LAPORAN PRAKTIKUM

Mikrobiologi
“PENGECATAN GRAM”

Oleh:
Nama : Novita Sari
NIM : 20180311022

Kelompok : 2
Nama Ketua : Intan Kemala Dewi
Anggota : 1. Novita Sari (2018-0311-022)
2. Fitri Astuti
3. Sella Meiva Nikita

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS ILMU ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS ESA UNGGUL
2019
2
 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur kami panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa karena berkat rahmat
dan hidayah-Nya kami dapat menyelesaikan penulisan Laporan ini. Tujuan dari pembuatan
Laporan Mikrobiologi adalah Untuk mendapatkan nilai yang baik dan menyelesaikan tugas di
mata pelajaran Mikrobiologi di Universitas Esa Unggul.
Banyak kesulitan yang dialami dalam proses pembuatan laporan ini. Namun, berkat saran
serta bantuan dari berbagai belah pihak, akhirnya dapat mengatasi kesulitan tersebut dengan
baik. Maka didalam kesempatan ini selaku penulis ingin menyampaikan terimakasih yang tulus
kepada pihak-pihak yang berperan dalam memberikan saran serta bantuannya secara langsung
maupun tidak langsung, Kepada :
1. Dr. Sri Teguh Rahayu, M.Farm.,.Apt. selaku Ketua Program Studi Farmasi serta segenap
jajarannya yang telah memberikan kemudahan – kemudahan baik berupa moral maupun
materil selama mengikuti pendidikan di Universitas Esa Unggul.
2. Inherni Marti Abna, S.Si, M.Si selaku Dosen Mata Kuliah Mikrobiologi yang telah
meluangkan waktu tenaga dan pikiran dalam pelaksanaan bimbingan, pengarahan,
dorongan dalam rangka penyelesaian penyusunan laporan ini.
3. Rekan-rekan Farmasi Tahun 2018 di Universitas Esa Unggul dan Secara khusus penulis
menyampaikan terima kasih kepada keluarga tercinta yang telah memberikan dorongan
dan bantuan serta pengertian yang besar kepada penulis. Semoga Allah SWT,
memberikan balasan atas kebaikan yang telah diberikan kepada penulis.

Penulis menyadari laporan ini masih jauh dari kata sempurna oleh karena itu, kritik dan
saran yang sifatnya konstruktif sangat diharapkan oleh penulis. Akhirnya penulis berharap
semoga laporan ini dapat bermanfaat bagi semua pihak.

Jakarta, 04 November 2019

Penulis
( Novita Sari )

i
 DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR..................................................................................................... i
DAFTAR ISI.................................................................................................................. ii
BAB I PENDAHULUAN.............................................................................................. 1
1.1.Pelaksanaan Waktu dan Tempat................................................................................ 1
1.2.Tujuan ...................................................................................................................... 1
1.3 Landasan Teori........................................................................................................... 1
BAB 2 ALAT DAN CARA KERJA............................................................................ 8
2.1. Alat ........................................................................................................................ 8
2.2. Cara Kerja..................................................................................................................8
BAB 3. HASIL & PEMBAHASAN...............................................................................9
BAB 4. PENUTUP.......................................................................................................14
Daftar Pustaka..............................................................................................................15

ii
 BAB 1

PENDAHULUAN

1.1 Pelaksanaan Waktu dan Tempat

Pelaksanaan Praktikum Mata Kuliah Mikrobiologi berlokasi di Gedung holix
lantai 2 bertepatan pada kampus Universitas Esa Unggul Kebun Jeruk. Pada Tanggal
Senin, 14 Oktober 2019 Pukul 07.30-10.00. Dengan judul praktikum “Pengecatan Gram”.

1.2. Tujuan Praktikum

Pengecatan Gram : Melihat bentuk sel, Rangkaian sel, Sifat gram (gram negative dan
gram positif).

1.3 Landasan Teori

Pewarnaan gram atau metode gram adalah suatu metode empiris untuk
membedakan spesies bakteri mejadi dua kelompok besar, yaitu gram positif dan gram
negatif, berdasarkan sifat kimia dan fisik dinding sel mereka. Metode tersebut diberi
nama berdasarkan penemunya, ilmuwan DenmarkHans Christian Gram (1853-1938)
yang mengembangkan teknik tersebut pada tahun 1884 untuk membedakan antara
Pneumococcus dan bakteri Klebsiella Pneumonia (Karmana,2008).

Pewarnaan gram dibagi menjadi dua hasil yaitu gram positif dan gram negatif,
tergantung dari reaksi dinding sel terhadap tinta safranin atau Kristal violet. Contoh dari
bakteri gram positif ialah Clostridium perfringens, Staphylococcus aureas, sedangkan
bakteri gram negatif misalnya adalah Eschericia Coli.

Beberapa bakteri tidak terwarnai dengan pewarnaan gram, misalnya

Mycobacterium sp, karena dinding selnya mengandung banyak lipid, sehingga digunakan
pewarnaan tahan asam untuk mengidentifikasinya.Pada pewarnaan tersebut sel bakteri
akan berwarna merah tetapi sel jaringanakan berwarna hijau (James, 2002).

1
 Prinsip-prinsip pewarnaan gram yaitu :

1.Teknik Pewarnaan Diferensial

Prosedur pewarnaan yang menampilkan perbedaan diantara sel-selmikroba atau bagian-

bagian sel mikroba (Pelczar dan Chan, 2007).

2.Pewarnaan Gram

Pewarnaan gram atau metode gram adalah suatu metode empiris untuk membedakan
spesies bakteri menjadi dua kelompok besar gram-positif dan gram-negatif berdasarkan
sifat kimia dan fisik dinding sel bakteri (Karmana, Oman, 2008).

3.Zat Warna

Zat pewarna adalah garam yang terdiri atas ion positif dan ion negatif,salah satu di
antaranya berwarna (Volk & Wheeler, 1993).

Berbagai macam tipe morfologi bakteri (kokus, basil, spirilum, dansebagainya)

dapat dibedakan dengan menggunakan pewarna sederhana. Istilah ”pewarna sederhana”
dapat diartikan dalam mewarnai sel-sel bakteri hanya digunakan satu macam zat warna
saja. Kebanyakan bakteri mudah bereaksi dengan pewarna-pewarna sederhana karena
sitoplasmanya bersifat basofilik (suka akan basa) sedangkan zat-zat warna yang
digunakan untuk pewarnaan sederhana umumnya bersifat alkalin(komponen
kromoforiknya bermuatan positif). Faktor-faktor yang mempengaruhi pewarnaan bakteri
yaitu fiksasi, peluntur warna , substrat, Intensifikasi pewarnaan dan penggunaan zat
warna penutup. Suatu preparat yang sudah meresap suatu zat warna, kemudian dicuci
dengan asam encer maka semua zat warna terhapus. sebaliknya terdapat juga preparat
yang tahan terhadap asam encer. Bakteri-bakteri seperti ini dinamakan bakteri tahan
asam, dan hal ini merupakan ciri yang khas bagisuatu spesies (Dwidjoseputro, 1994).

Teknik pewarnaan warna pada bakteri dapat dibedakan menjadi empat macam
yaitu pengecatan sederhana, pengecatan negatif, pengecatan diferensial dan pengecatan
struktural. Pemberian warna pada bakteri atau jasad- jasad renik lain dengan
menggunakan larutan tunggal suatu pewarna pada lapisan tipis, atau olesan, yang sudah
difiksasi, dinamakan pewarnaan sederhana. Prosedur pewarnaan yang menampilkan
2
perbedaan di antara sel-sel microbe atau bagian-bagian sel microbe disebut teknik
pewarnaan diferensial. Sedangkan pengecatan struktural hanya mewarnai satu bagian dari
sel sehingga dapat membedakan bagian-bagian dari sel. Termasuk dalam pengecatan ini
adalah pengecatan endospora, flagella dan pengecatan kapsul (Waluyo, 2010).

Pewarnaan gram (GS) adalah teknik pewarnaan utama yang digunakan untuk
pemeriksaan mikroskopis bakteri. Bakteri yang tidak diketahui dapat diklasifikasikan
menjadi Gram-positif atau Gram negative oleh GS, di mana kehilangan warna adalah
perangkap utama, karena beberapa bakteri gram positif mengalami kehilangan warna
lebih cepat,dan salah diidentifikasi sebagai gram negatif (Chandra and Mani, 2011).

Perbedaan warna pada bakteri gram positif dan gram negative menunjukkan
bahwa adanya perbedaan struktur dinding sel antara kedua jenis bakteri tersebut. Bakteri
gram positif memiliki struktur dinding seldengan kandungan peptidoglikan yang tebal
sedangkan bakteri gram negatif memiliki struktur dinding sel dengan kandungan lipid
yang tinggi (Fitri dan Yasmin, 2011).

Bakteri memiliki dinding sel terdiri dari peptidoglikan. Dinding selini

memberikan kekakuan kesel, dan perlindungan dari lisis osmotik dalam solusi encer.
Bakteri gram positif memiliki dinding sel mesh tebal, bakterigram negatif memiliki
dinding sel tipis dan membran luar bilayerfosfolipid (Davies et al. 1983).

Zat warna yang digunakan dalam pewarnaan bersifat basa dan asam. Pada zat
warna basa bagian yang berperan dalam memberikan warna disebut kromofor dan
memiliki muatan positif. Sebaliknya, pada zat warnaasam bagian yang berperan
memberikan zat warna mempunyai muatan negatif zat warna basa lebih banyak
digunakan karena muatan negatif banyak ditemukan di dinding sel, membran sel dan
sitoplasma, sewaktu proses pewarnaan muatan positif pada zat warna basa akan berkaitan
dengan muatan negatif dalam sel, sehingga mikroorganisme lebih jelas terlihat
(Dwidjoseputro, 2005).

Zat warna asam yang bermuatan negatif lazimnya tidak digunakan untuk
mewarnai mikroorganisme, namun biasanya dimanfaatkan untuk mewarnai latar
belakang sediaan pewarnaan. Zat warna asam yang bermuatan negatif ini tidak dapat

3
berkaitan dengan muatan negatif yang terdapat padastruktur sel. Kadangkala zat warna
negatif digunakan untuk mewarnai bagian sel yang bermuatan positif, perlu diperhatikan
bahwa muatan dan daya ikatzat warna terhadap struktur sel dapat berubah bergantung
pada pH sekitarnya sewaktu proses pewarnaan (Dwidjoseputro, 2005).

Prosedur pewarnaan yang menghasilkan pewarnaan mikroorganisme disebut

pewarnaan positif dalam prosedur pewarnaan ini dapat digunakan zat warna basa yang
yang bermuatan positif maupun zat warna asam yang bermuatan negatif. Sebaliknya pada
pewarnaan negatif latar belakang disekeliling mikroorganisme diwarnai untuk
meningkatkan kontras dengan mikroorganisme yang tak berwarna. Pewarnaan mencakup
penyiapan mikroorganisme dengan melakukan preparat ulas (Dwidjoseputro, 2005).

Prinsip pewarnaan Gram adalah kemampuan dinding sel terhadap zatwarna dasar
(Kristal violet) setelah pencucian alkohol 96%. Bakteri Gram positif terlihat berwarna
ungu karena dinding selnya mengikat Kristal violetlebih kuat, sedangkan sel Gram
negatif mengandung lebih banyak lipid sehingga pori-pori mudah membesar dan Kristal
violet mudah larut saat pencucian alkohol (Fardiaz, 1989).

Pewarnaan gram dilakukan bertujuan sama dengan uji gram yaitu untuk
membedakan bakteri apakah gram positif atau gram negatif, bakteri dicampur dengan
tetesan air steril pada gelas objek, kemudian disebarkan ditengah gelas obyek sehingga
membentuk lapisan tipis dan difiksasi. Dengan kristal violet olesan bakteri digenangi
selama dua menit, lalu dicuci denganair mengalir, dan dikering anginkan. Diberi yodium
selama dua menit, dicucidengan air mengalir dan dikeringanginkan. Selanjutnya diberi
larutan pemucat yaitu alkohol 95%, tetes demi tetes sampai zat warna ungu tidak terlihat
lagi, lalu dicuci pada air mengalir dan dikering anginkan. Kemudian digenangi lagi
dengan safranin selama 30 detik, lalu dicuci dan dibiarkan kering di udara. Warna merah
pada olesan bakteri menujukkan bakteri gram negatif dan jika warna ungu menunjukkan
bakteri gram positif (Pelczar,2007).

Dalam taksonomi mikroba alat yang paling ampuh digunakan yaitu pewarnaan
Gram (Gram Stain), yang dapat digunakan untuk memisahkan anggota- anggota dominan
bakteria ke dalam dua kelompok berdasarkan perbedaan dinding selnya. Bakteri gram

4
positif memiliki dinding sel yang lebih sederhana,dengan jumlah peptidoglikan yang
relatif banyak. Dinding sel bakteri gram-negatif memiliki peptidoglikan yang lebih
sedikit dan secara struktural lebih kompleks. Membran bagian luar pada dinding sel
gram-negatif mengandung lipopolisakarida, yaitu karbohidrat yang terikat dengan lipid.
Diantara bakteri patogen,yang menyebabkan penyakit,spesies gram-negatif umumnya
lebih berbahaya dibandingkan dengan spesies gram-positif. Lipopolisakarida yang
terdapat pada dinding sel bakteri gram negatif sering bersifat toksik (racun), dan
membran bagian luar membantu melindungi bakteri gram-negatfi patogen melawawn
sistem pertahanan inangnya. Lebih jauh, bakteri gram negatif umumnya lebih resisten
terhadap antibiotikdibandingkan dengan gram-positif karena membran bagian luar
itumengahalangi masuknya obat-obatan ( Campbell, 2003 ).

Bakteri Gram Positif adalah bakteri yang memiliki dinding sel dengan lapisan
peptidoglikan yang tebal. Bakteri ini akan berwarna ungu jikadiwarnai dengan pewarnaan
Gram. Contohnya Neisseria gonnorrhoaeae,Treponema pallidum,Vibrio Cholerae dan
Bacillus subtilis. Sedangkan Bakteri Gram Negatif adalah bakteri yang memiliki dinding
sel dengan lapisan peptidoglikan yang tipis. Bakteri ini akan berwarna merah muda atau
merah, kila diwarnai dengan pewarnaan gram. Contohnya Streptococcusmutans,
Staphylococcus aureus dan Escherichia coli (Aryulina, 2004).

Teknik Pewarnaan bukan pekerjaan yang sulit tapi perlu ketelitian dan
kecermatan bekerja serta mengikuti aturan dasar yang berlaku (Lay.1994).

Bakteri atau mikroba lainnya dapat dilihat dengan mikroskop cahaya tanpa
pewarnaan/pengecatan atau dengan pewarnaan/pengecatan. Pengamatan tanpa
pengecatan lebih sukar dan tidak dapat dipakai untuk melihat bagian-bagian sel dengan
teliti karena sel bakteri atau mikroba lainnya transparan atau semi transparan. Dengan
pengecatan, dapat dilihat struktur sel mikroba lebih seksama.

Fungsi pengecatan :

a).memberi warna pada sel atau bagian-bagiannya sehingga member kontras dan tampak
lebih jelas,

b). dapat untuk menunjukkan bagian-bagian struktur sel,

5
c). membedakan mikroba satu dengan yang lain,dan

d). menentukan pH dan potensial oksidasi reduksi ekstraseluler dan intraseluler (Jutono
dkk., 1980).

Pengecatan bakteri umumnya menggunakan lebih dari satu tingkat pengecatan.

Hasil pengecatan dipengaruhi oleh beberapa faktor, seperti : fiksasi, substrat,
dekolorisator dan sebagainya. Dalam pembuatan pulasan bakteri yang siap diwarnai,
perlu dilakukan fiksasi terlebih dahulu yang bertujuan antara lain :

a). mencegah mengkerutnya globula-globula protein sel,

b). merubah afnitas cat,

c). mencegah terjadinya otolisis sel,

d). dapat membunuh mikroba secara cepat dengan tidak menyebabkan perubahan-
perubahan bentuk atau strukturnya,

e). melekatkan bakteri di atas gelas benda dan

f). membuat sel-sel lebih kuat/keras.

Ciri-ciri bakteri gram negatif yaitu:

Struktur dinding selnya tipis, sekitar 10 – 15 mm, berlapis tiga atau multilayer.

Dinding selnya mengandung lemak lebih banyak (11-22%), peptidoglikan terdapat

didalam

lapisan kaku, sebelah dalam dengan jumlah sedikit ± 10% dari berat kering,tidak
mengandung asam tekoat.

Kurang rentan terhadap senyawa penisilin.

Pertumbuhannya tidak begitu dihambat oleh zat warna dasar misalnya Kristal violet.

Komposisi nutrisi yang dibutuhkan relatif sederhana.

Tidak resisten terhadap gangguan fisik.

6
Resistensi terhadap alkali (1% KOH) lebih pekat

Peka terhadap streptomisin

Toksin yang dibentuk Endotoksin

Ciri-ciri bakteri gram positif yaitu:

Struktur dinding selnya tebal, sekitar 15-80 nm, berlapis tunggal ataumonolayer.

Dinding selnya mengandung lipid yang lebih normal (1-4%), peptidoglikanada yang
sebagai lapisan tunggal. Komponen utama merupakan lebih dari50% berat ringan.
Mengandung asam tekoat.

Bersifat lebih rentan terhadap penisilin.

Pertumbuhan dihambat secara nyata oleh zat-zat warna seperti ungu kristal.

Komposisi nutrisi yang dibutuhkan lebih rumit.

Lebih resisten terhadap gangguan fisik.

Resistensi terhadap alkali (1% KOH) larut Tidak peka terhadap streptomisin

Pengecatan ini dikembangkan pertama kali oleh Christian Gram (1884) dan
termasuk pengecatan differensial, karena dapat membedakan bakteri yang bersifat gram
positif dan gram negatif. Dari segi pewarnaan perbedaan antara bakteri Gram positif dan
Gram negative dapat diamati dengan jelas. Bakteri Gram positif mengikat cat utama
(crystal violet) dengan kuat sehingga tidak dapat dilunturkan oleh cat peluntur dan tidak
diwarnai lagi oleh cat lawan (safranin), hal ini disebabkan karena sifat dinding sel dan
sitoplasmanya, yang mempunyai afinitas kuat terhadap kompleks crystal violet dan
iodine (iodium). Bakteri Gram negatif tidak mengikat cat utama secara kuat, sehingga
dapat dilunturkan oleh peluntur dan dapat diwarnai oleh cat lawan. Perbedaan sifat
bakteri Gram positif dan gram negatif tidak mutlak tegas dan spesifik, tetapi masih
tergantung pada beberapa faktor yang dapat menyebabkan variasi dalam pengecatan
Gram.

BAB II

7
 ALAT DAN CARA KERJA

Alat dan bahan:

1. Mikroskop cahaya
2. Crystal violet (Gram A)
3. Larutan iodine (Gram B)
4. Alkohol 96% (Gram C)
5. Safranin (Gram D)
6. Minyak immersi
7. Isolat murni bakteri tanah (hasil percobaan Acara III)
8. Gelas benda
9. Jarum ose
Cara kerja:

1. Buatlah pulasan bakteri di atas objek gelas, keringkan dan fiksasi dengan api

2. Teteskan cat crystal violet (Gram A) dan diamkan 30- 60 detik.

3. Buanglah sisa cat dan cuci sisanya dengan air mengalir.

4. Teteskan larutan iodine (Gram B) dan diamkan selama 1-2 menit.

5. Cuci dengan air mengalir, kemudian di decolorisasi (di beri larutan peluntur)

dengan alkohol (Gram C) (kira- kira 20 detik, hati-hati jangan sampai berlebihan yang
mengakibatkan kesalahan hasil).

6. Cuci dengan air mengalir, tambahkan larutan safranin (Gram D) selama 10-20 detik.

7. Cuci kembali dengan air mengalir, angin-anginkan dan amati di bawah mikroskop
dengan perbesaran kuat (1000x) menggunakan minyak immersi.

8. Gambar hasil-hasil pengecatan bakteri dengan diberi keterangan mengenai warna sel
bakteri yang menunjukkan sifat gram dan bentuk sel.

BAB III
8
 HASIL DAN PEMBAHASAN

No Gambar Keterangan
1. 1.Buatlah pulasan bakteri di atas objek
gelas, keringkan dan fiksasi dengan api.
2. Teteskan cat crystal violet (Gram A)
diamkan 30- 60 detik. Buanglah sisa cat
dan cuci sisanya dengan air mengalir.
3. Teteskan larutan iodine (Gram B) dan
diamkan selama 1-2 menit. Cuci dengan
air mengalir, kemudian di decolorisasi (di
beri larutan peluntur) dengan alkohol
(Gram C) (diamkan 20 detik, hati-hati
jangan sampai berlebihan yang
mengakibatkan kesalahan hasil). Cuci
dengan air mengalir,
4. Tambahkan larutan safranin (Gram D)
selama 10-20 detik. Cuci kembali dengan
air mengalir, angin-anginkan dan amati di
bawah mikroskop dengan perbesaran kuat
(1000x) menggunakan minyak immersi.

2. Gambar 1 Hasil Pengamatan dibawah Mikroskop

Gambar 1 : Perbesaran 100x

Bentuk : Coccus
9
 Warna : Biru Keunguan
Pewarna : Cristal violet, Iodin, Alkohol
Dan Safranin.
Bakteri : Paramecium sp (Air Got)
Bakteri : Gram Positif

Gambar 2 : Perbesaran 10x

Bentuk : Coccus
Gambar 2
Warna : Biru Keunguan
Pewarna : Cristal violet, Iodin, Alkohol
Dan Safranin.
Bakteri : Paramecium sp (Air Got)
Bakteri : Gram Positif

Gambar 3 : Perbesaran 100x

Gambar 3 Bentuk : Staphylococcus

Warna : Biru Keunguan
Pewarna : Cristal violet, Iodin, Alkohol
Dan Safranin.
Bakteri : Paramecium sp (Air Got)
Bakteri : Gram Positif

Pada praktikum ini dilakukan pengecetan gram atau pewarnaan bakteri berupa
pewarnaan gram. Pewarnaan gram atau metode gram adalah suatu metode empiris untuk
membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok besar gram-positif dan gram-negatif
berdasarkan sifat kimia dan fisik dinding sel bakteri (Karmana, Oman, 2008).

10
 Pewarnaan Gram adalah pewarnaan diferensial yang sangat berguna dan paling
banyak digunakan dalam laboratorium mikrobiologi, karena merupakan tahapan penting
dalam langkah awal identifikasi. Pewarnaan ini didasarkan pada tebal atau tipisnya
lapisan peptidoglikan di dinding sel dan banyak sedikitnya lapisan lemak pada membran
sel bakteri. Jenis bakteri berdasarkan pewarnaan gram dibagi menjadi dua yaitu gram
positif dan gram negatif. Bakteri gram positif memiliki ciri berdinding sel yang tebal dan
membran sel selapis. Sedangkan baktri gram negatif mempunyai dinding sel tipis yang
berada di antara dua lapis membran sel.

Langkah awal yang akan dilakukan dalam pembuatan pengecatan gram yaitu
sterilkan preparat dengan menyemprotkan preparat dengan alkohol 90%. Sterilisasi
bertujuan untuk memusnahkan atau mengeliminasi semua mikroorganisme termasuk
spora bakteri yang resisten dalam alat yang akan digunakan. Setelah melakukan
sterilisasi, kemudian melakukan olesan bakteri pada kaca objek, tetapi sebelumnya ose di
fiksasi di api pada pembakar spiritus yang bertujuan untuk mematikan bakteri dengan
cepat pada ose, supaya tidak tercampur dengan bakteri yang akan di uji. Pada percobaan
kali ini pengolesan di lakukan hanya satu kali dengan sampel paramecium (air got)
Kemudian melakukan pengolesan pada kaca objek dengan salah satu sampel (air got)
suspensi campuran bakteri, setelah itu di fiksasi di atas api dengan cara di lewat–
lewatkan tidak terlalu dekat api supaya bakteri tidak mati. Fiksasi dalam tahap ini
bertujuan melekatkan sel bakteri pada objek glass tanpa merusak struktur selnya,
mempermudah pengecetan,dan sediaan tahan untuk disimpan jika belum sempat dicat.
Kaca objek yang sudah dioleskan bakteri lalu di simpan di atas bak warna lalu di teteskan
pewarna cat cristal violet (gram A) dan diamkan selama 30-60 detik. Buanglah sisa cat
dan cuci sisanya dengan air mengalir. Kristal violet merupakan zat warna yang
memberikan atau menunjukkan sifat pewarnaan negatif dengan memberikan warna ungu
pada bakteri yang peka terhadap zat warna basa. Selanjutnya diteteskan larutan iodine
(gram B) diamkan selama 1-2 menit. Buanglah sisa cat dan cuci sisanya dengan air
mengalir. Fungsi larutan iodine, yaitu: Meningkatkan aktifitas peningkatan zat warna
oleh bakteri, Untuk memperjelas zat warna dan mempersulit kelarutan zat warna. Lalu
dilakukan dekolorisasi (diberi larutan pluntur) dengan alcohol (Gram C) diamkan 20
detik, hati-hati jangan sampai berlebihan yang mengakibatkan kesalahan hasil. Fungsi
11
penambahan alcohol untuk memucatkan warna ungu kristal pada kaca preparat yang
sudah menempel pada olesan bakteri tersebut. Selain digunakan etanol sebagai pemucat,
dapat juga digunakan zat lain yang dapat melarutkan kompleks ungu-iodium, contohnya
aceton. Namun, aceton merupakan pemucat yang bekerja paling cepat sehingga
dikhawatirkan akan terjadi pemucatan yang berlebihan. Pemucatan ini akan
mengakibatkan bakteri gram negatif kehilangan warnanya dan kembali menjadi tak
berwarna, namun bakteri gram positif tetap berwarna ungu/ biru. Dan ditambahkan
safranin (gram D) diamkan slama 20 detik. Buanglah sisa cat dan cuci sisanya dengan air
mengalir. Pembilasan ini bertujuan untuk mengurangi kelebihan setiap zat warna yang
sedang diberikan. Selanjutnya olesan di tetesi emersi oil sebanyak satu tetes. Minyak
emersi adalah minyak yang di pakai untuk olesan pada mikroskop, yang fungsinya untuk
memperjelas objek, dan melindungi mikroskop (pada saat sebelum diamati dimikroskop
menggunakkan minyak emersi terlebih dahulu). Pemberiaan minyak emersi bertujuan
Minyak emersi memiliki indeks refraksi yang tinggi dibandingkan dengan air, sehingga
objek yang kita amati dapat terlihat lebih jelas dibandingkandengan tanpa minyak emersi.
Lalu karena cahaya yang datang dibiaskan melalui 2 medium yang berbeda, yaitu udara
dan kaca. Oleh karena itu,dibutuhkan suatu bahan yang mampu membiaskan cahaya dari
medium udara dan medium kaca dengan pembiasan yang mendekati garis normal. Bahan
yang mampu membiaskan cahaya dari medium udara dan medium kaca dengan
pembiasan yang mendekati garis normal adalah minyak imersi. Selain itu, minyak emersi
juga mempunyai indeks bias yang mendekati atau identik dengan kaca.Umumnya
digunakan dalam pewarnaan mikrobkateria karena memiliki ketertarikan untuk asam
mycolic yang ditemukan di dinding sel mikroba.

Dari hasil pengamatan mikroskop sampel suspensi campuran bakteri Paramecium

(Air got) dan bentuk bakteri Staphylococcus & coccus . Staphylococcus dapat teramati
dengan ciri Staphylococcus berbentuk coccus seperti anggur dengan warna violet yang
menandakan bakteri tersebut bakteri gram positif, sedangkan coccus berbentuk coccus
tunggal dengan warna violet yang menandakan bakteri tersebut bakteri gram positif. Pada
Praktikum ini melakukan dua kali percobaan dan hasil yang didapatkan yaitu bakteri
gram positif yang membedakan hanya bentuknya yaitu Staphylococcus & Coccus.

12
 Ketika ingin mengetahuin perbedaan antara bakteri gram postitif dan bakteri
gram negative yaitu bakteri gram positif adalah bakteri yang mempertahankan zat warna
violet sewaktu proses pewarnaan gram. Bakteri ini akan berwarna biru atau violet di
bawah mikroskop, sedangkan bakteri gram negatif akan berwarna merah atau merah
muda. Perbedaan klasifikasi antara kedua jenis bakteri ini di dasarkan pada perbedaan
struktur dinding sel bakteri. Bakteri gram positif memiliki dinding sel yang tebal di
banding bakteri gram negatif sehingga bakteri gram positif dapat mempertahankan warna
ungu.

BAB 1V
KESIMPULAN

Pada Praktikum Pengecatan Gram bertujuan untuk melihat bentuk sel, rangkaian
sel, dan sifat gram (gram negative dan gram positif).
13
 Bakteri Gram Positif adalah bakteri yang memiliki dinding sel dengan lapisan
peptidoglikan yang tebal. Bakteri ini akan berwarna ungu jikadiwarnai dengan pewarnaan
Gram. Contohnya Neisseria gonnorrhoaeae,Treponema pallidum,Vibrio Cholerae dan
Bacillus subtilis. Sedangkan Bakteri Gram Negatif adalah bakteri yang memiliki dinding
sel dengan lapisan peptidoglikan yang tipis. Bakteri ini akan berwarna merah muda atau
merah, kila diwarnai dengan pewarnaan gram. Contohnya Streptococcusmutans,
Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.

Fungsi pengecatan dari pengecatan gram yaitu memberi warna pada sel atau
bagian-bagiannya sehingga member kontras dan tampak lebih jelas, dapat untuk
menunjukkan bagian-bagian struktur sel, membedakan mikroba satu dengan yang
lain,dan menentukan pH dan potensial oksidasi reduksi ekstraseluler dan intraseluler

Pada Praktikum ini melakukan dua kali percobaan dan hasil yang didapatkan
yaitu bakteri gram positif yang membedakan hanya bentuknya yaitu Staphylococcus dan
Coccus.

DAFTAR PUSTAKA

Campbell, N.A., Reece, J.B., & Mitchell, L.G. (2003). Biologi. Jilid 2. Edisi Kelima. Alih

14
 Bahasa: Wasmen. Jakarta: Penerbit Erlangga.
Chandra, T. J and P. Subha Mani. 2011. Journal of Medical & Allied Sciences. A study of rapid
tests to differentiate Gram Positive and Gram Negatif aerobic bakteria 1 ( 2 ) : 84-85.
Davies, J. A., et al. 1983. Chemical Mechanism of the Gram Stain andSynthesis of a New
Electron-opaque Marker for ElectronMicroscopy Which Replaces the Iodine Mordant of
the Stain. JBacteriol. 156(2):837-845.
Dwidjoseputro. 2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan: Jakarta.

Fitri,L. dan Yasmin, Y. 2011.Jurnal Ilmiah Pendidikan Biologi, BiologiEdukasi. Isolasi Dan
Pengamatan Morfologi Koloni BakteriKitinolitik. Volume 3, Nomor 2, hl 20-25.
James, Joyce. 2002. Prinsip-Prinsip Sains Untuk Keperawatan. Retno Indah, Penerjamah Jakarta
: Erlangga. Terjemahan dari : Principles of Science For Nurses.
Karmana Oman. 2008. Biologi. Jakarta : PT Grafindo Media Pratama.
Lay BW. 1994. Analisis Mikroba di Laboratorium. Rajawali Pers. Jakarta.
Peleczar, M. J., dan Chan, E.C.S 2007. Elements of Microbiology. New York : Mc Graw Hill
Book.
Waluyo,lud. 2010. Buku Petunjuk Praktikum Mikrobiologi Umum. UMM. Malang
Volk & Wheeler. 1993. Mikrobiologi Dasar. Jakarta: Erlangga.

15