BAB II

PEMBAHASAN

A. Kromatografi Lapis Tipis

1. Prinsip Kromatografi Lapis Tipis
a. Nilai Rf
b. Menghitung Nilai Rf
Penghitungan nilai Rf berguna untuk mengidentifikasi senyawa
yang ada. Pengukuran dilakukan pada jarak yang ditempuh pelarut
dan jarak yang ditempuh setiap titik. Ketika pelarut mendekati bagian
atas plate, plate dikeluarkan dari gelas dan posisi pelarut ditandai
dengan garis lain sebelum menguap. Ilustrasi plate seperti pada
gambar1.

Jarak yang
Jarak yang
ditempuh
ditempuh
pelarut
komponen

Gambar 1. Totol sebagai komponen senyawa

Nilai Rf untuk setiap titik dapat dihitung dengan rumus:
Jarak yang ditempuh komponen
Rf =
jarak yang ditempuh pelarut

Jika dilakukan pengulangan percobaan ini dengan kondisi yang sama

(suhu, sistem pelarut, adsorben, ketebalan adsorben, jumlah material
totol/titik tidak berubah) maka nilai Rf akan selalu sama. Karena
faktor tersebut sulit untuk dipertahankan jika dilakukan pengulangan
percobaan maka digunakan nilai Rf relatif.

Suatu senyawa yang memiliki polaritas rendah akan memiliki nilai Rf

yang lebih besar dari senyawa yang lebih polar pada plate yang sama.
Jika dua substan memiliki nilai Rf yang sama, mereka cenderung (tapi
tidak pasti) senyawa yang sama dengan syarat dalam plate yang sama.

c. Menyiapkan Plate
Plate untuk kromatografi lapis tipis biasanya diperjual-belikan.
Plate biasanya disiapkan dengan mencampur adsorben, seperti silika
gel, dengan sejumlah kecil pengikat lembam seperti kalsium sulfat
(gipsum) dan air. Campuran ini dioleskan seperti bubur tebal pada
lembar yang tidak reaktif, biasanya kaca, aluminium foil, atau plastik.
 Hasilnya dikeringkan dan diaktifkan dengan pemanasan dalam oven
selama 30 menit pada suhu 1100. Ketebalan lapisan adsorben
biasanyanya sekitar 0,1-0,25 mm dengan tujuan untuk analisa, dan
sekitar 0,5-2,00 untuk persiapan kromatografi lapis tipis. Gambar 2.
merupakan langkah pembuatan plate.

Gambar 2. langkah pembuatan plate

d. Memberi Totol pada Plate

Akhir lapisan pada totolan ditempatkan di larutan encer, larutan
akan naik sesuai gaya kapiler. Menyentuh plate sebentar digaris awal.
Memungkinkan pelarut men guap dan totolan yang sama akan
terbentuk lagi. Hindari totolan yang terlalu banyak karena akan
memperburuk kualitas pemisahan. Totolan seharusnya jauh dari tepi
dan dari totol satu dengan yang lain.

e. Lokasi Totol
Posisi zat terlarut yang dipisahkan oleh TLC dapat ditemukan dengan
berbagai metode. Substan berwarna dapat dilihat secara langsung jika
dilihat pada fase diam, sementara zat tidak berwarna dapat dideteksi
hanya dengan membuat mereka menjadi terlihat dengan memanfaatkan
beberapa agen penyemprotan, yang menghasilkan daerah berwarna di
wilayah yang mereka tempati. Pada kromatografi lapis tipis dapat
digunakan penyemprotan untuk totol yang tak terlihat:
1) Menjadi anorganik murni di alam, agen korosif juga dapat
digunakan untuk menyemprot totol yang tidak terlihat.
2) Encerkan larutan kalium dikromat dalam asam sulfat pekat.
Dalam prosesnya kalium dikromat (kuning) direduksi menjadi
krom sulfat (hijau) oleh sebagian senyawa organik.
 3) Uap sulfur dioksida, dihasilkan pada penguapan asam sulfur,
karakter senyawa organik dan membuat totol menjadi gelap.
4) Larutan kalium permanganat
5) Uap iodin

f. Larutan Pengembang
Pemilihan pelarut yang sesuai tergantung pada: Sifat zat, dan adsorben
yang digunakan di plate. Sebuah pelarut pengembang seharusnya tidak
bereaksi dengan substan pada capuran. Pelarut yang bersifat
karsinogenik atau pelarut yang berbahaya bagi lingkungan sebaiknya
dihindari. Secara umum pelarut pengembang yang digunakan adalah
petroleum eter, karbon tetraklorida, piridin, glikol, gliserol, dietil eter,
formamida, metanol, etanol, aseton, dan n-propanol.

g. Fase Gerak
Untuk kromatografi silika gel, fase gerak adalah pelarut organik
atau campuran pelarut organik. Fase gerak bergerak melewati
permukaan silika gel mengangkut analit dari partikel fase diam.
Namun, molekul analit hanya bergerak bebas dengan pelarut jika tidak
terikat pada permukaan silica gel. Sehingga, sebagian kecil waktu
analit terikat pada permukaan silika gel relatif terhadap waktu yang
habis dalam larutan menentukan faktor retensi dari anilit. Kemampuan
suatu analit untuk mengikat ke permukaan silika gel di pelarut tertentu
atau campuran pelarut dapat dilihat dari dua hal. Pertama, kelompok
polar dalam pelarut dapat bersaing dengan analit untuk mengikat pada
permukaan silica gel. Oleh karena itu, jika pelarut yang digunakan
sangat polar, maka akan berinteraksi kuat dengan permukaan silika gel
dan akan meninggalkan beberapa partikel pada fase stasioner bebas
untuk mengikat dengan analit. Polaritas pelarut yang akan digunakan
untuk kromatografi dapat dievaluasi dengan memeriksa dielektrik
konstan dan momen dipol pelarut. Kedua, kemampuan ikatan hidrogen
dari pelarut juga harus diperhatikan. Misalnya metanol adalah donor
ikatan hidrogen yang kuat dan sangat akan menghambat kemampuan
mereka semuka tapi analit yang paling polar mengikat permukaan
silica gel.

h. Mengembangkan plate
Sebuah pelat kromatogafi lapis tipis dapat dikembangkan dalam gelas
atau botol tertutup. Menempatkan sejumlah kecil pelarut (fase gerak)
dalam wadah. Tempat kecil larutan yang mengandung sampel
diterapkan ke plate, sekitar satu sentimeter dari dasar. Plate tersebut
kemudian dicelupkan ke pelarut yang sesuai, seperti heksana atau etil
asetat dan ditempatkan dalam wadah tertutup. Tepi bawah piring
kemudian dicelupkan ke dalam pelarut. Pelarut bergerak naik ke atas
plate oleh gaya kapilaritas dan bertemu campuran sempel, yang
terlarut dan dibawa keatas oleh pelarut. Senyawa yang berbeda dalam
campuran sempel bergerak berbeda karena daya tarik yang berbeda
pada fase diam, dan juga disebabkan perbadaan kelarutan dalam
pelarut. pelarut non-polar akan memaksa senyawa non-polar
ke atas piring, karena senyawa larut dengan baik dan tidak berinteraksi
dengan fase diam yang polar. Memungkinkan pelarut untuk naik ke
atas plate sampai ~ 1 cm dari atas. Mengambil plate dan menandai
batas pelarut segera. Jangan biarkan pelarut berjalan di tepi plate.
Selanjutnya, biarkan pelarut menguap.