi untuk

mendenaturasi protein
karena SDS bersifat
sebagai deterjen yang
mengakibatkan ikatan
dalam protein terputus
membentuk protein yang
dapat terelusi dalam gel.
 GEL POLIAKRILAMID
Saat poliakrilamid berbentuk gel, maka akan terbentuk pori-pori
kecil yang memungkinkan molekul bergerak. Poliakrilamid
merupakan medium yang tepat untuk memisahkan protein berdasar
ukuran karena ukuran pori-pori yang kecil memungkinkan unuk
memperlambat gerakan molekul.
Keunggulan Poliakrilamid Dibanding Gel Lainnya

Tidak bereaksi dengan sampel

Tidak membentuk matriks dengan sampel

Tidak menghambat pergerakan dari sampel yang

memungkinkan pemisahan protein secara sempurna

Mempunyai daya pemisahan yang cukup tinggi

 PRINSIP SDS-PAGE
Larutan protein yang akan dianalisis dicampur dengan SDS terlebih dahulu, SDS merupakan
detergent anionik yang apabila dilarutan molekulnya memiliki muatan (-). Muatan (-) SDS akan
mendenaturasi sebagian besar struktur kompleks protein, dan secara kuat tertarik ke arah anoda
bila ditepatkan disuatu medan listrik

Pada saat arus listrik diberikan, molekul bermigrasi melalui gel poliakrilamid, menuju kutub
positif (anoda), molekul yang kecil akan bermigrasi lebih cepat daripada yang besar, sehingga
akan terjadi pemisahan.

Pada proses elektroforesis dengan SDS dilakukan di dalam gel polyakrilamid, molekul
protein akan melewati pori-pori gel, sehingga kemudahan pergerakan melalui pori tergantung
pada diameter molekul
Pada proses elektroforesis dengan SDS dilakukan di dalam gel polyakrilamid, molekul
protein akan melewati pori-pori gel, sehingga kemudahan pergerakan melalui pori
tergantung pada diameter molekul

Molekul lebih besar akan tertahan dan akibatnya bergerak lebih lambat. Karena
molekul terdenaturasi, diameternya tergantung dari berat molekulnya

Dengan demikian SDS PAGE akan memisahkan molekul berdasarkan BM-nya

 FAKTOR YANG MEMPENGARUHI KECEPATAN MIGRASI

• Kekuatan medan listrik

• Muatan ionik dari molekul yang dipisahkan
• Ukuran molekul yang dipisahkan
• Bentuk molekul yang dipisahkan
https://www.youtube.com/watch?v=i_6y6Z5UvwE&feature=youtu.be
 Cara Kerja

Pembuatan gel Pembuatan gel

pemisah (separating pengumpul (stacking Pemanasan sampel
gel) gel / upper gel)

Gel direndam dalam

Dilarutkan. Runing
Gel direndam dalam larutan destaining
pada plate 1 dan plate
larutan staining untuk (Penghilangan warna)
2 dengan arus
proses pewarnaan untuk proses
tegangan liistrik
pencucian
Alur kerja SDS-Page
TERIMA
KASIH