Pembahasan

Metode MPN merupakan salah satu metode perhitungan secara tidak langsung. Metode MPN
terdiri dari tiga tahap yaitu, uji dugaan (presumptive test), uji penetapan (confirmed test), dan
uji pelengkap (completed test). Metode MPN biasanya dilakukan untuk menghitung jumlah
mikroba di dalam contoh yang berbentuk cair, meskipun dapat pula digunakan untuk contoh
berbentuk padat.
Untuk metode MPN (Most Probable Number) digunakan medium cair dalam wadah berupa
tabung reaksi, perhitungan di lakukan berdasarkan jumlah tabung yang positif yaitu tabung
yang mengalami perubahan pada mediumnya baik itu berupa perubahan warna atau
terbentuknya gelembung gas pada dasar tabung durham. Pada metode perhitungan MPN ini
digunakan bentuk tiga seri pengenceran, yang pertama 10-1, 10-2, dan 10-3.
1. Uji pendugaan (presumptive test)
Merupakan tes pendahuluan tentang ada tidaknya kehadiran bakteri koliform berdasarkan
terbentuknya asam dan gas disebabkan oleh fermentasi laktosa oleh bakteri golongan koli.
Terbentuknya asam dilihat dari kekeruhan pada media laktosa, dan gas yang dihasilkan dapat
dilihat dalam tabung Durham berupa gelembung udara. Tabung dinyatakan positif jika
terbentuk gas sebanyak 10% atau lebih dari volume di dalam tabung Durham. Banyaknya
kandungan bakteriEscherichia coli dapat dilihat dengan menghitung tabung yang
menunjukkan reaksi positif terbentuk asam dan gas dan dibandingkan dengan tabel MPN.
Metode MPN dilakukan untuk menghitung jumlah mikroba di dalam contoh yang berbentuk
cair. Bila inkubasi 1 x 24 jam hasilnya negatif, maka dilanjutkan dengan inkubasi 2 x 24 jam
pada suhu 350C. Jika dalam waktu 2 x 24 jam tidak terbentuk gas dalam tabung Durham,
dihitung sebagai hasil negatif. Jumlah tabung yang positif dihitung pada masing-masing seri.
MPN penduga dapat dihitung dengan melihat tabel MPN.
2. Uji penguat (confirmed test)
Hasil uji dugaan dilanjutkan dengan uji ketetapan. Dari tabung yang positif terbentuk asam
dan gas terutama pada masa inkubasi 1 x 24 jam, suspensi ditanamkan pada media Eosin
Methylen Biru Agar ( EMBA ) secara aseptik dengan menggunakan jarum inokulasi. Koloni
bakteri Escherichia coli tumbuh berwarna kehijauan dengan kilat metalik atau koloni
berwarna merah muda dengan lendir untuk kelompok koliform lainnya.
Kelebihan dari metode MPN ini adalah waktu yang dibutuhkan sangat sedikit atau sangat
singkat, sedangkan kekurangan dari metode MPN yaitu hasil yang diperoleh terkadang tidak
begitu akurat. Kelebihan pada perhitungan dengan menggunakan rumus yaitu hasil yang
diperoleh lebih akurat dan kekurangannya dari metode perhitungan dengan menggunakan
rumus yaitu waktu yang dibutuhkan lama.
Air yang mengandung kurang dari 1 coliform per 100 ml merupakan golongan kelas I yang
berarti air tersebut sangat baik untuk dikonsumsi. Nilai coliform 1-2 per 100 ml digolongkan
pada kelas II yang berarti air tersebut baik dikonsumsi. Air dengan jumlah coliform 3-10
merupakan golongan air yang termasuk kelas III dan tidak baik dikonsumsi. Sedangkan jika

nilai coliform lebih dari 10 per 100 ml, maka air tersebut sudah tidak boleh dikonsumsi lagi
(Suriaman dan Juwita., 2008).
Adapun sampel air yang diujikan untuk mengetahui kualitas air yaitu air kran, air kemasan
cup, air aquades dan air got. Dalam praktikum ini diketahui bahwa yang di duga terdapat
bakteri koliform adalah pada sampel air kran dan air got. Diketahui pada air kran tabung
reaksi yang positif sebanyak 3 tabung, sedangkan pada sampel air got didapatkan sebanyak 9
tabung. Sehingga jumlah tabung yang akan dilanjutkan pada uji penguat adalah sebanyak 12
tabung.
Uji berikutnya adalah uji penetapan yang berfungsi untuk meyakinkan hasil positif yang ada
pada uji pendugaan. Pada uji penetapan ini biakan pada medium laktosa cair diinokulasikan
pada medium endo agar kemudian diinkubasi pada suhu 37 0C selama 48 jam. Fungsi dari
medium endo agar adalah sebagai agen penyerap asetildehid yang merupakan komponen
utama reaksi pembentukan koloni tipikal. Medium ini merupakan campuran dan basic fuchsin
laktosa agar dan juga sodium sulfit.
Diketahui pada uji ini, sampel air got pada pengenceran 10-0 tidak ada yang positif, pada
pengenceran ......