Total Fenol dan Flavonoid Ekstrak Tempuyung

PENGUJIAN KANDUNGAN TOTAL FENOL DAN
FLAVONOID SERTA ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL

TEMPUYUNG (Sonchus arvensis L.)
SKRIPSI
Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk memperoleh
gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitasera Utara
OLEH:
ANNISA MULIA HAPSARI
NIM 111501021
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2017
Universitas Sumatera Utara

SKRIPSI
Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk memperoleh

gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
OLEH:
NIM 111501021
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2017

LEMBAR PENGESAHAN SKRIPSI

OLEH:
NIM 111501021
Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi

Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara
Pada Tanggal : 02 Desember 2016
Disetujui Oleh:
Pembimbing I, Panitia Penguji,
Dr. Masfria, M.S., Apt. Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt.

NIP 195707231986012001 NIP 195103261978022001
Dr. Masfria, M.S., Apt.

Pembimbing II, NIP 195707231986012001
Aminah Dalimunthe, S.Si., M.Si., Apt. Dr. Poppy Anjelisa Z. Hsb, M.Si., Apt.
NIP 197806032005012004 NIP 197506102005012003
Aminah Dalimunthe, S.Si., M.Si., Apt.

NIP 197806032005012004
Medan, Januari 2016

Fakultas Farmasi
Dekan,
Dr. Masfria, M.S., Apt

NIP 195707231986012001

KATA PENGANTAR
Puji dan syukur kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat dan
karunia kepada penulis, sehingga dapat meyelesaikan penyusunan skripsi yang
berjudul “Pengujian Kandungan Total Fenol dan Flavonoid serta Antioksidan
Ekstrak Etanol Tempuyung (Sonchus arvensis L.)”. Skripsi ini diajukan sebagai
salah satu syarat guna memperoleh gelar Sarjana Farmasi dari Fakultas
Farmasi Universitas Sumatera Utara.
Pada kesempatan ini penulis hendak menyampaikan rasa hormat dan
terima kasih yang sebesar-besarnya kepada Ibu Dr. Masfria, M.S., Apt., selaku
Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara yang telah memberikan
fasilitas dan masukan selama masa pendidikan dan penelitian, Kepada Ibu Dr.
Masfria, M.S., Apt., dan Ibu Aminah Dalimunthe, S.Si., M.Si., Apt., selaku dosen
pembimbing yang telah banyak memberikan bimbingan, arahan, dan bantuan
selama masa penelitian dan penulisan skripsi ini berlangsung. Penulis juga
menyampaikan ucapan terima kasih kepada Ibu Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt.,
dan Ibu Dr. Poppy Anjelisa Z. Hasibuan, M.Si., Apt., selaku dosen penguji yang
telah memberikan masukan dalam penyusunan skripsi ini, Kepada Ibu Dra.
Masria Lasma Tambunan, M.Si., Apt., selaku dosen pembimbing akademik yang
selalu membimbing selama masa perkuliahan serta Bapak dan Ibu staf pengajar
Fakultas Farmasi USU Medan yang telah mendidik selama perkuliahan.
Penulis juga mengucapkan terima kasih dan penghargaan yang tulus dan
tak terhingga kepada keluarga tercinta, Ayahanda Almarhum Rudy Gunawan,
S.E., Ibunda Yenita Yulizar dan kakak Arum Mutia Sylviana yang tiada hentinya
mendoakan, memberikan semangat, dukungan dan berkorban dengan tulus ikhlas

bagi kesuksesan penulis. Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada sahabat-
sahabatku Jurusan Sains dan Teknologi Angkatan 2011 selalu memberikan
dorongan dan motivasi selama penulis melakukan penelitian. Masa masa indah
kebersamaan selama kuliah akan selalu menjadi kenangan manis.
Penulis menyadari sepenuhnya bahwa penulisan skripsi ini masih belum
sempurna, sehingga penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat
membangun untuk penyempurnaannya. Harapan penulis semoga skripsi ini dapat
bermanfaat bagi ilmu pengetahuan khususnya dibidang farmasi.
Medan, November 2016

Penulis,
Annisa Mulia Hapsari

NIM 111501021

SURAT PERNYATAAN
Saya yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama : Annisa Mulia Hapsari
Nomor Induk Mahasiswa : 111501021
Program Studi : S-1 Reguler
Judul Skripsi : Pengujian Kandungan Total Fenol dan Flavonoid
serta Antioksidan Ekstrak Etanol Tempuyung
(Sonchus arvensis L.)
Dengan ini menyatakan bahwa skripsi ini ditulis berdasarkan data dan hasil
pekerjaan yang saya lakukan sendiri, dan belum pernah diajukan orang lain untuk
memperoleh gelar kesarjanaan di perguruan tinggi lain, dan bukan plagiat karena
kutipan yang ditulis telah disebutkan sumbernya di dalam daftar pustaka.
Apabila di kemudian hari ada pengaduan dari pihak lain karena di dalam skripsi
ini ditemukan plagiat akibat kesalahan saya sendiri, maka saya bersedia menerima
sanksi apapun oleh Program Studi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas
Sumatera Utara, dan bukan menjadi tanggung jawab pembimbing.
Demikian surat pernyataan ini saya perbuat dengan sebenarnya untuk dapat
digunakan jika diperlukan sebagai mana mestinya.
Medan, November 2016

Yang Membuat Pernyataan
Nama : Annisa Mulia Hapsari

NIM : 111501021

ABSTRAK
Radikal bebas merupakan atom atau molekul yang sifatnya sangat tidak
stabil dan sangat reaktif, serta merusak jaringan. Radikal bebas yang berlebihan
dapat memicu timbulnya berbagai macam penyakit degeneratif, seperti kanker dan
penyakit jantung (kardiovaskular). Timbulnya penyakit degeneratif oleh radikal
bebas dapat dihambat ataupun dicegah oleh senyawa antioksidan seperti fenol dan
flavonoid. Daun Tempuyung (Shoncus arvensis L.) dari famili Asteraceae
mengandung senyawa kimia, seperti tanin dan golongan flavonoid. Flavonoid
memiliki potensi yang besar untuk melawan penyakit yang disebabkan oleh
radikal bebas. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui kandungan total
fenol, kandungan flavonoid dan aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun
tempuyung.
Penelitian dilakukan secara eksperimental dengan tahapan pengumpulan
dan pengolahan bahan tanaman, pembuatan simplisia, pemeriksaan karakteristik,
skrining fitokimia, pembuatan ekstrak etanol secara maserasi, penetapan kadar
total fenol, penetapan kadar flavonoid dan pengujian aktivitas antioksidan dengan
menggunakan metode peredaman radikal bebas 1,1 diphenyl-2-picrylhydrazil
(DPPH) dengan menggunakan alat spektrofotometer UV-Visibel.
Hasil penelitian menunjukkan kadar total fenol ekstrak etanol daun
tempuyung dengan metode spektrofotometri pereaksi Folin-Ciocalteu diperoleh
nilai rata – rata 53,04 ± 0,46 mg GAE/g ekstrak, kadar total flavonoid dengan
metode kolorimetri dengan pereaksi AlCl3 didapat nilai kadar rata – rata 35,04 ±
0,077 mg QE/g ekstrak dan hasil pengujian aktivitas antioksidan menunjukkan
aktivitas antioksidan kategori sedang dengan nilai IC50 sebesar 114,471 ± 0,0367
ppm.
Kesimpulan hasil penelitian ini pada pengujian ekstrak etanol daun
tempuyung mengandung senyawa fenol dengan kadar total fenol sebesar 53,04 ±
0,46 mg GAE/g ekstrak, kadar total flavonoid 35,04 ± 0,077 mg QE/ ekstrak, dan
memiliki aktivitas antioksidan dalam kategori sedang dengan nilai IC50 sebesar
114,471 ± 0,0367 ppm.
Kata kunci : Daun tempuyung, Shoncus arvensis L., total fenol, total flavonoid,
antioksidan, DPPH.

TESTING TOTAL PHENOL CONTENT AND FLAVONOIDS
AND ANTIOXIDANT ETHANOL EXTRACT TEMPUYUNG
(Sonchus arvensis L.)
ABSTRACT
Free radicals is atoms or molecules which are highly unstable and very
reactive as well as damaged tissues. Free radicals excessive encourage the various
kinds of diseases degenerative, such as cancer and heart disease (cardiovascular).
Onset of degenerative diseases by free radicals can any barrier or prevented by
compound antioxidant such as a phenolic acid or flavonoid. Tempuyung’s leave
(Sonchus arvensis L.) from Asteraceae family, containing chemical compounds,
such as tanin and flavonoid. Flavonoid having great potential to fight diseases
caused by free radicals. The purpose of this study was to determine the content of
total phenols, flavonoid content and antioxidant activity of ethanol extract of
leaves tempuyung.
This research was carried out experimentally with the stages of
collection and process plant materials, manufacture botanicals, inspection
characteristics, phytochemical screening, making ethanol extract in maceration,
total phenol assay, flavonoids assay and antioxidant activity test with 1,1
diphenyl-2-picrylhydrazil (DPPH) by using spectrophotometer UV-Visibel.
The results showed levels of total phenols ethanol extract of the
tempuyung’s leave by spectrophotometric method Folin-Ciocalteu reagent
obtained value average 53.04 ± 0.46 mg GAE / g extract, total flavonoid levels by
colorimetric methods with AlCl3 reagent grade values obtained average 35.04 ±
0.077 mg QE / g extract and test results indicate the antioxidant activity in
medium category with IC50 value of 114.471 ± 0.0367 ppm.
Conclusions the result of this research on testing extract ethanol leaves
tempuyung has containing flavonoid with obtained level of total phenol 53.04 ±
0.46 mg GAE / g extract, flavonoid content of 35.04 ± 0.077 mg QE / extracts,
and has antioxidant activity in the medium category with IC50 value of 114.471 ±
0. 0367 ppm.
Keyword: Tempuyung leaves, Sonchus arvensis L., total phenol, total flavonoids,
antioxidant, DPPH

DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL .................................................................................................... i
LEMBAR PENGESAHAN .................................................................... iii
KATA PENGANTAR ........................................................................... iv
SURAT PERNYATAAN ...................................................................... vi
ABSTRAK .............................................................................................. vii
ABSTRACT ............................................................................................ viii
DAFTAR ISI ........................................................................................... ix
DAFTAR TABEL ................................................................................... xiv
DAFTAR GAMBAR .............................................................................. xiv
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................... xvi
BAB I PENDAHULUAN ...................................................................... 1
1.1 Latar belakang ....................................................................... 1
1.2 Perumusan masalah ............................................................... 4
1.3 Hipotesis ................................................................................ 5
1.4 Tujuan penelitian ................................................................... 5
1.5 Manfaat penelitian ................................................................. 5
1.6 Kerangka pikir ....................................................................... 6
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ............................................................ 7
2.1 Radikal bebas ........................................................................ 7
2.2 Antioksidan .......................................................................... 9
2.2.1 Antioksidan alami ........................................................ 10
2.2.2 Senyawa fenolik .......................................................... 11

2.2.3 Flavonoid .................................................................... 11
2.3 Metode pengujian aktivitas antioksidan ................................ 13
2.4 Uraian tumbuhan .................................................................. 16
2.4.1 Morfologi tumbuhan ................................................. 17
2.4.2 Sistematika tumbuhan ................................................ 17
2.4.3 Kandungan kimia ....................................................... 18
2.5 Ekstraksi ............................................................................... 18
BAB III METODE PENELITIAN ......................................................... 21
3.1 Alat dan Bahan ...................................................................... 21
3.1.1 Alat .............................................................................. 21
3.1.2 Bahan........................................................................... 21
3.2 Penyiapan tumbuhan ............................................................ 22
3.2.1 Pengumpulan tumbuhan .............................................. 22
3.2.2 Identifikasi tumbuhan.................................................. 22
3.2.3 Pengolahan tumbuhan ................................................. 22
3.3 Pembuatan Pereaksi............................................................... 23
3.3.1 Pereaksi Bouchardart .................................................. 23
3.3.2 Pereaksi Meyer ............................................................ 23
3.3.3 Pereaksi Dragendorff .................................................. 23
3.3.4 Pereaksi Molish ........................................................... 23
3.3.5 Pereaksi asam klorida 2 N ........................................... 23
3.3.6 Pereaksi asam sulfat 2 N ............................................. 23
3.3.7 Pereaksi natrium hidroksida 2 N ................................. 24
3.3.8 Pereaksi timbal (II) asetat 0,4 M ................................. 24

3.3.9 Pereaksi besi (III) klorida 1 % .................................... 24
3.3.10 Pereaksi kloralhidrat.................................................. 24
3.3.11 Pereaksi Liebermann-Bouchart ................................. 24
3.3.12 Pereaksi alumunium klorida10% .............................. 24
3.3.13 Pereaksi natrium asetat 1 M ...................................... 24
3.3.14 Pereaksi natrium karbonat 20% ................................ 24
3.4 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia .................................... 25
3.4.1 Pemeriksaan makroskopik........................................... 25
3.4.2 Pemeriksaan mikroskopik ........................................... 25
3.4.3 Penetapan kadar air ..................................................... 25
3.4.4 Penetapan kadar sari larut air ...................................... 26
3.4.5 Penetapan kadar sari larut etanol................................. 26
3.4.6 Penetapan kadar abu total............................................ 26
3.4.7 Penetapan kadar abu tidak larut asam ......................... 27
3.5 Skrining Fitokimia................................................................. 27
3.5.1 Pemeriksaan alkaloida ................................................. 27
3.5.2 Pemeriksaan flavonoid ................................................ 28
3.5.3 Pemeriksaan glikosida ................................................. 28
3.5.4 Pemeriksaan tanin ....................................................... 29
3.5.5 Pemeriksaan saponin ................................................... 29
3.5.6 Pemeriksaan steroid/triterpenoid ................................. 29
3.6 Pembuatan EEDT .................................................................. 29
3.7 Penetapan Kandungan Total Fenol EEDT ............................ 30
3.7.1 Pembuatan larutan baku asam galat ............................ 30

3.7.2 Penentuan operating time ............................................ 30
3.7.3 Penentuan panjang gelombang maksimum asam

galat ............................................................................ 31
3.7.4 Pembuatan kurva kalibrasi asam galat ........................ 31
3.7.5 Penetapan kandungan total fenol ................................ 31
3.8 Penetuan Kandungan Flavonoid EEDT ................................ 32
3.8.1 Pembuatan larutan induk baku kuersetin .................... 32
3.8.2 Penentuan panjang gelombang maksimum kuersetin 33
3.8.3 Pembuatan kurva kalibrasi kuersetin ......................... 33
3.8.4 Penetapan kadar flavonoid ......................................... 33
3.9 Pengujian Kemampuan Antioksidan dengan Spektro-

fotometer ............................................................................. 34
3.9.1 Prinisip metode pemerangkapan radikal bebas

DPPH ......................................................................... 34
3.9.2 Pembuatan larutan blanko .......................................... 34
3.9.3 Pembuatan larutan induk ............................................ 35
3.9.3.1 Pembuatan larutan induk EEDT...................... 35
3.9.3.2 Pembuatan larutan induk kuersetin ................. 35
3.9.4 Pembuatan larutan uji ................................................. 35
3.9.4.1 Pembuatan larutan uji EEDT ......................... 35
3.9.4.2 Pembuatan larutan uji kuersetin ..................... 35
3.9.5 Analisa persen pemerangkapan radikal bebas

DPPH ......................................................................... 35
3.9.6 Analisa nilai IC50 ........................................................ 36
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................ 37
4.1 Identifikasi Bahan Tumbuhan ............................................... 37

4.2 Karakterisasi Tumbuhan dan Simplisia................................. 37
4.2.1 Pemeriksaan makroskopik........................................... 37
4.2.2 Pemeriksaan mikroskopik ........................................... 37
4.2.3 Pemeriksaan kadar....................................................... 37
4.3 Hasil Skrining Fitokimia ....................................................... 39
4.4 Analisis Aktivitas .................................................................. 39
4.4.1 Pemeriksaan kandungan total fenol ........................... 39
4.4.1.1 Hasil penentuan operating time ..................... 40
4.4.1.2 Hasil penentuan panjang gelombang

serapan maksimum ....................................... 40
4.4.1.3 Hasil penentuan kurva kalibrasi asam galat ... 41
4.4.1.4 Hasil pengukuran kadar total fenol ................ 42
4.4.2 Pemeriksaan kandungan total flavonoid .................... 44
4.4.2.1 Hasil penentuan panjang gelombang

4.4.2.2 Hasil penentuan kurva kalibrasi kuersetin ...... 45
4.4.2.3 Hasil pengukuran kadar total flavonoid ......... 46
4.4.3 Pemeriksaan kandungan antioksidan ......................... 47
4.4.3.1 Hasil pengukuran panjang gelombang

4.4.3.2 Hasil analisi aktivtas antioksidan ................... 48
4.4.3.3 Hasil analisis peredaman radikal bebas

DPPH oleh sampel uji ................................... 50
4.4.3.3 Analisis nilai IC50 (Inhibitory Concentration)

sampel uji ....................................................... 51
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ................................................. 53
5.1 Kesimpulan ........................................................................... 53

5.2 Saran ..................................................................................... 53
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................ 54

DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
4.1 Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia Daun Tempuyung .. 38
4.2 Hasil Pemeriksaan Skrining Fitokimia Simplisia dan Ekstrak ... 39
4.3 Absorbansi Standart Asam Galat ............................................... 41
4.4 Rata – Rata Kandungan Total Fenol .......................................... 43
4.5 Absorbansi Standart Kuersetin .................................................... 45
4.6 Rata – Rata Kandungan Total Flavonoid ................................... 46
4.7 Hasil Analisis Peredaman Radikal Bebas .................................. 50
4.8 Nilai IC50 EEDT ......................................................................... 51

DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1.1 Kerangka pikir penelitian ....................................................... 5
2.1 Struktur dasar flavonoid ........................................................ 12
2.2 Struktur kimia DPPH ............................................................. 15
2.3 Reaksi antara DPPH dengan senyawa antioksidan ................ 16
4.1 Kurva Panjang Gelombang Maksimum Asam Galat ............. 41
4.2 Kurva Kalibrasi Standart Asam Galat .................................... 42
4.3 Kurva Panjang Gelombang Maksimum Kuersetin ................ 44
4.4 Kurva Kalibrasi Standart Kuersetin ....................................... 45
4.5 Pembentukan Senyawa Kompleks Kuersetin- Alumunium

Klorida ................................................................................... 47
4.6 Kurva Serapan Maksimum Larutan DPPH 40 ppm dalam

metanol secara Spektrofotometri visibel ............................... 48
4.7 Grafik Analisa Aktivitas Antioksidan EEDT pada menit

ke-60 ....................................................................................... 48
4.8 Grafik Analisa Aktivitas Antioksidan Kuersetin pada

menit ke-60 ............................................................................. 49
4.9 Reaksi penangkapan radikal bebas DPPH dengan Fenol ...... 52

DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Surat hasil identifikasi tumbuhan ............................................. 58
2 Karakterisasi tumbuhan tempuyung.......................................... 59
3 Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia daun

tempuyung................................................................................. 51
4 Bagan alur pembuatan simplisia .............................................. 62
5 Bagan alur pembuatan EEDT dan pengujian ............................ 63
6 Gambar alat ............................................................................... 64
7 Perhitungan pemeriksaan karakteristik simplisia daun

tempuyung ............................................................................... 65
8 Data pengukuran operating time ............................................... 70
9 Perhitungan total fenol EEDT .................................................... 73
10 Perhitungan total flavonoid EEDT ............................................. 75
11 Perhitungan aktivitas antioksidan EEDT dan kuersetin ............. 77
12 Kategori IC50 sebagai antioksidan .............................................. 85

BAB I
PENDAHULUAN
1. 1 Latar Belakang
Radikal bebas merupakan molekul yang mengandung satu atau lebih
elektron yang tidak berpasangan. Radikal bebas sangat reaktif dan dengan mudah
menjurus ke reaksi yang tidak terkontrol, menghasilkan ikatan silang (cross link)
pada DNA, protein, lipid atau kerusakan oksidatif pada gugus fungsional yang
penting pada biomolekul ini. Proses ini menyebabkan penuaan (Silalahi, 2006).
Kerusakan ini disebabkan karena proses oksidasi dimana proses ini normal
terjadi didalam tubuh sehingga kalor dan energi bebas dilepaskan untuk
mempertahankan temperatur tubuh, membentuk dan memperbaiki sel-sel jaringan,
menguraikan dan mngeluarkan zat-zat yang tidak diperlukan,serta untuk proses
metabolisme yang lain (Silalahi, 2006).
Radikal bebas yang berlebihan dapat memicu timbulnya berbagai macam
penyakit degeneratif, seperti kanker dan penyakit jantung (kardiovaskular).
Timbulnya penyakit degeneratif oleh radikal bebas dapat dihambat ataupun
dicegah oleh senyawa antioksidan. Oleh karena itu, tubuh memerlukan substansi
penting yaitu antioksidan untuk menangkap radikal bebas sehingga tidak dapat
menginduksi suatu penyakit lain (Ratnayani, 2012).
Antioksidan merupakan senyawa yang mampu menghilangkan,
membersihkan, menahan pembentukan, ataupun meniadakan efek oksigen reaktif
(Lautan, 1997). Suatu senyawa dikatakan memiliki sifat antioksidan bila senyawa
tersebut mampu mengikat satu atau lebih elektron kepada senyawa prooksidan,
kemudian mengubah senyawa oksidan menjadi senyawa yang lebih stabil
(Winarsi, 2005).

Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa ekstrak tanaman memiliki
senyawa yang bersifat antioksidan seperti senyawa fenolik, flavonoid yang lebih
efektif dan lebih aman daripada antioksidan sintetis, seperti butylated
hydroxytoluene. Antioksidan seperti asam fenolat, polifenol, flavonoid
menghambat radikal peroksida, hidroperoksida atau lipid peroxyl, menghambat
mekanisme oksidatif, sehingga mencegah penyakit degeneratif, selain itu berguna
sebagai anti tumor dan mempunyai efek pencegahan pada kerusakan hati.
Flavonoid memiliki kemampuan anti-inflamasi dan antioksidan yang terbukti
mampu menghambat proses stres oksidatif pada penyakit kardiovaskular dan
neurodegeneratif (Inggrid, dkk., 2014).
Salah satu tanaman yang termasuk dalam daftar tumbuhan obat tradisional
Indonesia (TOTI) adalah tempuyung atau Sonchus arvensis L. (Asteraceae).
Tumbuhan ini dikenal di beberapa daerah dengan nama lobak air; lempung;
jombang; galibug dan rayana, merupakan tumbuhan herba yang menahun, tegak
mengandung getah, mempunyai akar tunggang yang kuat. Tumbuh di tempat
terbuka atau sedikit terlindungi, di tempat yang bertebing, di pematang, di
pinggiran saluran air (Chairul, dkk., 2003).
Daun tempuyung di Indonesia digunakan sebagai obat untuk
menghancurkan batu ginjal. Berdasarkan penelitian Budiharto, dkk., (2001), daun
tempuyung bisa digunakan sebagai alternatif pengobatan batu ginjal dengan biaya
yang relatif murah. Penelitian Bastian (2009) menunjukkan ekstrak daun
tempuyung dengan dosis 200 mg/kg bb mempunyai efek anti inflamasi yang
sama dengan suspensi indometasin dosis 10 mg/kg bb.
Selain itu juga tempuyung biasa digunakan untuk mengobati memar akibat
terbentur dengan cara menempelkannya pada bagian yang bengkak, infeksi usus,

disentri, wasir, antiradang, menghilangkan rasa lesu, pegal–pegal dan rematik
(Chairul, dkk., 2003).
Melihat khasiat tempuyung dalam pengobatan tradisional digunakan
sebagai infeksi usus, antiradang, dan rematik kemungkinan khasiat yang
ditimbulkan ada hubungannya dengan senyawa–senyawa aktif bersifat sebagai
antioksidan yang terkandung didalamnya. Hal ini disebabkan senyawa–senyawa
antioksidan mempunyai khasiat yang dapat mengatasi berbagai macam gangguan
metabolik dan keadaan patologik seperti, kardiovaskular, respiratorik, infeksi,
peradangan, karsinogenesis dan proses penuaan (Chairul, dkk., 2003).
Tempuyung banyak mengandung senyawa kimia, seperti golongan
flavonoid (kaemferol, luteolin-7-O-glukosida dan apigenin-7-O-glukosida),
kumarin, dan taraksasterol (Sriningsih, dkk., 2012). Selain itu juga mengandung
lutein, flavon, flavonol dan auron. Di dalam tumbuhan, flavonoid ada dalam
bentuk glikosida dan aglikon flavonoid (Pramono, dkk., 1993). Dan pada ekstrak
etanol diketahui banyak mengandung senyawa metabolit sekunder alkaloid dan
flavonoid (Murtadlo, dkk., 2013).
Flavonoid merupakan salah satu dari kelompok senyawa fenolik yang
dapat ditemukan di buah dan sayur (Farkas, dkk., 2004). Umumnya terkandung
dalam tumbuhan dengan peran sebagai senyawa yang mengatur sistem
pertumbuhan. Tidak hanya berfungsi dalam tumbuhan, tetapi flavonoid
mempunyai efek yang bermacam–macam terhadap organisme. Senyawa ini
merupakan senyawa pereduksi yang baik karena mengandung gugus hidroksil.
Flavonoid dapat bertindak sebagai pendonor hidrogen terhadap radikal bebas

dalam menghambat banyak reaksi oksidasi, baik secara enzimatis ataupun tidak
(Robinson, 1991).
Beberapa tahun belakangan ini, flavonoid telah diteliti memiliki potensi
yang besar untuk melawan penyakit yang disebabkan oleh penangkap radikal
bebas. Senyawa fenolik telah diketahui memiliki berbagai efek biologis seperti
aktivitas antioksidan melalui mekanisme sebagai penginduksi, penangkapan
radikal bebas, pengkhelat logam, peredam terbentuknya oksigen singlet serta
pendonor elektron (Pribadi, dkk., 2005).
Berdasarkan uraian di atas, peneliti melakukan pengujian kandungan total
fenol, total flavonoid dan antioksidan dengan menggunakan metode
pemerangkapan radikal bebas 1,1 –diphenyl-2-picrylhydrazil (DPPH) dari ekstrak
etanol daun tempuyung.
1.2 Perumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang di atas, maka perumusan masalah pada
penelitian ini adalah :
a. apakah nilai kandungan total fenol ekstrak etanol daun tempuyung yang
diukur dengan metode spektrofotometri menggunakan reagen Folin-
Ciocalteu dapat ditentukan ?
b. apakah nilai kandungan total flavonoid ekstrak daun tempuyung yang
diukur dengan metode kolorimetri menggunakan reagen AlCl3 dapat
ditentukan ?
c. apakah ekstrak etanol daun tempuyung mempunyai aktivitas sebagai
antioksidan dengan menggunakan metode pemerangkapan radikal bebas
1,1 –diphenyl-2-picrylhydrazil (DPPH)?

1.3 Hipotesis
Berdasarkan perumusan masalah diatas, maka hipotesis pada penelitian ini
adalah :
a. kandungan total fenol ekstrak etanol daun tempuyung dapat ditentukan.
b. kandungan total flavonoid ekstrak etanol daun tempuyung dapat
ditentukan.
c. ekstrak etanol daun tempuyung mempunyai aktivitas sebagai antioksidan
dengan menggunakan metode pemerangkapan radikal bebas 1,1 –diphenyl-
2-picrylhydrazil (DPPH).
1.4 Tujuan Penelitian
Berdasarkan hipotesa di atas, maka tujuan penelitian ini adalah untuk
mengetahui :
a. kandungan total fenol ekstrak etanol daun tempuyung.
b. kandungan total flavonoid ekstrak etanol daun tempuyung.
c. kekuatan aktivitas antioksidan dalam ekstrak etanol daun tempuyung.
1.5 Manfaat Penelitian
Data karakteristik dan hasil skrining fitokimia simplisia tempuyung dapat
digunakan sebagai acuan bagi peneliti selanjutnya. Memberikan informasi tentang
kandungan total fenol dan kandungan total flavonoid dalam ekstrak etanol daun
tempuyung serta menambah inventaris tumbuhan obat yang berkhasiat sebagai
antioksidan.

1.6 Kerangka Pikir Penelitian
Kerangka pikir penelitian dapat dilihat pada Gambar 1.1.
Variabel Bebas Variabel Terikat Parameter
Kandungan Total Fenol Nilai absorbansi

EEDT sampel EEDT
Ekstrak Etanol
Kandungan Total Nilai absorbansi
Daun Tempuyung Flavonoid EEDT sampel EEDT
(EEDT)
Uji aktivitas
antioksidan dengan Nilai IC50 EEDT
metode DPPH
Gambar 1.1 Skema Kerangka Pikir Penelitian.

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Radikal bebas
Radikal bebas adalah setiap molekul yang mengandung satu atau lebih
elektron yang tidak berpasangan. Radikal bebas sangat reaktif dan dengan mudah
menjurus ke reaksi yang tidak terkontrol menghasilkan ikatan silang dengan
DNA, protein, lipida, atau kerusakan oksidatif pada gugus fungsional yang
penting pada biomolekul. Perubahan ini akan menyebabkan proses penuaan.
Radikal bebas juga terlibat dan berperan dalam patologi dari berbagai penyakit
degeneratif, yakni kanker, aterosklerosis, jantung koroner, katarak dan penyakit
degeneratif lainnya (Silalahi, 2006).
Radikal bebas menyebabkan kerusakan sel dengan tiga cara (Sayuti dan
Rina, 2015) yaitu :
1. Peroksidasi komponen lipid dari membran sel dan sitosol.
Menyebabkan serangkaian reduksi asam lemak (otokatalisis) yang
mengakibatkan kerusakan membran dan organel sel.
2. Kerusakan DNA,
Kerusakan DNA ini dapat mengakibatkan mutasi DNA bahkan dapat
menimbulkan kematian sel.
3. Modifikasi protein teroksidasi oleh karena terbentuknya cross linking protein,
melalui mediator sulfidril atas beberapa asam amino labil seperti sistein,
metionin, lisin dan histidin.

Ada berbagai radikal bebas turunan dari C dan N, akan tetapi yang paling
banyak diketahui adalah radikal oksigen. Radikal bebas bisa terbentuk ketika
komponen makanan diubah menjadi bentuk energi melalui proses metabolisme.
Pada proses metabolisme ini, sering kali terjadi kebocoran elektron. Dalam
kondisi ini , mudah sekali terbentuk radikal bebas seperti anion superoksida,
hidroksil dan lain-lain. Radikal bebas juga dapat terbentuk dari senyawa lain yang
sebenarnya bukan radikal bebas, tetapi mudah berubah menjadi radikal bebas.
Misalnya Hidrogen perokisda (H O ). Kedua kelompok senyawa tersebut

2 2
diistilahkan sebagai Senyawa Oksigen Reaktif (SOR) (Sayuti dan Rina, 2015).
Pembentukan radikal bebas terjadi secara terus menerus di dalam tubuh.
Hal ini terjadi melalui proses metabolisme sel normal, proses peradangan,
kekurangan nutrisi, maupun sebagai respons adanya radiasi sinar gama, ultraviolet
(UV), polusi lingkungan dan asap rokok serta diet (pola makan) (Sayuti dan Rina,
2015).
Menurut Hamid, dkk., (2010), radikal bebas terbentuk dari 3 tahapan
reaksi berantai berikut:
a. Tahap Inisiasi
(1) RH + initiator → R′ + H′
(2) R′ →R′ + O2→ ROO′
b. Tahap Propagasi
(1) R′ + O2→ ROO′
(2) ROO′ + RH → ROOH + R′

c. Tahap Terminasi
(1) R′ + R′ → RR
(2) R′ + ROO′ → ROOR
Tipe radikal bebas turunan oksigen reaktif sangat signifikan dalam tubuh.
Oksigen reaktif ini mencakup, hidroksil (OH`), peroksil (ROO`), hidrogen
peroksida (H2O2), singlet oksigen (O2*), oksida nitrit (NO`),
peroksinitrit(ONOO`) dan asam hipoklorit (HOCl) (Silalahi, 2006).
2.2 Antioksidan
Menurut Kosasih (2004), definisi antioksidan adalah zat yang dapat
menetralisir radikal bebas sehingga atom dengan elektron yang tidak berpasangan
mendapat pasangan elektron sehingga tidak reaktif lagi.
Menurut Kumalaningsih (2006), antioksidan dapat dikelompokkan
menjadi 5 yakni:
a. Antioksidan primer
Antioksidan ini berfungsi untuk mencegah terbentuknya radikal bebas
yang baru karena dapat merubah radikal bebas yang ada menjadi molekul yang
berkurang dampak negatifnya, yaitu sebelum sempat bereaksi. Contohnya adalah
enzim superoksida dismutase (SOD) yang berfungsi sebagai pelindung hancurnya
sel-sel dalam tubuh karena radikal bebas.
b. Antioksidan sekunder
Antioksidan sekunder merupakan senyawa yang berfungsi menangkap
radikal bebas serta mencegah terjadinya reaksi berantai sehingga tidak terjadi

kerusakan yang lebih besar. Contohnya adalah vitamin E, vitamin C dan
betakaroten yang dapat diperoleh dari buah-buahan.
c. Antioksidan tersier
Antioksidan tersier merupakan senyawa yang memperbaiki kerusakan sel-
sel dan jaringan yang rusak karena serangan radikal bebas, biasanya yang
termasuk kelompok ini adalah jenis enzim misalnya metionin sulfoksidan
reduktase yang dapat memperbaiki DNA dalam inti sel. Enzim tersebut
bermanfaat untuk perbaikan DNA pada penderita kanker.
d. Oxygen scavanger
Antioksidan yang termasuk oxygen scavanger mengikat oksigen sehingga
tidak mendukung reaksi oksidasi, misalnya vitamin C.
e. Chelators atau sequesstrants
Mengikat logam yang mampu mengkatalisis reaksi oksidasi misalnya
asam sitrat dan asam amino.
Antioksidan disebut juga reduktor dan berfungsi mencegah terjadinya
oksidasi dengan cara menyumbangkan hidrogen dan atau elektron (Silalahi,
2006).
Antioksidan bekerja dengan cara memerangkap spesies oksigen reaktif,
menghambat pembentukan radikal, mengikat ion logam transisi, mencegah
‾).Dalam tubuh antioksidan diharapkan juga

terbentuknya radikal hidroksil (OH
mampu menghambat proses oksidasi. Proses oksidasi yang terjadi secara terus
menerus dapat menimbulkan berbagai penyakit degeneratif dan penuaan dini.

2.2.1 Antioksidan alami
Antioksidan alami mampu melindungi tubuh terhadap kerusakan yang
disebabkan spesies oksigen reaktif, mampu menghambat terjadinya penyakit
degeneratif serta mampu menghambat peroksidase lipid pada makanan.
Antioksidan alami umumnya mengandung gugus hidroksi dalam strukrur
molekulnya (Kosasih, 2004).
Senyawa antioksidan alami tumbuhan umumnya adalah senyawa fenolik
atau polifenolik yang dapat berupa golongan flavonoid, turunan asam sinamat,
kumarin dan tokoferol. Golongan flavonoid yang memiliki aktivitas antioksidan
meliputi flavon, flavonol, isoflavon, katekin, flavanon dan kalkon. Senyawa
antioksidan alami polifenolik dapat bereaksi sebagai pereduksi, penangkap radikal
bebas, pengkelat logam dan peredam terbentuknya singlet oksigen
(Kumalaningsih, 2006).
2.2.2 Senyawa fenolat
Senyawa fenolat merupakan senyawa yang memiliki satu atau lebih gugus
hidroksil yang menempel di cincin aromatik. Polifenol sendiri merupakan satu
senyawa yang memiliki lebih dari satu gugus fenol. Banyaknya variasi gugus pada
kerangka utama fenol menyebabkan kelompok fenolik memiliki banyak anggota.
Terdapat lebih dari 8.000 jenis senyawa yang termasuk dalam senyawa fenolik.
Salah satu contoh senyawa fenolik adalah asam galat yang termasuk dalam
kelompok asam fenolat. Asam galat merupakan trifenol yang biasanya terdapat di
daun teh dalam bentuk teresterifikasi bersama dengan katekin (Sandrasari, 2008).

2.2.3 Flavonoid
Flavonoid terdiri dari struktur dasar 2-fenil-benzo-δ-piran atau inti flavan
dimana dua cincin benzen dihubungkan oleh cincin piran yang mengandung
oksigen. Flavonoid dibagi atas flavonol, flavon, flavan, dan isoflavon. Beberapa
contoh yang terdapat dalam pangan adalah miresistin, kuersetin, luteolin,
apigfenin, genistein, dan krisin. Senyawa flavonoid seperti kuersetin,
morin,miresitin, kaempferol, asam tanat, dan asam elagat merupakan antioksidan
kuat yang dapat melindungi makanan dari kerusakan oksidatif (Silalahi, 2006).
Senyawa flavonoid merupakan salah satu senyawa polifenol yang
mengandung 15 atom karbon dalam inti dasarnya, yang tersusun dalam
konfigurasi C6 - C3 - C6, yaitu dua cincin aromatik yang dihubungkan oleh satuan
3 karbon yang dapat atau tidak dapat membentuk cincin ketiga (Markham, 1988).
Struktur dasar dan sistem penomoran untuk turunan flavonoid dapat dilihat
pada Gambar 2.1 berikut :
Gambar 2.1 Struktur dasar flavonoid
Flavonoid terdapat dalam tumbuhan sebagai campuran dari flavonoid yang
berbeda dan jarang sekali dijumpai hanya flavonoid tunggal. Flavonoid pada
tumbuhan terdapat dalam berbagai bentuk struktur molekul dengan beberapa
bentuk kombinasi glikosida. Untuk menganalisis flavonoid lebih baik memeriksa
aglikon yang telah terhidrolisis daripada dalam bentuk glikosida dengan

strukturnya yang rumit dan kompleks. Flavonoid dapat berkhasiat sebagai
antioksidan, antibakteri dan anti inflamasi (Harbone, 1984).
Flavonoid mempunyai sifat antioksidan dimana senyawa ini berperan
sebagai penangkap radikal bebas karena mengandung gugus hidroksil. Karena
bersifat reduktor, flavonoid dapat bertindak sebagai donor hidrogen terhadap
radikal bebas. Flavonoid dapat membentuk kompleks (kelat) dengan ion logam
transisi, misalnya besi, alumunium, sehingga tidak lagi bertindak sebagai
prooksidan. Dengan demikian, oksidasi dapat dicegah (Silalahi, 2006).
Sekitar 2% dari seluruh karbon yang difotosintesis oleh tumbuhan menjadi
flavonoid atau senyawa yang berkaitan erat dengannya, sehingga flavonoid
merupakan salah satu golongan fenol alam terbesar. Lebih lanjut disebutkan
bahwa sebenarnya flavonoid terdapat dalam semua tumbuhan hijau, sehingga
pastilah ditemukan pula pada setiap telaah ekstrak tumbuhan (Markham, 1988).
Kuersetin (3,4-dihidroksiflavonol) merupakan senyawa flavonoid dari
kelompok flavonol dan terdapat terutama pada daun teh, tomat, apel, kakao, anggr
dan bawang yang memiliki sifat antioksidan yang sangat potensial. Dengan
mengkonsumsi kuersetin dalam jumlah yang cukup (50-200 mg per hari), maka
dapat bermanfaat memberi perlindungan karena berperan sebagai senjata
pemusnah radikal sehingga dapat mencegah penuaan dini (Kosasih,2004).
2.3 Metode pengujian aktivitas antioksidan
Berdasarkan reaksi kimia yang terjadi, metode pengujian aktivitas
antioksidan dapat dibagi dalam 2 kategori, yaitu : (1) berdasarkan trasnfer
elektron atom hidrogen (hydrogen atom transfer, HAT) dan (2) berdasarkan

transfer elektron (electron transfer, ET). Pengujian dengan metode HAT
didasarkan pada reaksi sintetik, dan melibatkan reaksi kompetisi dimana
antioksidan dan substrat bersaing membentuk radikal peroksil yang dihasilkan
melalui dekomposisi senyawa azo. HAT digunakan uyntuk mengukur
kemampuan antioksidan dalam menghambat radikal bebas (radikal peroksil) oleh
donor atom hidrogen (Sandrasari, 2008).
Sedangkan metode ET didasarkan pada reaksi redoks. Metode ini
digunakan untuk mengukur kapasitas antioksidan yang ditandai dengan perubahan
warna pada saat reaksi redoks terjadi. Pada metode ini, reaksi berjalan lebih
lambat dibandingkan dengan metode HAT dan reaksi dipengaruhi oleh jenis
pelarut dan kondisi pH. Metode ini merupakan metode yang sangat populer.
Termasuk dalam metode ini adalah pengukuran total fenol menggunakan reagen
Folin-Ciocalteu (FCR), TEAC/ABTS, DPPH dan reducing power.
Dalam reaksinya, metode ini dipengaruhi oleh dua komponen yaitu
antioksidan dan oksidan. Dasar dari reaksi ini adalah reaksi transfer elektron.
Oksidan yang memperoleh elektron dari antioksidan akan mengalami perubahan
warna. Tingkat perubahan warna sebanding dengan konsentrasi antioksidan. Titik
akhir reaksi dicapai ketika perubahan warna tidak terjadi lagi. Perubahan nilai
absorbansi diplot terhadap konsentrasi antioksidan yang digambarkan pada krva
linier. Slope kurva menunjukkan kapasitas reduksi dari antioksidan, yang
diekspresikan sebagai trolox equivalen (TE) atau gallic acid equivalent (GAE)
untuk pengujian total fenol (Sandrasari, 2008).
Ada dua cara untuk menentukan kandungan fenol suatu sampel. Pertama,
dengan metode Folin-Ciocalteu (FC), yang merupakan metode paling umum

digunakan untuk menetukan total fenol. Hasil yang didapatkan adalah estimasi
kandungan total fenol. Alternatif lainnya adalah dengan tehnik identifikasi dan
karakterisasi masing-masing senyawa fenol, seperti dengan tehnik Thin layer
chromatography, Liquid chromatography, dan Gas chromatography. Hasil yang
didapat adalah jenis-jenis fenol yang dikandung, kuantitas masing-masing dan
kadar totalnya (Viranda, 2009).
Metode untuk menentukan senyawa fenol pada suatu bahan diawali oleh
penemuan Folin dan rekan-rekannya di Institut Medikal Harvard dalam penelitian
metabolisme protein pada manusia. Folin dan Dennis melaporkan metode
kolorimetrik untuk mendeteksi asam amino tirosin dalam protein hidrolisat.
Metode ini didasarkan pada reagen campuran fosfotungstat (WO4)2-
fosfomolibdat (MoO4)2- yang bereaksi dengan gugus hidroksil fenolik pada
tirosin, menghasilkan warna biru. Intensitas warna ini dapat diukur serapanya
dengan menggunakan spektrofotometer (Ratna, 2009).
DPPH pertama kali ditemukan pada tahun 1922 oleh Goldschmidt dan
Renn. DPPH berwarna ungu pekat seperti KMnO4, bersifat tidak larut dalam air.
DPPH (1,1-diphenyl-2-picrilhydrazil) merupakan radikal bebas yang stabil pada
suhu kamar dan sering digunakan untuk mengevaluasi aktivitas antioksidan
beberapa senyawa atau ekstrak bahan alam. DPPH menerima elektron atau radikal
hidrogen akan membentuk molekul diamagnetik yang stabil. Interaksi antioksidan
dengan DPPH baik secara transfer elektron atau radikal hidrogen pada DPPH,
akan menetralkan karakter radikal bebas dari DPPH (Molyneux,2004).

Gambar 2.2 Struktur kimia DPPH
Prinsip pengujian aktivitas antioksidan dengan metode DPPH adalah
mengukur daya peredaman sampel (ekstrak) terhadap radikal bebas DPPH. DPPH
akan bereaksi dengan atom hidrogen dari senyawa peredaman radikal bebas
membentuk DPP Hidrazin yang lebih stabil. Senyawa peredaman radikal bebas
yang bereaksi dengan DPPH akan menjadi radikal baru yang lebih stabil atau
senyawa bukan radikal (Sandrasari,2008). Reaksi antara DPPH dengan atom H
dari senyawa antioksidan dapat dilihat pada Gambar 2.3 berikut :
Gambar 2.3 Reaksi antara DPPH dengan senyawa antioksidan
Panjang gelombang maksimum (λmaks) yang digunakan dalam pengukuran
sampel uji sangat bervariasi. Menurut beberapa literatur panjang gelombang
maksimum untuk DPPH antara lain 515 nm, 516 nm, 517 nm, 518 nm, 519 nm,
dan 520 nm. Apabila pengukuran menghasilkan tinggi puncak maksimum, maka

itulah panjang gelombangnya yaitu sekitar panjang gelombang yang disebutkan di
atas. Nilai absorbansi yang mutlak tidaklah penting, karena panjang gelombang
dapat diatur untuk memberikan absorbansi maksimum sesuai dengan alat yang
digunakan (Molyneux,2004).
2.4 Uraian tumbuhan
Tanaman tempuyung termasuk famili Asteraceae dan spesies Sonchus
arvensis L. dikenal dengan beberapa nama daerah antara lain; lobak air, lempung
jombang dan lain-lain, merupakan tumbuhan herba yang menahun, tegak
mengandung getah, mempunyai akar tunggang yang kuat. Tumbuhan ini hidup
liar,di daerah yang banyak hujan pada ketinggian50-1650 m dpl. Tumbuh di
tempat terbuka atau sedikit terlindung di tempat yang bertebing, dipematang, di
pinggir saluran air (Chairul, 2003).
2.4.1 Morfologi tumbuhan
Tempuyung memiliki ciri fisik yang khas, yaitu daun tunggal yang
berbentuk lanset atau lonjong dengan panjang 6-48 cm dan lebar 3-12 cm, tepi
daun menyirip tidak beraturan dan berwarna hijau muda. Bunga berbentuk
bonggol yang tergabung dalam malai, bertangkai, mahkota berbentuk jarum
dengan warna putih. Buah tempuyung berbentuk kotak dan berusuk lima,
berwarna kuning dengan panjang hingga 4mm. Tempuyung juga memiliki
rizhoma berdiameter 0,25-0,5 cm, berasal dari akar utama dan bercabang – cabang
kecil, kedalaman tanah yang dapat ditembus perakaran tempuyung mencapai 2-5
inchi (5-12cm), tapi tunas vegetatif dapat mencapai kedalaman tanah hingga 2 m
(Wardani, 2004).

2.4.2 Sistematika tumbuhan
Berikut ini adalah sistematika tumbuhan :
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Kelas : Dicotyledoneae
Ordo : Asterales
Famili : Asteracaea
Genus : Sonchus
Spesies : Sonchus arvensis L.
2.4.3 Kandungan Kimia
Hasil penelitian menunjukkan bahwa daun tempuyung mengandung
flavonoid (kaemferol, luteolin-7-O-glukosida dan apigenin-7-O-glukosida),
kumarin, dan taraksasterol (Sriningsih, dkk., 2012).
Daun tempuyung telah banyak digunakan untuk pengobatan terutama
untuk pengobatan batu ginjal (Budiharto, dkk., 2001), asam urat (Susantri, 2013),
antihipertensi (Pradono, 2010), immunomodulator (Sukmayadi, dkk., 2014), dan
anti inflamasi (Bastian, 2009).
2.5 Ekstraksi
Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut
sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan menggunakan pelarut
cair. Senyawa aktif yang terdapat dalam berbagai simplisia dapat digolongkan ke
dalam golongan minyak atsiri, alkaloid, flavonoid dan lain-lain. Diketahui

senyawa aktif yang dikandung simplisia akan mempermudah pemilihan pelarut
dan cara ekstraksi yang tepat (Depkes, RI., 2000).
Menurut Departemen Kesehatan RI (2000), beberapa metode ekstraksi
yang sering digunakan dalam berbagai penelitian antara yaitu :
A. Cara Dingin
1. Maserasi
Maserasi adalah proses penyarian simplisia dengan cara perendaman
menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada
suhu kamar. Maserasi kinetik dilakukan dengan pengadukan yang kontinu.
Remaserasi dilakukan dengan pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan
penyarian maserat pertama dan seterusnya.
2. Perkolasi
Perkolasi adalah proses penyarian simplisia dengan pelarut yang selalu
baru sampai terjadi penyarian sempurna yang umumnya dilakukan pada suhu
kamar. Proses perkolasi terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi
antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetesan/penampungan ekstrak) yang terus-
menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat) yang jumlahnya 1-5 kali bahan.
B. Cara Panas
1. Refluks
Refluks adalah proses penyarian simplisia dengan menggunakan pelarut
pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas
yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik.

2. Digesti
Digesti adalah proses penyarian simplisia dengan pengadukan secara terus-
menerus pada temperatur yang lebih tinggi dari suhu kamar, yaitu secara umum
dilakukan pada temperatur 40-50°C.
3. Sokletasi
Sokletasi adalah proses penyarian simplisia dengan menggunakan pelarut
yang selalu baru, yang umumnya dilakukan dengan alat khusus (menggunakan
alat Sokhlet) sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan jumlah pelarut relatif
konstan dengan adanya pendingin balik.
4. Infundasi
Infundasi adalah proses penyarian simplisia dengan menggunakan pelarut
air pada temperatur 90°C selama waktu 15 menit.
5. Dekoktasi
Dekoktasi adalah proses penyarian simplisia dengan menggunakan pelarut
air pada temperatur 90°C selama 30 menit.
Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat
aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang
sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau
serbuk yang tersisa diperlukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah
ditetapkan (Ditjen POM RI, 1995).

BAB III
METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan secara eksperimental dengan tahapan
pengumpulan dan pengolahan bahan tanaman, pembuatan simplisia, pemeriksaan
karakteristik, pembuatan ekstrak etanol, skrining fitokimia, penetapan kadar total
fenol, penetapan kadar flavonoid dan pengujian aktivitas antioksidan dengan
menggunakan metode peredaman radikal bebas 1,1 diphenyl-2-picrylhydrazil
(DPPH) dengan menggunakan alat spektrofotometer UV-Visibel. Penelitian ini
dilakukan di Laboratorium Farmakognosi dan Laboratorium Penelitian, Fakultas
Farmasi, Universitas Sumatera Utara.
3.1 Alat dan Bahan
3.1.1 Alat–alat
Alat–alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi alat–alat gelas
laboratorium, blender, lemari pengering, rotary evaporator, seperangkat alat
destilasi penetapan kadar air, tanur, neraca analitik, mikroskop, object glass, labu
alas bulat, tabung reaksi, corong, kertas saring, plat tetes, pipet tetes, corong
pisah, penjepit tabung, spatula, cawan penguap, kertas perkamen, alumunium foil,
beaker glass, kurs porselen dan spektrofotometer UV-Visibel.
3.1.2 Bahan–bahan
Bahan–bahan yang digunakan dalam penelitian ini meliputi daun
tempuyung (Sonchus arvensis L.), kertas saring dan akuades. Bahan–bahan kimia
lainnya yang berkualitas pro analisis adalah, DPPH (sigma), kuersetin, metanol,
toluen, kloroform, kloralhidrat, kalium iodida, bismuth (III) nitrat, besi (III)

klorida, asam klorida pekat, asam sulfat pekat, timbal (II) asetat, natrium
karbonat, dan asam galat. Bahan kimia berkualitas teknis; etanol 96%.
3.2 Penyiapan Tumbuhan
Penyiapan tumbuhan meliputi pengumpulan tumbuhan, identifikasi
tumbuhan dan pengolahan tumbuhan.
3.2.1 Pengumpulan Tumbuhan
Pengumpulan tumbuhan dilakukan secara purposif yaitu tanpa
membandingkan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Sampel yang diambil
yaitu daun tempuyung yang masih segar dari Desa Besukun Kecamatan Sibolangit
Kabupaten Deli Serdang, Sumatera Utara.
3.2.2 Identifikasi Tumbuhan
Identifikasi tumbuhan dilakukan di Herbarium Medanese Universitas
Sumatera Utara.
3.2.3 Pengolahan Tumbuhan
Daun tempuyung yang telah dikumpulkan dibersihkan dari pengotoran,
selanjutnya dicuci dibawah air mengalir beberapa kali hingga bersih. Kemudian
ditiriskan lalu disebarkan diatas perkamen sampai merata hingga airnya terserap,
setelah itu ditimbang, diperoleh berat basah, kemudian dikeringkan dilemari
pengering. Setelah sampel kering ditimbang, sampel yang sudah kering
dihaluskan sampai menjadi serbuk dengan menggunakan blender dan dimasukkan
ke dalam wadah plastik tertutup agar terlindung dari cahaya.

3.3 Pembuatan Pereaksi
3.3.1 Pereaksi Bouchardat
Sebanyak 4 g kalium iodida ditimbang, dilarutkan dalam air suling
secukupnya, lalu ditambahkan 2 g iodium kemudian ditambahkan air suling
hingga diperoleh larutan 100 ml (Depkes, RI., 1995).
3.3.2 Pereaksi Mayer
Sebanyak 1,4 g raksa (II) klorida dilarutkan dalam air suling sebanyak 60
ml, pada wadah lain ditimbang sebanyak 5 g kalium iodid lalu dilarutkan dalam
10 ml air suling, kedua larutan dicampurkan dan ditambahkan air suling hingga
diperoleh larutan 100 ml (Depkes, RI., 1995).
3.3.3 Pereaksi Dragendorff
Sebanyak 0,8 g bismut (III) nitrat ditimbang, dilarutkan dalam 20 ml sam
nitrat pekat, pada wadah lain ditimbang sebanyak 27,2 g kalium iodida, dilarutkan
dalm 50 ml air suling, kemudian kedua larutan dicampurkan dan didiamkan
sampai memisah sempurna. Larutan yang jernih diambil dan diencerkan dengan
air suling hingga volume larutan 100 ml (Depkes, RI., 1995).
3.3.4 Pereaksi Molish
Sebanyak 3 g α- naftol ditimbang, dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N
hingga diperoleh larutan 100 ml (Depkes, RI., 1995).
3.3.5 Pereaksi asam klorida 2 N
Sebanyak 17 ml larutan asam klorida pekat ditambahkan air suling hingga
diperoleh larutan 100 ml (Depkes, RI., 1995).
3.3.6 Pereaksi asam sulfat 2 N
Sebanyak 5,4 ml larutan asam sulfat pekat ditambahkan air suling sampai
100 ml (Depkes, RI.,1995).

3.3.7 Pereaksi natrium hidroksida 2 N
Sebanyak 8 g kristal natrium hidroksida dilarutkan dengan air suling
sebanyak 100 ml (Depkes, RI., 1995).
3.3.8 Pereaksi timbal (II) asetat 0,4 M
Sebanyak 15,17 g timbal (II) asetat ditimbang, kemudian dilarutkan dalam
air suling bebas karbon dioksida sebanyak 100 ml (Depkes, RI.,1995).
3.3.9 Pereaksi besi (III) klorida 1%
Sebanyak 1 g besi (III) klorida ditimbang , kemudian dilarutkan dalam air
secukupnya hingga diperoleh larutan 100 ml (Depkes, RI., 1995).
3.3.10 Pereaksi kloralhidrat
Sebanyak 8 gram kristal kloralhidrat ditimbang lalu dilarutkan dalam 10
ml air suling (Depkes, RI., 1995).
3.3.11 Pereaksi Liebermann-Burchard
Sebanyak 20 bagian asam asetat anhidrat dicampur dengan 1 bagian asam
sulfat pekat. Larutan pereaksi ini harus dibuat baru (Harborne, 1984).
3.3.12 Pereaksi alumunium klorida 10%
Sebanyak 1 g alumunium klorida ditimbang kemudian dilarutkan dalam
akuades hingga diperoleh volume larutan 10 ml.
3.3.13 Pereaksi natrium asetat 1M
Sebanyak 0,82 g natrium asetat ditimbang kemudian dilarutkan dalam
akuades hingga diperoleh volume larutan 10 ml.
3.3.14 Larutan natrium karbonat 20%
Sebanyak 4 g natrium karbonat ditimbang kemudian dilarutkan dalam
akuades hingga diperoleh volume larutan 10 ml (Depkes, RI., 1995).

3.4 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia
Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik
dan mikroskopik, penetapan kadar air, kadar sari larut air, kadar sari larut etanol,
kadar abu total, dan kadar abu tidak larut asam (Depkes, RI., 1995).
3.4.1 Pemeriksaan makroskopik
Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan mengamati morfologi
simplisia daun tempuyung dengan cara memperhatikan warna, bentuk, dan tekstur
sampel.
3.4.2 Pemeriksaan mikroskopik
Pemeriksaan mikroskopik terhadap serbuk simplisia daun tempuyung
dilakukan dengan cara menaburkan simplisia di atas gelas preparat yang telah
diteteskan dengan larutan kloralhidrat dan ditutup dengan gelas penutup kemudian
dilihat di bawah mikroskop.
3.4.3 Penetapan kadar air
Penetapan kadar air dilakukan menurut metode Azeotropi (destilasi
toluen). Alat terdiri dari labu alas bulat 500 ml, pendingin, tabung penyambung,
tabung penerima 5 ml berskala 0,05 ml, alat penampung dan pemanas listrik.
Cara kerja :
Sebanyak 200 ml toluen dan 2 ml air suling dimasukkan ke dalam labu
alas bulat, dipasang alat penampung dan pendingin, kemudian didestilasi selama 2
jam. Destilasi dihentikan dan dibiarkan dingin selama 30 menit. Kemudian
volume air dalam tabung penerima dibaca dengan ketelitian 0,05 ml, lalu ke
dalam labu tersebut dimasukkan 5 g serbuk simplisia yang telah ditimbang
seksama. Labu dipanaskan hati – hati selama 15 menit. Pada saat toluen mendidih,
setelah itu kecepatan tetesan diatur 2 tetes untuk tiap detik sampai sebagian besar

air terdestilasi, kemudian kecepatan destilasi dinaikkan sampai 4 tetes tiap detik.
Saat semua air terdestilasi, setelah itu dibilasi bagian dalam pendingin dengan
toluen. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit kemudian tabung penerima dibiarkan
mendingin pada suhu kamar. Setelah air dan toluen memisah sempurna, volume
air dibaca dengan ketelitian 0,05 ml. Selisih kedua volume air yang dibaca sesuai
dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air
dihitung dalam persen (WHO, 1998).
3.4.4 Penetapan kadar sari larut air
Sebanyak 5 g serbuk yang telah dikeringkan, dimaserasi selama 24 jam
dalam 100 ml air-kloroform (2,5 ml kloroform dalam air suling 1000 ml) dalam
labu bersumbat sambil sesekali dikocok selama 6 jam pertama, dibiarkan selama
18 jam, kemudian disaring. Diuapkan 20 ml filtrat sampai kering dalam cawan
penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan
pada suhu 105°C sampai bobot tetap. Hitung kadar dalam persen sari yang larut
dalam air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes, RI., 1995).
3.4.5 Penetapan kadar sari larut etanol
Sebanyak 5 g serbuk yang telah dikeringkan dimaserasi selama 24 jam
dalam 100 ml etanol 96% dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6
jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam. Kemudian disaring, 20 ml filtrat
diuapkan sampai kering dalam cawan penguap berdasar rata yang telah ditara dan
sisanya dipanaskan pada suhu 105°C samapai bobot tetap. Kadar sari larut etanol
dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes, RI., 1995).
3.4.6 Penetapan kadar abu total
Sebanyak 2 g serbuk yang telah digerus dan ditimbang seksama
dimasukkan kedalam kurs platina atau kurs silikat yang telah dipijar dan ditara,

kemudian diratakan. Krus dipijar perlahan – lahan sampai arang habis, pemijaran
dilakukan pada suhu 600°C selama 3 jam. Kemudian didinginkan dan ditimbang
sampai diperoleh bobot tetap. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah
dikeringkan diudara (Depkes, RI., 1995).
3.4.7 Penetapan kadar abu tidak larut asam
Abu yang diperoleh dalam penetapan abu didinginkan dalam 25 ml asam
klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam dikumpulkan,
disaring dengan kertas saring bebas abu, cuci dengan air panas, dipijar sampai
bobot tetap, kemudian didinginkan dan ditimbang. Kadar abu yang tidak larut
asam dihitung terhadap bobot yang dikeringkan di udara (Depkes, RI., 1995).
3.5 Skrining Fitokimia
Skrining fitokimia serbuk simplisia daun tempuyung meliputi :
pemeriksaan senyawa golongan alkaloid, flavonoid, glikosida, tanin, dan saponin.
3.5.1 Pemeriksaan alkaloid
Serbuk simplisia daun tempuyung ditimbang sebanyak 0,5 g kemudian
ditambahkan 1 ml asam klorida 2 N dan 9 ml air suling, dipanaskan di atas
penangas air selama 2 menit, didinginkan dan disaring. Filtrat yang diperoleh
dipakai untuk uji alkaloida: diambil 3 tabung reaksi, lalu ke dalamnya dimasukkan
0,5 ml filtrat
Pada masing – masing tabung reaksi :
1. Tabung 1 ditambahkan 2 tetes pereaksi Mayer
2. Tabung 2 ditambahkan 2 tetes pereaksi Bauchardat
3. Tabung 3 ditambahkan 2 tetes pereaksi Dragendorff

Alkaloida positif jika terjadi endapan atau kekeruhan pada paling sedikit
dua dari tiga percobaan diatas (Depkes, RI., 1995).
3.5.2 Pemeriksaan flavonoid
Sebanyak 10 g serbuk simplisia daun tempuyung ditambahkan 100 ml air
panas, dididihkan selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas. Filtrat yang
diperoleh kemudian diambil 5 ml lalu ditambahkan 0,1 g serbuk Mg dan 1 ml HCl
pekat dan 2 ml amil alkohol, dikocok, dan dibiarkan memisah. Flavonoid positif
jika terjadi warna merah, kuning, jingga pada lapisan amil alkohol (Farnsworth,
1966).
3.5.3 Pemeriksaan glikosida
Serbuk simplisia daun tempuyung ditimbang sebanyak 3 g lalu disari
dengan 30 ml campuran etanol 95% dengan air (7:3) dan 10 ml asam klorida 2 N,
direfluks selama 2 jam, didinginkan dan disaring. Diambil 20 ml filtrat
ditambahkan 25 ml air suling dan 25 ml timbal (II) asetat 0,4 M, dikocok,
didiamkan 5 menit lalu disaring. Filtrat disari sebanyak 3 kali, tiap kali dengan 20
ml campuran isopropanol dan kloroform (2:3). Pada kumpulan sari tambahkan
natrium sulfat anhidrat, disari dan diuapkan pada suhu 50°C. Sisanya dilarutkan
dalam 2 ml metanol. Larutan ini digunakan untuk percobaan berikut : 0,1 ml
larutan percobaan dimasukkan dalam tabung reaksi dan diuapkan di atas penangas
air. Pada sisa ditambahkan 2 ml air dan 5 tetes pereaksi Molish. Kemudian secara
perlahan–lahan ditambahkan 2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung,
terbentuknya cincin berwarna ungu pada batas kedua cairan menunjukkan ikatan
gula (Depkes, RI., 1995).

3.5.4 Pemeriksaan tanin
Sebanyak 0,5 g sampel disari dengan 10 ml air suling, disaring lalu
filtratnya diencerkan dengan air suling sampai tidak berwarna. Diambil 2 ml lalu
ditambahkan 1 sampai 2 tetes pereaksi besi (III) klorida. Terjadi warna biru atau
hijau kehitaman menunjukkan adanya tanin (Farnsworth, 1966).
3.5.5 Pemeriksaan saponin
Sebanyak 0,5 g sebuk simplisia dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan
ditambahkan 10 ml air suling panas, didinginkan kemudian dikocok kuat-kuat
selama 10 detik, timbul busa yang mantap tidak kurang dari 10 menit setinggi 1-
10 cm. Ditambahkan 1 tetes larutan asam klorida 2 N, bila buih tidak hilang
menunjukkan adanya saponin (Depkes, RI., 1995).
3.5.6 Pemeriksaan steroid/ triterpenoid
Sebanyak 1 g serbuk simplisia di maserasi dengan 20 ml n-heksan selama
2 jam, lalu disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap. Pada sisa
ditambahkan beberapa tetes pereaksi Liebermenn-Bauchardat. Timbulnya warna
biru atau biru hijau menunjukkan adanya steroid, sedangkan warna merah, merah
muda atau ungu menunjukkan adanya triterpenoid (Harborne, 1987).
3.6 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Tempuyung (EEDT)
Pembuatan ekstrak dilakukan dengan cara serbuk simplisia diekstraksi
dengan cara maserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Caranya 300 g serbuk
simplisia dimasukkan ke dalam bejana, dituangi dengan 2250 ml etanol 96% ,
kemudian ditutup dan dibiarkan selama 5 hari terlindungi dari cahaya sambil
sering diaduk. Setelah 5 hari campuran tersebut diserkai. Ampas dicuci dengan
etanol 96% secukupnya hingga diperoleh 3000 ml. Pindahkan kedalam bejana

tertutup, dibiarkan di tempat sejuk, terlindungi cahaya selama 2 hari. Kemudian di
endaptuangkan. Pemekatan ekstrak dilakukan dengan alat rotary evaporator,
kemudian ekstrak dikeringkan dengan teknik penguapan menggunakan waterbath
hingga diperoleh ekstrak kental (Ditjen, POM., 1979).
3.7 Penetapan Kandungan Total Fenol EEDT
Penetapan kandungan total fenol ekstrak daun tempuyung dilakukan
secara spektrofotometri menggunakan reagen Folin-Ciocalteu dan asam galat
sebagai pembanding. Prinsip dari metode ini yaitu terbentuknya senyawa
kompleks berwarna biru akibat reaksi antara senyawa fenolik pada sampel dengan
reagen Folin-Ciocalteu dalam suasana basa yang dapat diukur dengan
spektrofotometer visibel, lalu disetarakan dengan asam galat (Orak, 2006).
3.7.1 Pembuatan Larutan Induk Baku Asam Galat
Dibuat larutan asam galat dengan konsentrasi 500 μg/ml. Sebanyak 5,0 mg
asam galat dilarutkan dalam 10 ml metanol pro analysis.
3.7.2 Penentuan Operating Time
Dibuat larutan asam galat dengan konsentrasi 500 μg/ml. Kemudian
diambil larutan sebanyak 0,1 ml dan dimasukkan kedalam tabung reaksi.
Ditambahkan 7,9 ml akuades dan 0,5 ml larutan Folin-Ciocalteu. Kemudian
divortex selama selama satu menit. Larutan di pindahkan kedalam labu tentukur
10 ml kemudian di cukupkan dengan larutan Natrium Karbonat 20 %. Diukur
absorbansi larutan pada panjang gelombang 775 nm setiap 1 menit dan diamati
kapan larutan tersebut mulai menghasilkan absorban yang stabil yang akan
digunakan sebagai operating time.

3.7.3 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Asam Galat
Dibuat larutan asam galat dengan konsentrasi 500 μg/ml. Kemudian
diambil larutan sebanyak 0,1 ml dan dimasukkan kedalam tabung reaksi.
Ditambahkan 7,9 ml akuades dan 0,5 ml larutan Folin-Ciocalteu. Kemudian
divortex selama selama satu menit. Larutan di pindahkan kedalam labu tentukur
10 ml kemudian di cukupkan dengan larutan Natrium Karbonat 20 %. Kemudian
larutan diinkubasi selama waktu operating time. Ukur panjang gelombang
maksimum menggunakan spektrofotometer visibel pada rentang 400nm – 800nm.
3.7.4 Pembuatan Kurva Kalibrasi Asam Galat
Dibuat larutan asam galat dengan konsentrasi 15,625; 31,25; 62,5; 125;
250 dan 500 μg/ml. Kemudian diambil masing–masing larutan sebanyak 0,1 ml
dan dimasukkan kedalam tabung reaksi. Ditambahkan 7,9 ml akuades dan 0,5 ml
larutan Folin-Ciocalteu. Kemudian divortex selama selama satu menit.
Larutan dipindahkan ke dalam labu tentukur 10 ml kemudian dicukupkan
dengan larutan Natrium Karbonat 20 %. Kemudian larutan diinkubasi selama
waktu operating time. Diukur absorbansinya pada panjang gelombang maksimum
dan didapat kurva kalibrasi asam galat serta persamaan garis linear y = ax + b.
3.7.5 Penetapan Kandungan Fenol Total
Sebanyak kurang lebih 10,0 mg sampel ekstrak etanol daun tempuyung
dilarutkan dalam 10 ml methanol. Diambil larutan sebanyak 0,1 ml dan
dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Ditambahkan 7,9 ml akuades dan 0,5 ml
larutan Folin-Ciocalteu. Kemudian divortex selama selama satu menit. Larutan
dipindahkan ke dalam labu tentukur 10 ml kemudian dicukupkan dengan larutan
Natrium Karbonat 20 %. Kemudian larutan diinkubasi selama waktu operating
time. Ukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer visibel pada panjang

gelombang maksimum sebanyak 5 kali untuk satu kali pengukuran dan diambil
rata – ratanya. Pengukuran dilakukan dengan pengulangan sebanyak 3 kali.
Kadar total fenol ekstrak daun tempuyung dihitung dengan menggunakan
substitusi nilai–nilai absorbansi rata–rata sampel ke dalam persamaan regresi
linear yang didapat dari kurva kalibrasi untuk mendapatkan konsentrasinya. Nilai
konsentrasi sampel yang didapat kemudian disusbtitusikan lagi kedalam rumus
perhitungan kadar total fenol berikut :
Kadar total fenol =
Keterangan : x = Konsentrasi (μg/ml )
V = Volume larutan sampel ( ekstrak ) ( L )
FP = Faktor pengenceran larutan sampel
BS = Berat sampel ( g )
Kadar total fenol disajikan dalam satuan mg ekuivalen asam galat / gram
sampel (mg GAE/g).
3.8 Penetapan Kandungan Flavonoid Ekstrak Etanol Daun Tempuyung
Penetapan kandungan flavonoid ekstrak daun tempuyung menggunakan
metode kolorimetri alumunium klorida dengan pengukuran absorbansi secara
spektrofotometer (Chang, dkk., 2002) dan sebagai standart digunakan kuersetin.
3.8.1 Pembuatan Larutan Induk Baku Kuersetin
Dibuat larutan kuersetin dengan konsentrasi 100 μg/ml. Sebanyak 1 mg
kuersetin dilarutkan dalam 10 ml metanol pro analysis.

3.8.2 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Kuersetin
Dibuat larutan kuersetin dengan konsentrasi 100 μg/ml. Kemudian diambil
larutan sebanyak 2 ml dan dimasukkan kedalam labu tentukur. Ditambahkan 0,1
ml AlCl3 dan 0,1 ml natrium asetat. Kemudian ditambahkan akuades sebanyak
2,8 ml dan diinkubasi selama 40 menit. Ukur panjang gelombang maksimum
menggunakan spektrofotometer visibel pada rentang 400 nm – 800 nm.
3.8.3 Pembuatan Kurva Kalibrasi Kuersetin
Dibuat larutan kuersetin dengan konsentrasi 6,25; 12,5; 25; 50 dan 100
μg/ml. Kemudian diambil masing–masing larutan sebanyak 2 ml dan dimasukkan
ke dalam labu tentukur 5 ml. Ditambahkan 0,1 ml AlCl3 dan 0,1 ml natrium
asetat. Kemudian ditambahkan akuades sebanyak 2,8 ml dan diinkubasi selama 40
menit. Diukur absorbansinya pada panjang gelombang maksimum dan didapat
kurva kalibrasi kuersetin serta persamaan garis linear y = ax + b.
3.8.4 Penetapan Kandungan Flavonoid
Sebanyak 25 mg sampel ekstrak etanol daun tempuyung dilarutkan dalam
25 ml methanol. Diambil larutan sebanyak 3 ml dan dimasukkan ke dalam labu
tentukur 10 ml. Ditambahkan metanol sampai garis tanda sehingga konsentrasi
larutan menjadi 300 μg/ml. Dari larutan dengan konsetrasi 300 μg/ml diambil 2
ml dan diukur dengan 2 kali pengulangan. Sampel dengan konsentrasi 300 μg/ml
diambil sebanyak 2 ml kemudian ditambahkan sebanyak 0,1 ml AlCl3 , 0,1 ml
Natrium asetat dan 2,8 ml akuades. Ukur absorbansinya menggunakan
spektrofotometer visibel pada panjang gelombang 400 – 800 nm sebanyak 5 kali
untuk satu kali pengukuran dan diambil rata – ratanya.
Kadar flavonoid ekstrak daun tempuyung dihitung dengan menggunakan
substitusi nilai–nilai absorbansi rata–rata sampel ke dalam persamaan regresi

linear yang didapat dari kurva kalibrasi untuk mendapatkan konsentrasinya. Nilai
konsentrasi sampel yang didapat kemudian disusbtitusikan lagi kedalam rumus
perhitungan kadar total flavonoid berikut :
Kadar flavonoid =
Keterangan : x = Konsentrasi (μg/ml )
Kadar flavonoid disajikan dalam satuan mg ekuivalen kuersetin / gram
sampel (mg Q/g).
3.9 Pengujian Kemampuan Antioksidan dengan Spektrofotometer
3.9.1 Prinsip metode pemerangkapan radikal bebas DPPH
Kemampuan sampel uji dalam meredam proses oksidasi DPPH sebagai
radikal bebas dalam larutan metanol sehingga terjadi perubahan DPPH dari ungu
menjadi kuning dengan nilai IC50 sebagai parameter menentukan aktivitas
antioksidan sampel (Molyneux, 2004).
3.9.2 Pembuatan larutan blanko
Sebanyak 9,8 mg DPPH ditimbang kemudian dimasukkan ke dalam labu
tentukur 50 ml, dicukupkan volumenya dengan metanol sampai garis tanda,
diperoleh larutan DPPH 0,5 mM (konsentrasi 200 μg/ml).
Larutan DPPH 0,5 mM (konsentrasi 200 μg/ml) dipipet sebanyak 5 ml,
kemudian dimasukkan kedalam labu tentukur 25 ml, lalu dicukupkan dengan
metanol sampai garis tanda (konsentrasi 40 μg/ml).

3.9.3 Pembuatan larutan induk
3.9.3.1 Pembuatan larutan induk ekstrak etanol daun tempuyung
Sebanyak 25 mg ekstrak etanol daun tempuyung ditimbang, dimasukkan
ke dalam labu tentukur 25 ml dilarutkan dengan metanol lalu volumenya
dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda (konsentrasi 1000 μg/ml).
3.9.3.2 Pembuatan larutan induk kuersetin
Sebanyak 1 mg serbuk kuersetin ditimbang, dimasukkan kedalam labu
tentukur 10 ml dilarutkan dengan metanol lalu volumenya dicukupkan dengan
metanol sampai garis tanda (konsentrasi 100 μg/ml).
3.9.4 Pembuatan larutan uji
3.9.4.1 Pembuatan larutan uji ekstrak etanol daun tempuyung
Larutan induk dipipet sebanyak 0,16 ml; 0,31 ml; 0,625 ml dan 1,25 ml ke
dalam labu ukur 25 ml untuk mendapatkan konsentrasi larutan uji 6,25 μg/ml,
12,5 μg/ml, 25 μg/ml, dan 50 μg/ml. Kedalam masing – masing labu tentukur
ditambahkan 5 ml larutan DPPH 0,5 mM (konsentrasi 1000 μg/ml) lalu
volumenya dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda. Diukur pada menit ke
30, 45 dan 60 menggunakan spektrofotometer UV-visibel dengan panjang
gelombang 516 nm.
3.9.4.2 Larutan uji kuersetin
Larutan induk dipipet sebanyak 0,3125ml; 0,625 ml; 1,25 ml; dan 2,5 ml
ke dalam labu tentukur 25 ml untuk mendapatkan konsentrasi larutan uji 1,25
μg/ml, 2,5 μg/ml, 5 μg/ml dan 10 μg/ml.

3.9.5 Analisa persen pemerangkapan radikal bebas DPPH
Menurut Molyneux (2004), penentuan persen pemerangkapan radikal
bebas oleh sampel uji, ekstrak etanol daun tempuyung dengan kuersetin sebagai
kontrol positif, menggunakan metode pemerangkapan radikal bebas 1,1 –
diphenyl-2-picrylhydrazil (DPPH), yaitu dihitung dengan rumus:
% inhibisi = x 100 %
Keterangan : Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
3.9.6 Analisa nilai IC50
Perhitungan yang digunakan dalam penentuan aktivitas pemerangkapan
radikal bebas adalah nilai IC50 (Inhibitory Concentration), nilai tersebut
menggambarkan besarnya konsentrasi senyawa uji yang dapat memerangkap
radikal bebas sebesar 50%. Hasil perhitungan dimasukkan ke dalam persamaan
regresi dengan larutan uji (ppm) sebagai absis (sumbu x) dan nilai % inhibisi
(antioksidan) sebagai ordinatnya (sumbu y) (Molyneux, 2004).

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Identifikasi Bahan Tumbuhan
Hasil identifikasi tumbuhan dilakukan di Herbarium Medanese
Universitas Sumatera Utara menyebutkan bahwa tumbuhan yang digunakan
adalah tumbuhan tempuyung. Hasil identifikasi tumbuhan dapat dilihat pada
Lampiran 1 halaman 56.
4.2 Karakteristik Tumbuhan dan Simplisia
4.2.1 Pemeriksaan makroskopik
Hasil pemeriksaan makroskopik daun tempuyung memiliki bentuk daun
tunggal, tidak bertangkai dengan helai daun berbentuk lonjong atau berbentuk
lanset; berlekuk menjari atau berlekuk tidak teratur. Pangkal daun menyempit
atau berbentuk panah sampai berbentuk jantung; dengan panjang 6 cm sampai 48
cm, lebar daun 2 cm sampai 10 cm; permukaan daun sebelah atas agak kasar dan
berwarna pucat. Hasil pemeriksaan dapat dilihat pada Lampiran 2 halaman 57.
4.2.2 Pemeriksaan Mikroskopik
Hasil pemeriksaan mikroskopik daun tempuyung terlihat terdapat fragmen
berkas pembuluh berbentuk spiral dan stomata tipe anisositik pada epidermis
bawah pada Lampiran 3 halaman 59.
4.2.3 Pemeriksaan Kadar
Hasil pemeriksaan kadar air, kadar sari larut dalam air, kadar sari larut
dalam etanol, kadar abu total dan kadar abu yang tidak larut dalam asam dapat
dilihat pada Tabel 4.1.

Tabel 4.1 Hasil pemeriksaan karakteristik simplisia daun tempuyung
No Parameter Hasil (%) Syarat MMI

1. Kadar air 2,984 Tidak lebih dari 12%
2. Kadar sari larut dalam air 25,43 Tidak kurang dari 24%
3. Kadar sari larut dalam etanol 17,06 Tidak kurang dari 7,5%
4. Kadar abu total 16,51 Tidak lebih dari 17%
5. Kadar abu tidak larut asam 0,083 Tidak lebih dari 0,25%
Penetapan kadar air menunjukkan jumlah air yang terkandung dalam
simplisia yang digunakan. Kadar air simplisia dilakukan untuk menjaga kualitas
simplisia karena kadar air mempunyai kaitan dengan kemungkinan pertumbuhan
jamur. Syarat kadar air untuk simplisia daun pada umumnya < 12%.
Penetapan kadar sari menunjukkan kandungan kimia terendah yang
terdapat dalam simplisia. Hasil dari kadar sari larut air lebih tinggi daripada kadar
sari larut etanol, karena dalam air terkandung senyawa kimia metabolit primer dan
sekunder terutama glikosida.
Penetapan kadar abu total dilakukan untuk mengetahui kadar senyawa
anorganik dalam simplisia, seperti mineral kalsium, magnesium, natrium dan
kalium serta kadar cemaran logam berat seperti timbal, merkuri, dan kadmium
sedangkan tujuan penetapan kadar abu tidak larut asam untuk mengetahui kadar
zat anorganik yang tidak larut dalam asam, misalnya silikat. Semua hasil
karakterisasi memenuhi persyaratan MMI. Perhitungan hasil karakterisasi
simplisia dapat dilihat pada Lampiran 7 pada halaman 63.

4.3 Hasil Skrining Fitokimia
Hasil skrining fitokimia terhadap simplisia dan ekstrak etanol daun
tempuyung diketahui bahwa mengandung golongan senyawa – senyawa kimia
seperti yang terlihat pada Tabel 4.2 di bawah ini
Tabel 4.2 Hasil pemeriksaan skrining fitokimia simplisia dan ekstrak daun
tempuyung
Hasil
No Pemeriksaan
Serbuk Simplisia Ekstrak Etanol
1 Alkaloid + +
2 Flavonoid + +
3 Glikosida + +
4 Saponin + +
5 Tanin + +
6 Steroid/triterpenoid + +
Keterangan : + ( mengandung senyawa )

- ( tidak mengandung senyawa )
Hasil skrining fitokimia menunjukkan adanya senyawa alkaloid,
flavonoid, glikosida, saponin, tanin dan steroid/triterpenoid. Senyawa antioksidan
alami yang terdapat dalam tumbuhan, diantaranya senyawa polifenol yang
terdapat berupa golongan flavonoid. Senyawa – senyawa tersebut bertindak
sebagai penangkap radikal bebas karena gugus hidroksil yang dikandungnya dapat
mendonorkan hidrogen kepada radikal bebas. Hal ini menunjukkan bahwa
simplisia daun tempuyung memiliki potensi sebagai antioksidan (Kumalaningsih,
2006; Silalahi, 2006).
4.4 Analisis Aktivitas
4.4.1 Pemeriksaan Kandungan Total Fenol
Penetapan kadar fenol total dilakukan dengan cara metode
spektrofotometri menggunakan pereaksi Folin-Ciocalteu. Prinsip dari metode ini

adalah terbentuknya senyawa kompleks berwarna biru akibat reaksi antara
senyawa fenolik dengan Folin-Ciocalteu yang dapat diukur pada panjang
gelombang 775 nm. Pereaksi ini mengoksidasi fenolik-hidroksi mereduksi asam
heteropoli (fosfomolibdat-fosfotungstat) yang terdapat dalam pereaksi folin
ciocalteu menjadi suatu kompleks molibdenum-tungsten berwarna biru yang dapat
dideteksi dengan spektrofotometer. Semakin besar konsistensi senyawa fenolik
maka semakin banyak ion fenolat yang dapat mereduksi heteropoli
(fosfomolibdat-fosfotungstat) menjadi kompleks molibdenum-tungsten sehingga
warna biru yang dihasilkan semakin pekat. Senyawa fenolik bereaksi dengan
reagen Folin-Ciocelatu hanya dalam suasana basa agar terjadi disosiasi proton
pada senyawa fenolik menjadi ion fenolat. Suasana basa ini dibentuk dengan
menambahkan Na2CO3 20% (Alfian dan Susanti, 2012). Senyawa fenol yang
digunakan sebagai pembanding adalah asam galat. Pemilihan asam galat
didasarkan atas ketersediaan substansi yang stabil dan murni (Rahmawati, 2009).
4.4.1.1 Hasil penentuan operating time
Penetapan kadar fenol dimulai dengan melakukan operating time larutan
baku asam galat dengan konsentrasi 500 ppm segera setelah penambahan reagen
Folin-Ciocalteu dan larutan Na2CO3 20% pada panjang gelombang 765 nm.
Larutan tersebut mulai menghasilkan nilai absorban yang stabil pada menit ke 90.
Dengan demikian dipilih waktu pendiaman selama 90 menit sejak percampuran
sampel (Lampiran 8 pada halaman 68).
4.4.1.2 Hasil penentuan panjang gelombang serapan maksimum
Pengukuran panjang gelombang maksimum menggunakan larutan baku
asam galat dengan konsentrasi 500 ppm, dilakukan pengukuran pada menit ke-90
setelah penambahan reagen Folin-Ciocalteu dan proses pengocokan selama 1

menit serta dibasakan dengan NaCO3 20% menghasilkan panjang gelombang
maksimum 775 nm seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4.1.
Gambar 4.1 Kurva Panjang Gelombang Maksimum Asam Galat
4.4.1.3 Hasil penentuaan kurva kalibrasi asam galat
Kurva kalibrasi dibuat dengan mengukur absorbansi larutan dengan
konsentrasi 15,625; 31,25; 62,5; 125; 250 dan 500 μg/ml pada panjang gelombang
775 nm. Nilai absorban setiap konsentrasi dapat dilihat pada Tabel 4.3.
Tabel 4.3 Absorbansi Standart Asam Galat
Konsentrasi (ppm) Absorbansi

0 0,00000
15,625 0,04813
31,25 0,05702
62,5 0,09088
125 0,13991
250 0,21802
500 0,42700
Dari tabel tersebut diperoleh kurva kalibrasi seperti ditunjukkan pada
Gambar 4.2 berikut:

Gambar 4.2 Kurva kalibrasi standart asam galat
Kurva kalibrasi didapat dari hubungan berbagai kadar asam galat dengan
absorbansi yang terbentuk. Dari kurva kalibrasi ini diperoleh nilai r. Nilai r
berkisaran antara 0 sampai 1 yang menunjukkan seberapa dekat nilai perkiraan
untuk analisis regresi yang mewakili data yang sebenarnya. Dari kurva kalibrasi
diatas diperoleh persamaan garis regresi y = 0,0007994907 x + 0,0277087624
dengan nilai r = 0,997474947.
4.4.1.4 Hasil pengukuran kadar total fenol
Kadar total fenol dihitung dengan mensubstitusikan nilai absorban (y)
sampel larutan ekstrak etanol daun tempuyung pada panjang gelombang
maksimum ke dalam persamaan regresi linear y = ax + b yang diperoleh dari
kurva kalibrasi asam galat sehingga diperoleh konsentrasinya (x). Nilai x
kemudian disubstitusikan dalam rumus perhitungan kadar total fenol. Pengukuran
kadar total fenol dilakukan dengan pengulangan sebanyak 5 kali dan diambil rata
– ratanya seperti yang disajikan dalam Tabel 4..

Tabel 4.4 Rata - rata kandungan total fenol
Berat sampel Rata – Rata Kadar Fenol Total

Pengulangan Absorban
(BS) Absorban (mg GAE/g sampel )
0,07532
0,07599
0,0118 1 0,07875 0,07769 52,97
0,07899
0,07951
0,07951
0,07912
0,0119 2 0,07845 0,07832 53,19
0,07784
0,07668
0,07487
0,07510
0,0111 3 0,07477 0,07473 52,98
0,07468
0,07423
Rata – rata Kadar Total Fenol 53,04 ± 0,46
Dari tabel diatas, dapat disimpulkan bahwa kadar total fenol yang terdapat
dalam ekstrak etanol daun tempuyung sebesar 53,04 ± 0,46 mg GAE/g ekstrak.
Kadar total fenol yang ditetapkan menurut metode kolorimetri dengan
pereaksi Folin-Ciocalteu bukanlah kadar absolut, tapi prinsipnya berdasarkan
kapasitas reduksi dari bahan yang diuji terhadap suatu reduksi ekivalen dari asam
galat (Rahmawati, 2009).
Kadar total fenol dipengaruhi oleh jenis pelarut. Fenol merupakan
senyawa yang bersifat polar sehingga kelarutannya paling tinggi dalam pelarut
polar. Pelarut yang bersifat polar mampu melarutkan fenol lebih baik sehingga
kadarnya dalam ekstrak menjadi tinggi (Moein dan Mahmood,2010).

4.4.2 Pemeriksaan Kandungan Total Flavonoid
Penetapan kandungan total flavonoid dilakukan dengan cara mengunakan
metode kolorimetri menggunakan pereaksi Alumunium Klorida berdasarkan
metode Chang, dkk., (2002). Prinsip penetapan kadar flavonoid metode
alumunium klorida adalah terjadinya pembentukan kompleks antara alumunium
klorida dengan gugus keto pada atom C-4 dan gugus hidroksi pada atom C-3 atau
C-5 yang bertetangga dari golongan flavon dan flavonol membentuk senyawa
stabil yang berwarna kuning. Senyawa yang digunakan sebagai standart dalam
percobaan ini adalah kuersetin, karena kuersetin merupakan flavonoid golongan
flavonol yang memiliki gugus keto pada atom C-4 dan juga gugus hidroksil pada
atom C-3 dan C-5 yang bersampingan.
Pengukuran serapan panjang gelombang maksimum dilakukan pada
rentang 400-800 nm. Pengukuran menggunakan larutan baku kuersetin dengan
konsentrasi 100 μg/ml, dilakukan pengukuran pada menit ke-40 setelah
penambahan reagen AlCl3 dan natrium asetat yang menghasilkan panjang
gelombang maksimum 432 nm seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4.3.
Gambar 4.3 Kurva panjang gelombang maksimum kuersetin

4.4.2.2 Hasil penentuaan kurva kalibrasi kuersetin
Kurva kalibrasi dibuat dengan mengukur absorbansi larutan dengan
konsentrasi 6,25; 12,5; 25; 50 dan 100 μg/ml pada panjang gelombang 432 nm.
Nilai absorban setiap konsentrasi dapat dilihat pada Tabel 4.5.
Tabel 4.5 Absorbansi Standart Kuersetin
Konsentrasi (ppm) Absorbansi

0 0,00000
6,25 0,22269
12,5 0,44473
25 0,85591
50 1,71053
100 2,87875
Dari tabel tersebut diperoleh kurva kalibrasi seperti ditunjukkan pada
Gambar 4.4.
Gambar 4.4 Kurva kalibrasi standart kuersetin
Dari kurva kalibrasi diperoleh persamaan regresi y = 0,028931136 x +
0,084533733 dengan nilai r = 0,997760542. Nilai r yang mendekati 1
menunjukkan kurva kalibrasi linier dan terdapat hubungan antara konsentrasi
larutan kuersetin dengan nilai serapan.

4.4.2.3 Hasil pengukuran kadar total flavonoid
Kadar total flavonoid dihitung dengan mensubstitusikan nilai absorban (y)
sampel larutan ekstrak etanol daun tempuyung pada panjang gelombang
maksimum ke dalam persamaan regresi linear y = ax + b yang diperoleh dari
kurva kalibrasi kuersetin sehingga diperoleh konsentrasinya (x). Nilai x kemudian
disubstitusikan dalam rumus perhitungan kadar total flavonoid. Pengukuran kadar
total flavonoid dilakukan dengan pengulangan sebanyak 2 kali dan diambil rata –
ratanya seperti yang disajikan dalam Tabel 4.6.
Tabel 4.6 Rata – rata Kandungan Total Flavonoid
Berat Kadar Total

Rata – Rata
sampel Pengulangan Absorban Flavonoid
Absorban
(BS) (mg QE/g sampel )
0,39403
0,39388
0,0251 1 0,39371 0,39378 35.10
0,39357
0,39371
0,39525
0,39529
0,0253 2 0,39513 0,395038 34,98
0,39482
0,39470
Rata – rata kadar total Flavonoid 35,04 ± 0,077
Dari tabel diatas, dapat disimpulkan bahwa kadar total flavonoid yang
terdapat dalam ekstrak etanol daun tempuyung sebesar 35,04 ± 0,077 mg QE/g
ekstrak.
Flavonoid seperti kuersetin diketahui sebagai antioksidan yang potensial.
Aktivitas sebagai antioksidan dimiliki oleh sebagian besar flavonoid disebabkan
adanya gugus hidroksi fenolik dalam struktur molekulnya. Ketika senyawa -

senyawa ini bereaksi dengan radikal bebas, mereka membentuk radikal baru yang
distabilkan oleh efek resonansi inti aromatik (Hertiani dkk., 2000).
Gambar 4.5 Pembentukan senyawa kompleks kuersetin-alumunium klorida
Tahapan analisis flavonoid dengan metode kolorimetri menggunakan
reagen alumunium klorida sebagai pereaksi kromogenik . Berdasarkan metode
analisis ini, flavonoid total yang terukur merupakan sumbangan dari golongan
flavon dan flavonol yang terdapat pada ekstrak karena hanya kedua kelompok
inilah yang mampu membentuk kompleks stabil dengan alumunium klorida pada
gugus keto C-4 dan C-3 atau C-5 dari gugus hidroksil yang dimiliki (Chang dkk.,
2002).
4.4.3 Pemeriksaan Kandungan Antioksidan
Aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun tempuyung diperoleh dari hasil
pengukuran absorbansi DPPH dengan adanya penambahan larutan uji ekstrak
etanol daun tempuyung.
Hasil pengukuran serapan maksimum larutan DPPH 40 ppm dalam
metanol diperoleh dari pengukuran menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Hasil
pengukuran menunjukkan bahwa larutan DPPH dalam metanol menghasilkan
serapan maksimum sebesar 0,98393 pada panjang gelombang 516 nm dan

termasuk dalam kisaran panjang gelombang sinar tampak (400-800 nm). Data
hasil pengukuran dapat dilihat pada Gambar 4.6 (Rohman, 2007).
Gambar 4.6 Kurva serapan maksimum larutan DPPH 40 ppm dalam metanol
secara spektrofotometri visibel.
4.4.3.2 Hasil analisis aktivitas antioksidan
Untuk melihat hubungan absorbansi DPPH terhadap pertambahan
konsentrasi larutan uji dalam menganalisis aktivitas antioksidan dapat dilihat pada
Gambar 4.7
Gambar 4.7 Hasil analisis aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun tempuyung
pada menit ke-60.

Aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun tempuyung diperoleh dari hasil
absorbansi DPPH pada panjang gelombang 516 nm pada menit ke-60 dengan
adanya penambahan larutan uji dengan konsentrasi 6,25 μg/ml, 12,5 μg/ml, 25
μg/ml, dan 50 μg/ml yang dibandingkan dengan kontrol DPPH (tanpa
penambahan larutan uji). Pada grafik hasil analisis aktivitas antioksidan ekstrak
etanol daun tempuyung dapat dilihat adanya penurunan nilai absorbansi DPPH
yang diberi larutan uji dibandingkan terhadap kontrol positif Kuersetin pada setiap
kenaikan konsentrasi. Grafik hasil analisis aktivitas antioksidan Kuersetin pada
menit ke – 60 dapat dilihat pada Gambar 4.8.
Gambar 4.8 Hasil analisis aktivitas antioksidan kuersetin pada menit ke- 60.
Penurunan nilai absorbansi menunjukkan telah terjadinya pemerangkapan
radikal bebas DPPH oleh larutan uji sehingga menunjukkan adanya aktivitas
antioksidan dari sampel. Interaksi antioksidan dengan DPPH baik secara transfer
elektron atau radikal hidrogen kepada DPPH, akan menetralkan radikal bebas
DPPH. Jika semua elektron pada radikal bebas DPPH menjadi berpasangan, maka
warna larutan berubah dari ungu tua menjadi kuning terang dan absorbansinya

pada panjang gelombang maksimum akan hilang. Perubahan ini dapat diukur
secara stoikiometri sesuai dengan jumlah atom hidrogen atau elektron yang
ditangkap oleh molekul DPPH akibat adanya zat antioksidan (Molyneux, 2004).
4.4.3.3 Hasil analisis peredaman radikal bebas DPPH oleh sampel uji
Kemampuan antioksidan diukur pada menit ke-60 sebagai penurunan
serapan larutan DPPH (peredaman warna ungu DPPH) akibat adaanya
penambahan larutan uji. Nilai serapan larutan DPPH sebelum dan sesudah
penambahan larutan uji dihitung sebagai persen peredaman. Hasil analisis yang
telah dilakukan, diperoleh nilai persen peredaman pada setiap kenaikan
konsentrasi sampel uji seperti yang terlihat pada Tabel 4.7.
Tabel 4.7 Hasil analisis peredaman radikal bebas ekstrak etanol daun tempuyung
dan kuersetin
Konsentrasi Larutan Uji % Peredaman

Jenis Ekstrak
(ppm)
I II III
0 (blanko) - - -
6,25 0,99 1,008 1,007
EEDT 12,5 6,766 6,784 6,781
25 11,022 11,033 11,047
50 21,461 21,475 21,476
0 (blanko) - - -
1,25 15,943 15,895 15,907
Kuersetin 2,5 28,782 28,718 28,718
5 59,846 59,817 59,801
10 90,77 90,778 90,780
Keterangan : EEDT (ekstrak etanol daun tempuyung)
Pada Tabel 4.7 diatas dapat dilihat bahwa semakin meningkatnya
konsentrasi larutan uji maka semakin meningkatnya aktivitas peredaman DPPH
dikarenakan semakin banyak DPPH yang berpasangan dengan atom hidrogen dari
ekstrak sehingga serapan DPPH menjadi menurun.

4.4.3.3 Analisa nilai IC50 (Inhibitory Concentration) sampel uji
Nilai IC50 diperoleh berdasarkan persamaan regresi linier yang didapatkan
dengan cara memplot konsentrasi larutan uji dan persen peredaman DPPH sebagai
parameter aktivitas antioksidan dimana konsentrasi larutan uji (ppm) sebagai absis
dan nilai persen peredaman sebagai ordinat. Hasil analisis nilai IC50 yang
diperoleh berdasarkan perhitungan persamaan regresi dapat dilihat di Tabel 4.8.
Tabel 4.8 Nilai IC50 ekstrak etanol daun tempuyung dan kuersetin
Sampel Nilai IC50

EEDT 114,417 ppm ± 0,0367
Kuersetin 4,942 ppm ± 0,0342
Keterangan : EEDT (ekstrak etanol daun tempuyung)
Aktivitas antioksidan dinyatakan dengan IC50 yaitu konsentrasi yang
dibutuhkan untuk menghasilkan penurunan aktivitas DPPH sebesar 50%. Semakin
kecil IC50 semakin kuat aktivitas antioksidan.
Menurut kategori kekuatan antioksidan pada lampiran 12, menunjukkan
bahwa ekstrak etanol daun tempuyung memiliki aktivitas antioksidan yang
tergolong sedang sedangkan kuersetin memiliki aktivitas antioksidan yang
tergolong sangat kuat. Hasil penelitian ini juga didukung dengan penelitian
Yuliarti dkk. (2013) yang menunjukkan ekstrak etanol daun tempuyung memiliki
antioksidan yang sedang dengan nilai IC50 sebesar 150,860 ppm.
Aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun tempuyung salah satunya hasil
kontribusi dari senyawa fenolik. Senyawa fenolik dapat beraktivitas sebagai
antioksidan dengan menangkap radikal bebas melalui pemberian atom hidrogen
pada pola radikal tersebut, sehingga radikal bebas tersebut menjadi senyawa yang
stabil dan kurang reaktif. Kemampuan senyawa fenolik untuk menangkap radikal
DPPH dapat dilihat pada Gambar 4.9.

Gambar 4.9 Reaksi penangkapan radikal bebas DPPH dengan Fenol
Hasil analisis kuantitatif terhadap sampel uji yang memiliki aktivitas
antioksidan dapat dilihat pernurunan intensitas warna DPPH menjadi pudar.
Senyawa DPPH berwarna ungu karena adanya delokalisasi elektron pada atom
nitrogen menjadi kuning setelah direaksikan dengan senyawa antioksidan. Hal ini
dikarenakan ketika antioksidan mampu mendonorkan hidrogen yang bereaksi
radikal dan menurunkan radikal DPPH, reaksi ini akan memberikan peningkatan
kompleks non radikal dan menurunkan radikal DPPH yang ditandai dengan
terbentuknya warna kuning (Nurul, 2013).

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan :
a. nilai kandungan total fenol ekstrak etanol daun tempuyung yang diukur
secara spektrofotometri dengan metode spektrofotometri menggunakan
reagen Folin-Ciocalteu sebesar 53,04 ± 0,46 mg GAE/g ekstrak.
b. nilai kandungan total flavonoid ekstrak etanol daun tempuyung yang
diukur secara spektrofotometri dengan metode kolorimetri menggunakan
reagen AlCl3 sebesar 35,04 ± 0,077 mg QE/g ekstrak.
c. ekstrak etanol daun tempuyung mempunyai aktivitas antioksidan dalam
kategori sedang dengan nilai IC50 sebesar 114,417 ± 0,037 ppm
menggunakan metode pemerangkapan radikal bebas 1,1 –diphenyl-2-
picrylhydrazil (DPPH).
5.2 Saran
Pada penelitian selanjutnya dapat dilakukan pengukuran aktivitas
antioksidan dengan menggunakan metode ß-karoten-asam linoleat.

DAFTAR PUSTAKA
Alfian, R., dan Susanti, H. (2012). Penetapan Kadar Fenolik Total Ekstrak
Metanol Kelopak Bunga Rosella Merah (Hibiscus sabdariffa Linn) dengan
Variasi Tempat Tumbuh secara Spektrofotometri. Jurnal Ilmiah
Kefarmasian. 2(1). Halaman 73-80.
Bastian, L.L. (2009). Skrining Fitokimia Uji Efek Anti Inflamasi Ekstrak Etanol
Daun Tempuyung terhadap Radang pada Tikus. Skripsi. Medan:Fakultas
Farmasi. Universitas Sumatera Utara. Halaman 48.
Budiharto, M., Ngatidjan., dan Imono A.D. (2001). Tempuyung sebagai Alternatif
Penghancur Batu Ginjal. Media Litbang Kesehatan volume 11(4).
Chang, C. C., Yang, M. H., Wen, H. M., dan Chern, J. C. (2002). Estimation of
Total Flavonoid Content in Propolis by Two Complementary Colorimetric
Methods, J. Food. Drug Anal, 10 : 178-182.
Chairul, S.M., Ros S., dan Chairul. (2003). Aktivitas Antioksidan Ekstrak Air
Tempuyung (Sonchus arvensis L.) secara Invitro. Majalah Farmasi
Indonesia. 14(4). Halaman 208-215.
Depkes RI. (1995). Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Jakarta : Depkes RI.
Halaman 321,325,333-334,336.
Depkes RI. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta:
Departemen Kesehatan RI. Halaman 1, 10-11.
Ditjen POM RI. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi III. Jakarta : Departemen
Kesehatan RI. Halaman 33.
Ditjen POM RI. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta : Departemen
Kesehatan RI. Halaman 970, 1135, 1139, 1192.
Farkas, O., Jakus, J., dan Héberger, K. (2004). Quantitative Structure –
Antioxidant Activity Relationships of Flavonoid Compounds, Molecules,
9, 1079- 1088.
Farnsworth, N.R. (1966). Biologycal and Phytochemical Screening of Plants.
Journal of Pharmaceutical Sciense. 55:264.
Hamid, A.A., Aiyelaage, O.O., Usman, L.A Ameen, O.M., dan Lawal, A. (2010).
Antioxidant: Its Medicinal and Pharmacological Aplications. African
Journal of Pure and Applied Chemistry. 4(8). Halaman 142-151.
Handajani, A., Roosihermiatie, B., dan Maryani, H. (2009). Faktor - Faktor yang
Berhubungan dengan Pola Kematian Pada Penyakit Degeneratif di
Indonesia. Jakarta : Pusat Penelitian dan Pengembangan Sistem dan
Kebijakan Kesehatan, Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan.

Harborne, J.B. (1987). Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisa
Tumbuhan. Penerjemah: Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro.
Terbitan Kedua. Bandung: Penerbit ITB. Halaman 47-102 & 152-153.
Hertiani, T., Pramono, S., dan Supardjan A M. (2000). Uji Daya Antioksidan
Senyawa Flovonoid Daun Plantago major L. Majalah Farmasi Indonesia
11 (4).
Inggrid, M. H., dan Herry S. (2014). Ekstraksi Antioksidan dan Senyawa Aktif
dari buah Kiwi (Actinidia deliciosa). Skripsi. Bandung : Lembaga
Penelitian dan Pengabdian kepada Masyarakat. Universitas Katolik
Parahyangan.
Lautan. (1997). Radikal Bebas pada Erittosit dan Leukosit. Dalam Cermin Dunia
Kedokteran. Halaman 50.
Kosasih, E. N, Tony, S., dan Hendro,H. (2004). Peran Antioksidan pada Lanjut
Usia. Jakarta : Pusat Kajian Nasional Masalah Lanjut Usia. Halaman 56-
57.
Kumalaningsih, S. (2006). Anioksidan Alami. Cetakan Pertama. Surabaya: Trubus
Agrisarana. Halaman 25–26, 39-40.
Markham, K.R. (1988). Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Diterjemahkan oleh:
Kosasih Padmawinata. Bandung: Penerbit ITB. Halaman 1-3.
Moein, S., dan Mahmood, R.M. (2010). Relationship Between Antioxidant
Properties and Phenolics in Zhumeria Majdae. Journal of Medicinal Plants
Research. 7: 517-521.
Molyneux, P. (2004). The Use of The Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazy
(DPPH) for Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin. J. Sci.
Technol. 26(2): 212.
Murtadlo, Y., Dewi K., dan Enny F. (2013). Isolasi, Identifikasi Senyawa
Alkaloid Total Daun Tempuyung Sonchus arvensis L.) dan Uji Sitotoksik
dengan Metode BSLT (Brain Shrimp Lethality Test). Chem Info. Volume
I(1). Halaman 379-385.
Nurul, Leliana W., Chairul., Azrifitria. (2013). Uji Aktivitas Antioksidan serta
Penentuan Kandungan Fenolat dan Flavonoid Total dari buah Parijoto.
Skripsi. Jakarta: Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan. Universitas
Islam Negri Syarif Hidayatullah.
Orak, H. (2006). Total Antioxidant Activities, Phenolics, Anthocyanins,
Pholyphenoloxidase Activities, and It’s Correlation of Some Important
Red Wine Grape VarietiesWhich are Grown in Turkey. Scientia
Horticulturae Science Direct Journal. 111 (235- 241).

Pradono, D. I. (2010). Formulasi Antiipertensi (>60% Captopril) dari Bahan Aktif
Flavonoid Pegagan, Tempuyung, Kumis Kucing dan Sambiloto Serta
Budidaya untuk Meningkatkan Kandungan Flavonoid (>1,5%). Jurnal
Ilmiah Kefarmasian. 2(1). Halaman 121-125.
Rahmawati dan Anita. (2009). Kandungan Fenol Total Ekstrak Buah Mengkudu
(Morinda citrifolia). Skripsi. Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas
Indonesia. Halaman 231-232.
Ratnayani, K., Laksmiwati, M., dan Septian , N. (2012). Kadar Total Senyawa
Fenolat pada Madu Randu dan Madu Kelengkeng serta Uji Aktivitas
Antiradikal Bebas dengan Metode DPPH. Halaman164.
Ratna, W.K. (2009). Analisis Kandungan Fenol Total Jahe (Zingiber officinale
Roscoe) secara In Vitro. Skripsi. Jakarta : Fakultas Kedokteran
Universitas Indonesia.
Rohman, A. (2007). Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar.
Halaman 220-264.
Robinson, T. (1991). Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Edisi ke Enam.
Bandung : Penerbit ITB. Halaman 191-193
Sandrasari, D. A. (2008). Kapasitas Antioksidan dan Hubungannya dengan Nilai
Total Fenol Eksrak Sayuran Indigenous. Tesis. Bogor : Sekolah
Pascasarjana Institut Pertanian Bogor. Halaman 30-35
Sayuti, K dan Rina, Y. (2015). Antioksidan Alami dan Sintetik. Cetakan Pertama.
Padang : Andalas University Press. Halaman 15-20.
Silalahi, J. (2006). Makanan Fungsional. Yogyakarta: Kanisius. Halaman 39-41.
Sriningsih, Adji H.W., Sumaryono W., Wibowo, A.E., Chaidir, Firdayani,
Kusumaningrum, S., dan Kartakusuma, P. (2012). Analisa Senyawa
Golongan Flavonoid Herba Tempuyung (Sonchus arvensis L.). Thesis.
Bogor : Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor. Halaman 34.
Sukmayadi, A.E., Sri, A.S., Melisa, I.B., dan Anisa D.A. (2014). Aktivitas
Imunomodulator Ekstrak Etanol Daun Tempuyung (Sonchus arvensis L.).
Sumedang, Jawa Barat : Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran.
Halaman 65.
Susantri, I. B. (2013). Pengaruh fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Daun
Tempuyung terhadap Kadar Asam Urat dalam Darah Tikus Putih Galur
Wistar Hiperurisemia. Thesis. Surabaya : Widya Mandala Chatolic
University. Halaman 21.
Viranda, P.M. (2009). Pengujian Kandungan Fenol Total Tomat (Lycopersicum
esculentum) secara In Vitro. Skripsi. Jakarta : Fakultas Kedokteran
Universitas Indonesia. Halaman 35-36.

Winarsi, H. (2005). Isoflavon Berbagai Sumber, Sifat dan Manfaatnya Pada
Penyakit Degeneratif. Yogyakarta : Gadjah Mada University Press.
Halaman 36.
WHO. (2005). Preventing Chronic Diseases: A Vital Investment. WHO Global
Report. Switzerland : Department of Chronic Disease and Health
Promotion, World Health Organisation. Halaman. 1–4.
WHO. (1998). Quality Control Methods for Medical Plant Materials. WHO
Global Report. Geneva : World Health Organisation. Halaman. 31-33.
Yuliarti, W., Dewi K., and Enny F. (2013). Isolasi, Identifikasi dan Uji
Antioksidan Asam Fenolat dalam Daun Tempuyung (Sonchus arvensis
L.)dengan Metode 1,1-Difenil-2-Pikrilhidrasil (DPPH). Chem Info Vol 1,
No.1.

Lampiran 1. Surat hasil identifikasi tumbuhan

Lampiran 2. Karakterisasi Tumbuhan Tempuyung
Gambar tumbuhan tempuyung
Gambar daun tempuyung

Lampiran 2. (Lanjutan)
10 cm
Gambar simplisia daun tempuyung
Gambar serbuk simplisia daun tempuyung

Lampiran 3. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia daun tempuyung
Keterangan : 1. Epidermis bawah dengan stomata tipe anisositik
2. Berkas pembuluh dengan penebalan tipe spiral

Lampiran 4. Bagan kerja pembuatan simplisia
Daun Tempuyung
Dibersihkan dari pengotor
Dicuci hingga bersih
Ditiriskan
Ditimbang sebagai berat basah

2,631 kg
Diangin – anginkan terlebih dahulu

diatas kertas perkamen
Dikeringkan di dalam lemari

pengering pada suhu ± 40 - 50°C
Ditimbang sebagai berat kering

sebanyak 325 gram
Simplisia
Dilakukan pemeriksaan makroskopik
Dihaluskan (diblender)
Serbuk Simplisia
Karakterisasi Simplisia Skrining Fitokimia
- Alkaloid
- Pemeriksaan Mikroskopik
- Kadar air - Flavonoid
- Kadar sari larut air - Glikosida
- Kadar sari larut etanol - Saponin

- Kadar abu total - Tanin
- Kadar abu larut asam - Steroid / Triterpenoid

Lampiran 5. Bagan kerja pembuatan ekstrak etanol daun tempuyung
300 g Serbuk Simplisia
Dimasukkan kedalam bejana kaca

Dituang dengan 2250 ml etanol 96%
Ditutup
Dibiarkan selama 5 hari terlindungi
dari cahaya sambil sering diaduk
Diserkai dan diperas
Maserat Ampas
Direndam dengan etanol

96% sebanyak 750 ml
selama 2 hari
Maserat
Diendaptuang dan disaring
Filtrat
Dipekatkan dengan waterbath

Ekstrak Kental
Dilakukan pengukuran
Pengukuran Pengukuran Total Pengujian Aktivitas

Total Fenol Flavonoid Antioksidan
Metode kolorimetri Metode kolorimetri

reagen Folin-Ciocalteu reagen AlCl3
Hasil Hasil Hasil

(nilai IC50 )

Lampiran 6. Gambar alat spektrofotometer UV – Visible (Shimadzu UV – 1800
Series )

Lampiran 7. Perhitungan pemeriksaan karakteristik simplisia daun tempuyung
1. Perhitungan kadar air
% Kadar air = x 100%
a. Berat sampel : 5,021 g
Volume air : 0,15 ml
% Kadar air : x 100% = 2,987 %
b. Berat sampel : 5,024 g
% Kadar air : x 100% = 2,985 %
c. Berat sampel : 5,030 g
% Kadar air : x 100% = 2,982 %
% Kadar air rata – rata = = 2,984%
2. Perhitungan kadar sari larut dalam air
% Kadar sari larut dalam air = x 100%
Berat Berat cawan Berat cawan + sari Berat cawan + sari
sampel kosong ( penimbangan 1 ) ( penimbangan 2 )
5,008 gram 45, 2566 gram 45,5029 gram 45,5025 gram
5,010 gram 43,4584 gram 43, 7141 gram 43,7143 gram
5,025 gram 44,5995 gram 44,0543 gram 44,8540 gram

Lampiran 7. (lanjutan)
Berat sari : 45,5025 g – 45,2566 g = 0,2549 g
% Kadar sari larut dalam air : x 100% = 25,44%
Berat sari : 43,7143 g – 43,4584 g = 0,2559 g
Berat sari : 44,8540 g – 44,5995 g = 0,2545 g
% Kadar sari larut dalam air rata – rata = = 25,43%
3. Perhitungan kadar sari larut dalam etanol
% Kadar sari larut dalam etanol = x
Berat Berat cawan Berat cawan + sari Berat cawan + sari
sampel kosong ( penimbangan 1 ) ( penimbangan 2 )

Berat sari : 30,8319 g – 30,6591 g = 0,1728 g
% Kadar sari larut dalam etanol : x 100% = 17,04%
Berat sari : 36,7919 g – 36,6202 g = 0,1717 g
Berat sari : 38,9138 g – 38,7412 g = 0,1726 g
% Kadar sari larut dalam etanol rata – rata = = 17,06%
4. Perhitungan kadar abu total
% Kadar abu total = x 100%
Berat Berat cawan Berat cawan
sampel kosong + sari
2,00 gram 21,6518 gram 21,9721 gram
2,00 gram 22,0240 gram 22,3544 gram
2,00 gram 21,5569 gram 21,8976 gram

Berat sari : 21,9721 g – 21,6518 g = 0,3203 g
% Kadar abu total : x 100% = 16,02%
Berat sari : 22,3544 g – 22,0240 g = 0,3304 g
% Kadar abu total : x 100% = 16,51 %
Berat sari : 21,8976 g – 21,5569 g = 0,3407 g
% Kadar abu total rata – rata = = 16,51 %
5. Perhitungan kadar abu tidak larut asam
% Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100%
Berat Berat cawan Berat cawan
sampel kosong + sari
2,00 gram 21,4188 gram 21,4205 gram
2,00 gram 22,5432 gram 22,5447 gram
2,00 gram 21,7765 gram 21,7777 gram

Berat sari : 21,4205 g – 21,4188 g = 0,0017 g
Berat sari : 22,5458 g – 22,5442 g = 0,0016 g
% Kadar abu total : x 100% = 0,080 %
Berat sari : 21,7777 g – 21,7765 g = 0,0017 g
% Kadar abu total : x 100% = 0,085 %
% Kadar abu tidak larut asam rata – rata = = 0,083 %

Lampiran 8. Data pengukuran waktu kerja (operating time) larutan asam galat
dengan pereaksi Folin Ciocalteu dan Natrium Bikarbonat
NO Menit ke- Absorban

1 1 0,3354
2 2 0,3626
3 3 0,3710
4 4 0,3744
5 5 0,3779
6 6 0,3801
7 7 0,3844
8 8 0,3858
9 9 0,3897
10 10 0,3921
11 11 0,3948
12 12 0,3974
13 13 0,4003
14 14 0,4026
15 15 0,4074
16 16 0,4080
17 17 0,4109
18 18 0,4135
19 19 0,4163
20 20 0,4188
21 21 0,4214
22 22 0,4240
23 23 0,4251
24 24 0,4289
25 25 0,4306
26 26 0,4333
27 27 0,4353
28 28 0,4377
29 29 0,4397
30 30 0,4417
31 31 0,4442
32 32 0,4456
33 33 0,4476
34 34 0,4495
35 35 0,4512
36 36 0,,4529
37 37 0,4549
38 38 0,4563
39 39 0,4578
40 40 0,4597
41 41 0,4610
42 42 0,4625
43 43 0,4640


44 44 0,4655
45 45 0,4669
46 46 0,4677
47 47 0,4696
48 48 0,4708
49 49 0,4716
50 50 0,4730
51 51 0,4743
52 52 0,4757
53 53 0,4767
54 54 0,4776
55 55 0,4790
56 56 0,4801
57 57 0,4812
58 58 0,4831
59 59 0,4840
60 60 0,4850
61 61 0,4861
62 62 0,4869
63 63 0,4878
64 64 0,4887
65 65 0,4896
66 66 0,4906
67 67 0,4913
68 68 0,4923
69 69 0,4931
70 70 0,4939
71 71 0,4947
72 72 0,4954
73 73 0,4963
74 74 0,4970
75 75 0,4980
76 76 0,4984
77 77 0,4996
78 78 0,5000
79 79 0,5008
80 80 0,5011
81 81 0,5022
82 82 0,5030
83 83 0,5033
84 84 0,5042
85 85 0,5050
86 86 0,5055
87 87 0,5062


88 88 0,5070
89 89 0,5072
90 90 0,5078
91 91 0,5087
92 92 0,5093
93 93 0,5097
94 94 0,5104
95 95 0,5110
96 96 0,5116
97 97 0,5123
98 98 0,5126
99 99 0,5132
100 100 0,5140

Lampiran 9. Perhitungan total fenol ekstrak etanol daun tempuyung
Kadar total fenol dihitung menggunakan rumus berikut :
Kadar total fenol =
Keterangan : x = Konsentrasi ( ppm )
Perhitungan Kandungan Total Fenol Ekstrak Daun Tempuyung
Didapat persamaan regresi linear asam galat :
y = 0,0007994907 x + 0,0277087624 dengan panjang gelombang 775 nm.
Tabel hasil pengukuran sampel ekstrak daun tempuyung
Volume
Berat Faktor
larutan Rata – rata
sampel Pengulangan Pengenceran Absorban
sampel Absorban
(BS) (FP)
(L)
0,07523
0,07599
0,0118 1 1 0,07875 0,07769
0,01
0,07899
0,07951
0,07951
0,07912
0,0119 2 0,01 1 0,07845 0,07832
0,07784
0,07668
0,07487
0,07510
0,0111 3 0,01 1 0,07477 0,07473
0,07468
0,07423

y = 0,0007994907 x + 0,0277087624
0,07769 = 0,0007994907 x + 0,0277087624
X= = 62,51 ppm
Kadar total fenol =
= = 52,97 mg GAE/ g ekstrak.
y = 0,0007994907 x + 0,0277087624
0,07832 = 0,0007994907 x + 0,0277087624
X= = 63,30 ppm
Kadar total fenol =
y = 0,0007994907 x + 0,0277087624
0,07473 = 00,0007994907 x + 0,0277087624
X= = 58,81 ppm
Kadar total fenol =
Rata – rata total fenol keseluruhan :
= 53,04 mg GAE/ g ekstrak.

Lampiran 10. Perhitungan total flavonoid ekstrak etanol daun tempuyung
Kadar flavonoid dihitung menggunakan rumus berikut :
Kadar flavonoid =
Keterangan : x = Konsentrasi ( ppm )
Perhitungan Kandungan Flavonoid Ekstrak Daun Tempuyung
Didapat persamaan regresi linear quercetine :
y = 0,028931136 x + 0,084533733 dengan panjang gelombang 432nm.
Tabel hasil pengukuran sampel ekstrak daun tempuyung
Volume
Berat Faktor Kadar rata –
larutan
sampel Pengulangan Pengenceran Absorbansi rata
sampel
(BS) (FP) (mg Q/ gram)
(L)
0,39403
0,39388
0,0251 1 0,025 3,33 0,39371 0.39378
0,39357
0,39371
0,39525
0,39529
0,0253 2 0,025 3,33 0,39513 0,395038
0,39482
0,39470
y = 0,028931136 x + 0,084533733
0,39378 = 0,028931136 x + 0,084533733
X= = 10,68 ppm

Kadar total flavonoid =
= = 35,10 mg Q/ g ekstrak.
y = 0,028931136 x + 0,084533733
0,395038 = 0,028931136 x + 0,084533733
X= = 10,73 ppm
Kadar total flavonoid =
= = 34,98 mg Q/ g ekstrak.
Rata – rata total flvonoid keseluruhan :
= 35,04 mg Q/ g ekstrak.

Lampiran 11. Perhitungan aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun tempuyung
dan quercetine
1. Ekstrak etanol daun tempuyung
Absorbansi % Peredaman
Konsentrasi
I II III I II III
0 0.97970 0.97974 0.97962 0 0 0
6.25 0.97000 0.96986 0.96976 0.99 1,008 1,007
12.5 0.91314 0.91327 0.91319 6,766 6,784 6,781
25 0.87172 0.87164 0.87140 11,022 11,033 11,047
50 0.76945 0.76936 0.76924 21,461 21,475 21,476
Perhitungan persen peredaman ekstrak etanol daun tempuyung
% Peredaman = x 100 %
Keterangan : Akontrol = Absorbansi DPPH tanpa penambahan ekstrak
Asampel = Absorbansi DPPH dengan penambahan ekstrak
Percobaan I :
Konsentrasi 6,25 ppm
% peredaman = x 100 % = 0,99 %
% peredaman = x 100 % = 6,766 %
Konsentrasi 25 ppm
% peredaman = x 100 % = 11,022 %
Konsentrasi 50 ppm
% peredaman = x 100 % = 21,461 %

Perhitungan IC50 dengan persamaan regresi
X Y XY X²
0 0 0 0
6,25 0,99 6,1875 39,0625
12,5 6,766 84,575 156,25
25 11,022 275,55 625
50 21,461 1073,05 2500
ƩX = 93,75 ƩY = 40,239
ƩXY = 1439,3625 ƩX² = 3320,3125
18,75 Ȳ = 8,0478
a =
= 0,43832
b=Ȳ-aX
= 8,0478 – (0,43832) (18,75)
= - 0,1707
Jadi persamaan garis regresi Y = 0,43832 x – 0,1707
Nilai IC50 50 = 0,43832 x – 0,1707
X = 114,461 ppm
Percobaan II :
% peredaman = x 100 % = 1,008 %

% peredaman = x 100 % = 6,784 %
Konsentrasi 25 ppm
% peredaman = x 100 % = 11,033 %
Konsentrasi 50 ppm
% peredaman = x 100 % = 21,457 %
X Y XY X²
0 0 0 0
6,25 1,008 6,3 39,0625
12,5 6,784 84,8 156,25
25 11,033 275,825 625
50 21,457 1073,75 2500
ƩX = 93,75 ƩY = 40,3
ƩXY = 1440,675 ƩX² = 3320,3125
18,75 Ȳ = 8,06
a =
= 0,43843
b=Ȳ-aX
= 8,06 – (0,43832) (18,75)
= - 0,16056

Nilai IC50 50 = 0,43843 x – 0,16056
X = 114,409 ppm
Percobaan III :
% peredaman = x 100 % = 1,007 %
% peredaman = x 100 % = 6,781 %
Konsentrasi 25 ppm
% peredaman = x 100 % = 11,047 %
Konsentrasi 50 ppm
% peredaman = x 100 % = 21,476 %
X Y XY X²
0 0 0 0
6,25 1,007 6,29375 39,0625
12,5 6,781 84,7625 156,25
25 11,047 276,175 625
50 21,476 1073,8 2500
ƩX = 93,75 ƩY = 40,311
ƩXY = 1441,03125 ƩX² = 3320,3125
18,75 Ȳ = 8,0622
a =

= 0,43853
b=Ȳ-aX
= 8,0622 – (0,43853) (18,75) = - 0,16024
Nilai IC50 50 = 0,43853 x – 0,6024
X = 114,382 ppm
Nilai IC50 rata – rata = = 114,417 ppm.
2. Quercetine
Absorbansi % Peredaman
Konsentrasi
I II III I II III
0 0.89632 0.89555 0.89534 0 0 0
1,25 0.75342 0.75320 0.75291 15,943 15,895 15,907
2,5 0.63834 0.63835 0.63821 28,782 28,718 28,718
5 0.35991 0.35985 0.35991 59,846 59,817 59,801
10 0.08258 0.08255 0.08253 90,77 90,778 90,780
Perhitungan persen peredaman ekstrak etanol daun tempuyung
% Peredaman = x 100 %
Keterangan : Akontrol = Absorbansi DPPH tanpa penambahan ekstrak
Asampel = Absorbansi DPPH dengan penambahan ekstrak
Percobaan I :
% peredaman = x 100 % = 15,943 %

Konsentrasi 2,5 ppm
% peredaman = x 100 % = 28,782 %
Konsentrasi 5 ppm
% peredaman = x 100 % = 59,846 %
Konsentrasi 10 ppm
% peredaman = x 100 % = 90,77 %
X Y XY X²
0 0 0 0
1,25 15,943 19,92875 1,5625
2,5 28,782 71,955 6,25
5 59,846 299,23 25
10 90,77 907,7 100
ƩX = 18,75 ƩY = 195,341
ƩXY = 1298,81375 ƩX² = 132,8125
3,75 Ȳ = 39,0682
a =
= 9,06056
b=Ȳ-aX
= 39,0682 – (9,06056) (3,75)
= 5,0911
Jadi persamaan garis regresi Y = 9,06056 x + 5,0911

Nilai IC50 50 = 9,06056 x + 5,0911
X = 4,956 ppm
Percobaan II :
% peredaman = x 100 % = 15,895 %
Konsentrasi 2,5 ppm
% peredaman = x 100 % = 28,719 %
Konsentrasi 5 ppm
% peredaman = x 100 % = 59,817 %
Konsentrasi 10 ppm
% peredaman = x 100 % = 90,778 %
X Y XY X²
0 0 0 0
1,25 15,895 19,86875 1,5625
2,5 28,719 71,7975 6,25
5 59,817 299,085 25
10 90,778 907,78 100
ƩX = 18,75 ƩY = 195,209
ƩXY = 1294,53125 ƩX² = 132,8125
3,75 Ȳ = 39,0418
a =

= 8,99996
b=Ȳ-aX
= 39,0418 – (8,99996) (3,75) = 5,29195
Nilai IC50 50 = 8,99996 x + 5,29195
X = 4,967 ppm
Percobaan III :
% peredaman = x 100 % = 15,907 %
Konsentrasi 2,5 ppm
% peredaman = x 100 % = 28,718 %
Konsentrasi 5 ppm
% peredaman = x 100 % = 59,801 %
Konsentrasi 10 ppm
% peredaman = x 100 % = 90,780 %
X Y XY X²
0 0 0 0
1,25 15,907 19,88375 1,5625
2,5 28,718 71,795 6,25
5 59,801 299,005 25
10 90,780 907,80 100
ƩX = 18,75 ƩY = 195,206 ƩXY =
ƩX² = 132,8125
3,75 Ȳ = 39,0412 1298,48375

a =
= 9,06338
b=Ȳ-aX
= 39,0412 – (9,06338) (3,75)
= 5,553525
Nilai IC50 50 = 9,06338 x + 5,553525
X = 4,903 ppm
Nilai IC50 rata – rata = = 4,942 ppm
Lampiran 12. Kategori nilai IC50 sebagai antioksidan
No. Kategori Konsentrasi (ppm)

1. Sangat kuat <50
2. Kuat 50 – 100
3. Sedang 101 – 150
4. Lemah 151 – 200

Total Fenol dan Flavonoid Ekstrak Tempuyung

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Total Fenol dan Flavonoid Ekstrak Tempuyung

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PENGUJIAN KANDUNGAN TOTAL FENOL DAN

FLAVONOID SERTA ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

Universitas Sumatera Utara

Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk memperoleh

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

Universitas Sumatera Utara

PENGUJIAN KANDUNGAN TOTAL FENOL DAN

Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi

Dr. Masfria, M.S., Apt. Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt.

Dr. Masfria, M.S., Apt.

Aminah Dalimunthe, S.Si., M.Si., Apt.

Medan, Januari 2016

Dr. Masfria, M.S., Apt

Universitas Sumatera Utara

karunia kepada penulis, sehingga dapat meyelesaikan penyusunan skripsi yang

berjudul “Pengujian Kandungan Total Fenol dan Flavonoid serta Antioksidan

Farmasi Universitas Sumatera Utara.

Pada kesempatan ini penulis hendak menyampaikan rasa hormat dan

Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara yang telah memberikan

pembimbing yang telah banyak memberikan bimbingan, arahan, dan bantuan

Fakultas Farmasi USU Medan yang telah mendidik selama perkuliahan.

tak terhingga kepada keluarga tercinta, Ayahanda Almarhum Rudy Gunawan,

mendoakan, memberikan semangat, dukungan dan berkorban dengan tulus ikhlas

Universitas Sumatera Utara

sahabatku Jurusan Sains dan Teknologi Angkatan 2011 selalu memberikan

kebersamaan selama kuliah akan selalu menjadi kenangan manis.

Penulis menyadari sepenuhnya bahwa penulisan skripsi ini masih belum

sempurna, sehingga penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat

membangun untuk penyempurnaannya. Harapan penulis semoga skripsi ini dapat

bermanfaat bagi ilmu pengetahuan khususnya dibidang farmasi.

Medan, November 2016

Annisa Mulia Hapsari

Universitas Sumatera Utara

Saya yang bertanda tangan di bawah ini:

Medan, November 2016

Nama : Annisa Mulia Hapsari

Universitas Sumatera Utara

Universitas Sumatera Utara

Universitas Sumatera Utara

LEMBAR PENGESAHAN .................................................................... iii

KATA PENGANTAR ........................................................................... iv

SURAT PERNYATAAN ...................................................................... vi

ABSTRAK .............................................................................................. vii

ABSTRACT ............................................................................................ viii

DAFTAR ISI ........................................................................................... ix

DAFTAR TABEL ................................................................................... xiv

DAFTAR GAMBAR .............................................................................. xiv

DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................... xvi

BAB I PENDAHULUAN ...................................................................... 1

1.1 Latar belakang ....................................................................... 1

1.2 Perumusan masalah ............................................................... 4

1.3 Hipotesis ................................................................................ 5

1.4 Tujuan penelitian ................................................................... 5

1.5 Manfaat penelitian ................................................................. 5

1.6 Kerangka pikir ....................................................................... 6

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ............................................................ 7

2.1 Radikal bebas ........................................................................ 7

2.2 Antioksidan .......................................................................... 9

2.2.1 Antioksidan alami ........................................................ 10

2.2.2 Senyawa fenolik .......................................................... 11

Universitas Sumatera Utara

2.3 Metode pengujian aktivitas antioksidan ................................ 13