LABORATORIUM

MIKROBIOL
OGI
STERILISASI DAN DESINFEKSI
Kalayfa – G0017111
 ANTISEPSIS
Mencegah pertumbuhan atau
aktivitas mikroorganisme baik
dengan cara menghambat atau
membunuh; dipakai untuk zat-zat
kimia terhadap jaringan hidup.
ANTISEPTIK
Zat kimia yang dipakai untuk
maksud antisepsis
STERILISASI
DESINFEKSI
Membunuh mikroorganisme
pathogen dalam bentuk vegetatif
(kecuali spora kuman & virus)
dilakukan terhadap benda mati
dengan bahan kimia.
DESINFEKTAN
Zat (biasanya kimia) yang dipakai
untuk maksud desinfeksi.
Setiap proses (kimia atau fisik)
yang membunuh semua bentuk
hidup terutama mikroorganisme.
 STERILISASI
FISIK KIMIA
Pemanasan
Penyinaran
Penyaringan
1. FISIK
A. PEMANASAN

Paling efektif dan cepat

• Denaturasi protein sel (terutama enzim2 dan membran sel)
• Denaturasi asam nukleat
• Perubahan kondisi fisik lemak sel
• Menggumpalkan protoplasma

Karena terjadi oksidadi komponen-komponen sel

Panas basah → koagulasi

Panas kering → oksidasi
Panas Basah
Menggunakan air atau uap air

Panas basah >100oC

• Autoclave (uap air bertekanan)
Pemanasan 1210C selama 10-70 menit.

(+) spora kuman dibunuh secara radikal, dapat mensterilkan banyak alat
sekaligus
(-) mahal, kualitas bahan dapat berubah
Panas basah = 100o C
• Air mendidih
vegetatif patogen : 800C
endospora : bertahan 20 jam

• Sterilisasi Fraksi/Tyndalisasi
Media yang akan disterilisasi dihadapkan pada uap langsung selama 30 menit
setiap hari selama 3 hari berturut-turut.

• Uap air panas (panas lembab)

Untuk mensterilkan media-media yang akan rusak bila dengan autoclave.
Pemanasan 100oC selama 1 jam.
Panas basah <100o C
• Pasteurisasi
Cara sterilisasi bakteri patogen dan non patogen pada susu. Suhu
sekitar 670C selama satu jam. Pasteurisasi pada susu dilakukan selama
3 hari berturut-turut pada waktu dan suhu yang sama, serta lama
pasteurisasi yang sama.
 Panas Kering
• Pembakaran
Memijarkan = untuk alat logam,
seluruh organisme dapat dibasmi.
fungsi : mensterilkan oshe, membakar
bangkai binatang percobaan dan
sampah medis. Alat : incinerator.
Melintaskan (Flamming) = melalui
nyala api, merupakan cara darurat.
fungsi : mensterilkan skalpel, pinset
dan mulut tabung.
• Hot Air Oven
Mensterilkan bahan-bahan yang
harus tetap kering, seperti serbuk,
perban kain, salep, alat-alat
laboratorium dari gelas/kaca
seperti cawan petri, pipet, tabung
reaksi,erlemeyer, alat suntik,
perban, dengan oven. Suhu 160-
1700C selama 90-120 menit.
 B. Penyinaran / Radiasi
• Sinar pengion (sinar gamma,
sinar x)
-Panjang gelombang <1nm → daya
penetrasinya tinggi → bakteri vegetatif
dan spora
- Merusak DNA
- Ionisasi komponen sel lainnya
- Benda2 tidak tahan suhu tinggi,
Fungsi : sterilisasi alat-alat farmasi,
alat-alat disposable (sarung tangan,
spuit, benang jahit, kateter, dll),
vaksin dan makanan tahan lama
• Sinar UV
- Panjang gel 220-290 nm, paling
efektif 260 nmdaya penetrasi
rendahtidak dapat digunakan pada
material tertutup dan endospora.
- Sterilisasi udara, ruangan
perawatan dan ruang operasi.
ruangan bedah
- Sifat: GERMISID (bunuh bakteri
vegetatif dan spora
 C. Penyaringan
Untuk larutan yang rusak dengan pemanasan, contoh : serum dan enzim.
• Menyaring cairan
 Saringan Sietz: bahan asbestos
sebagai alat penyaringnya.
 Berkefeld: filter terbuat dari tanah
diatome.
 Chamberland: filter terbaru dari
porselen.
 Fritted glass filter: filter dari serbuk
gelas.
 Cellulose Asetat: pada industri
minuman. Kelemahan : banyak filtrat
tersisa pada saringan, virus lolos,
hanya sekali pakai.
• Menyaring Udara
Untuk menjaga udara tempat penyimpanan alat,
tetap steril atau untuk menjaga agar biakan kuman
tidak tercemar oleh kuman lain, maka alat-alat
tersebut harus ditutup dengan kapas untuk
menahan mikroorganisme.
Untuk mencegah pencemaran oleh mikroorganisme
udara pada waktu perbenihan, dapat menggunakan
laminar flow bench dimana udara yang masuk ke
dalamnya disaring terlebih dahulu dengan suatu
saringan khusus. Menggunakan penyaring HEPA
(High-Efficiency Particulate Air). Filter terdiri dari
lipatan selulose asetat.
2. KIMIAWI
• Isopropil alkohol 70-90% → termurah
• Sangat efektif
• Solusi terbaik membunuh spora : campuran formaldehid dengan
alkohol, tetapi solusi ini terlalu toksik untuk dipakai sebagai
antiseptik.
• Beberapa senyawa bersifat iritatif, dan kepekaan kulit sangat
bervariasi.
Halogen
• Terdiri dari senyawa-senyawa klorin dan Iodium
• Kebanyakan senyawa halogen membunuh sel hidup
• Membunuh sel karena mengoksidasi protein, dengan demikian
merusak membran dan menginaktifkan enzim-enzim

Iodium
• Solusi Iodium (dalam air maupun dalam alkohol) → sangat antiseptic,
telah dipakai sejak lama : antiseptik kulit sebelum proses pembedahan
• Efektif : berbagai protozoa. Ex: amuba yang menyebabkan disentri
• Konsentrasi yang tepat, Iodium tidak mengganggu kulit
Klorin

• Deodoran dan desinfektan yang sangat baik, dijadikan standar

pengolahan air minum di seluruh lingkungan.
• Kebanyakan senyawa halogen membunuh sel hidup
• Membunuh sel karena mengoksidasi protein, dengan demikian
merusak membran dan menginaktifkan enzim-enzim.
• Solusi hipoklorit paling banyak dipakai untuk desinfeksi dan
menghilangkan bau → relatif tidak membahayakan jaringan manusia,
mudah ditangani, tidak berwarna dan tidak mewarnai, meskipun
memudarkan warna.
• Di kebanyakan rumah sakit dipakai untuk mendesinfeksi ruangan,
permukaan-permukaan serta alat-alat nonbedah.
• Berbagai derivat klorin organik juga dipakai untuk desinfeksi air →
Senyawa yang sering dipergunakan: halazon / pardsulfone
dicbloramidobenzoic acid → konsentrasi 4-8 mgr/L dapat mendesinfeksi
air yang mengandung Salmonella typhi dalam waktu 30 menit

Alkohol
• Paling efektif dan dapat diandalkan untuk sterilisasi dan desinfeksi
• Mendenaturasi protein dengan jalan de- hidrasi, dan juga merupakan
pelarut lemak → membran sel akan dirusak, dan enzim- enzim akan
diinaktifkan oleh alkohol.
• Sendiri atau dalam bentuk kombinasi, alkohol sering dipakai sebagai
desinfektan kulit
• Hapusan dengan alkohol secara cepat, tidak cukup mensterilkan →
hanya mengurangi jumlah populasi → mengurangi kemungkinan
timbulnya infeksi
• Kebiasaan didalam praktik: mencelupkan alat-alat seperti gunting,
pisau, pinset dan sebagainya kedalam alkohol kemudian mem-
bakarnya.
Fenol
• Pertama kali: Dalam ruang bedah sebagai germicide → mencegah
timbulnya infeksi pasca bedah
• Pada konsentrasi rendah: fenol mempresipitasikan protein secara
aktif, merusak membran sel dengan menurunkan tegangan
permukaannya
• Standar pembanding untuk menentukan aktivitas sesuatu desinfektan
• Kurang efektif terhadap spora
• Penambahan halogen seperri klorin akan meningkatkan aktivitas fenol
• Sangat toksik, zat ini hanya dapat dipergunakan secara eksternal.
Aldehid
• Membunuh sel dengan mendenaturasi protein
• Larutan formaldehid 20% dalam 65 -70% alkohol → cairan pensteril
yang sangat baik apabila alat-alat direndam selama 18 jam
• Stafilokokus dan lain-lain sel vegetatif → dimatikan dalam waktu 5
menit
• Mycobacterium tuberculosis dan virus → dalam waktu 10 menit
• Membunuh spora → diperlukan 3-12 jam
• Nontoksik dan tidak iritatif bagi penderita
Peroksida
• Peroksida hidrogen → antiseptik efektif dan nontoksik
• Pada konsentrasi 0,3-6,0% dipakai untuk desinfeksi
• Pada konsentrasi 6,0-25% dipakai untuk sterilisasi.
• Pada konsentrasi 0,1% di dalam susu pada suhu 54o C selama 30
menit, HzOzdapat mengurangi jumlah kuman sampai 99,99%
• Konsentrasi 10% bersifat virusid dan sporosid
• Larutan 3% biasa dipakai untuk mencuci dan mendesinfeksi luka
karena kuman-kuman anaerob terutama sangat peka terhadap
oksigen
DESINFEKSI
 Desinfeksi

• High-level: efektif melawan mikroba pathogen kecuali spora bakteri dalam

jumlah banyak. (Cth : glutaraldehyde, hydrogen peroksida, peracetic acid,
klorin)
• Intermediate-level: efektif melawan mycobacteria, bakteri vegetatif, virus
dan jamur, kecuali spora bakteri (Cth : alcohol, iodophor, phenol)
• Low-level: efektif melawan bakteri vegetatif, beberapa virus dan jamur < 10
menit, tidak efektif melawan mycobacteria dan spora
Mekanisme Kerja Desinfektan

• Bekerja pada membran plasma (merusak dinding sel)

Benzalkonium, fenol, kresol, karbol, hexachlorofene, etil/propil alkohol, juga
sabun dan deterjen

• Bekerja pada protein sel (modifikasi fungsi protein dan asam nukleat)
Asam basa, fenol, kresol, alkohol, merkuri, silver, formaldehida, halogen, iodine,
chlorine, trifenil metan, hidrogen peroksida, dan kalium permanganat.

• Denaturasi protein : Asam benzoat, asam salisilat, asam sulfat, asam chlorida,
NaOH, KOH, NH4OH, L1OH
 Desinfektan
• Alkohol (etil/propil alkohol)
- Desinfeksi kulit
- Senyawa difenil
- Alkohol yang dicampur dengan
aldehid digunakan dalam bidang
kedokteran gigi untuk desinfeksi
permukaan gigi
- Mekanisme kerja : Merusak
dinding sel
• Aldehid (Glutaraldehid)
- Desinfektan yang kuat
- Glutaraldehid 2% dapat dipakai untuk
mendesinfeksi alat-alat yang tidak
dapat disterilkan
- Efektif terhadap bakteri vegetatif
seperti M. tuberculosis, fungi, dan
virus akan mati dalam waktu 10-20
menit, sedang spora baru mati setelah
10 jam.
 Desinfektan
• Biguanid (Klorheksidin)
- Bidang kedokteran gigi sebagai
antiseptik dan kontrol plak
- Sangat aktif terhadap bakteri gram (+)
maupun gram (-)
- Efektivitasnya pada rongga mulut
disebabkan oleh absorpsinya pada
hidroksiapatit dan salivary mucus.
• Senyawa halogen
-Hipoklorit dan povidon-iodin adalah
zat oksidasi dan melepaskan ion
halida
-Murah dan efektif
-Menyebabkan karat pada logam dan
cepat diinaktifkan oleh bahan organik
(misalnya chloros, domestos, dan
betadine).
-Mekanisme kerja : MODIFIKASI
PROTEIN DAN ASAM NUKLEAT
 Desinfektan
• Fenol • Klorsilenol

Larutan jernih, tidak mengiritasi kulit Tidak mengiritasi

dan dapat digunakan untuk Aktifitasnya rendah terhadap banyak
membersihkan alat yang bakteri dan penggunaannya terbatas
terkontaminasi oleh karena tidak
sebagai desinfektan (misalnya Dettol).
dapat dirusak oleh zat organik
Bersifat virusidal dan sporosidal yang
lemah
Sebagian besar bakteri dapat dibunuh
oleh zat ini, banyak digunakan di
rumah sakit dan laboratorium.
Pengunaan antiseptik pada luka

• Luka bakar → silver sulfadiazine

• Luka terbuka → iodine disekitar luka
Efektivitas sterilisasi dan desinfeksi kimia dipengaruhi oleh:
- konsentrasi
- suhu
- jumlah kuman
- lama paparan
- pH bahan kimia
- mudahnya kontak dengan mikroorganisme
DAFTAR PUSTAKA

1. Staf Pengajar Bagian Mikrobiologi FKUI. 2010. Buku Ajar

Mikrobiologi Kedokteran. Jakarta: Binarupa Aksara Publisher.
2. Asisten Mikrobiologi FK UNS 2010. 2013. Risalah Mikrobiologi.
Surakarta : Universitas Sebelas Maret.
THANK YOU