Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

LWT - Ilmu dan Teknologi Pangan 140 (2021) 110815

Daftar isi tersedia diScienceDirect

LWT
halaman utama jurnal:www.elsevier.com/locate/lwt

Nanoemulsi minyak biji kamelia minyak dalam air melalui

mikrofluidisasi tekanan tinggi: Pembentukan dan evaluasi

Long-Wei LiA,B, Xiao-Yi ChenA,B, Lan-Cong LiuA,B, Yi YangA,B, You-Jiao WuA,B, Gang ChenC, Zhi-
Feng ZhangA,B, Pei LuoA,B,*
ALaboratorium Utama Negara Bagian untuk Penelitian Berkualitas dalam Pengobatan Cina, Universitas Sains dan Teknologi Makau, Makau, Cina
BFakultas Kedokteran Cina, Universitas Sains dan Teknologi Makau, Taipa, Makau, Cina
CSekolah Ilmu Farmasi, Universitas Farmasi Guangdong, Guangzhou, China

INFO ARTIKEL ABSTRAK

Kata kunci: Latar belakang:Camellia seed oil (CSO) merupakan minyak nabati yang mudah teroksidasi dan menjadi tengik jika terkena
minyak biji kamelia udara. Tujuan penelitian ini adalah menghasilkan nanoemulsi CSO yang stabil untuk meningkatkan stabilitas dan
Nanoemulsi
bioaktivitasnya. Metode:Di bawah rasio minyak/surfaktan yang dioptimalkan, surfaktan memformulasikan dan menstabilkan
Persiapan mikrofluidisasi
nanoemulsi CSO melalui tekanan yang dioptimalkan dan komponen kimia CSO dianalisis dengan GC-MS. Penilaian bioaktivitas
tekanan tinggi
dilakukan dengan menggunakan model sepsis dan tes antimikroba.
Stabilitas
Hasil:Diameter tetesan adalah 47,81±0,78 nm, PDI adalah 0,143±0,011, dan potensial zeta adalah -6,92±0,94 mV.
Nanoemulsi menunjukkan distribusi ukuran monomodal. Sifat antimikroba nanoemulsi ditentukan oleh MIC
terhadapEscherichia colisel adalah 200 mg/mL. Pemberian nanoemulsi CSO secara oral dapat secara signifikan
meningkatkan tingkat kelangsungan hidup tikus endotoksemik.
Kesimpulan:Hasil kami menunjukkan penerapan nanoemulsi CSO dapat dieksploitasi dalam sistem berair untuk
memperluas sifat fungsional atau obat.

1. Perkenalan
Camellia seed oil (CSO), minyak tumbuhan berkayu yang diekstraksi dari biji
Camellia oleiferaAbel., umumnya digunakan sebagai minyak nabati di Asia Timur.
Kandungan dan rasio asam lemak dalam CSO sangat mirip dengan minyak zaitun,
dan sering disebut sebagai 'minyak zaitun Oriental'. CSO mengandung berbagai
bahan fungsional, dan secara signifikan dapat meningkatkan sirkulasi darah,
mencegah sklerosis kardiovaskular, menurunkan tekanan darah, menurunkan
lipid darah, dan memberikan efek menguntungkan lainnya.
CSO dilaporkan mengandung banyak asam oleat, asam linoleat, dan asam
palmitat, asam stearat dan squalene (H.Xiao et al., 2016;Yuan, Wang, Chen, Zhou,
& Ye, 2013). Studi sebelumnya menunjukkan bahwa CSO dapat memberikan efek
perlindungan yang sangat baik terhadap cedera mukosa lambung, termasuk
cedera akibat etanol (Tu, Tung, Lee, & Yen, 2017). Sebuah studi juga menemukan
bahwa CSO dapat meningkatkan efek menguntungkan mikroba usus pada cedera
usus besar (WTLee, Tung, Wu, Tu, & Yen, 2018). CSO juga berpotensi memberikan
efek antibakteri, yang dapat mempengaruhi kelangsungan hidup makrofag tikus
RAW 264.7. Komponen CSO lainnya, seperti saponin,
flavonoid dan tanin dapat mempengaruhi kadar NO dan MDA (Feás et
al., 2013;Hu et al., 2012;Lee & Yen, 2006; X.Xiao et al., 2017). CSO secara
tradisional telah digunakan selama berabad-abad di China sebagai
obat sakit perut dan luka bakar; Namun, efek anti-inflamasi dan aplikasi
terapeutiknya yang potensial baru belakangan ini menjadi subjek
penelitian ilmiah (Guo, Tong, Ren, Tu, & Li, 2018; D.Wang et al., 2019;
Yuan et al., 2013;Zhu, Lin, Chen, Xie, & Wang, 2011). Sejauh ini, potensi
terapeutik CSO untuk mengobati infeksi bakteri relatif buruk karena
stabilitas dan daya serapnya yang rendah.
CSO adalah minyak yang mudah menguap, dan beberapa konstituennya mudah
terurai karena panas, kelembaban, cahaya dan oksigen. Dengan demikian, meningkatkan
stabilitas OMS merupakan isu utama untuk aplikasi medis potensial. Dalam penelitian
sebelumnya, kelarutan, stabilitas, dan bioavailabilitas sistem penghantaran CSO
ditingkatkan dengan enkapsulasi. Beberapa penelitian berusaha untuk meningkatkan
penghantaran senyawa dengan menggunakan berbagai sistem koloid seperti
mikrokapsul, mikrosfer, nanoemulsi, dan liposom. Nanoemulsi dapat meningkatkan
penyerapan dan distribusi obat dalam tubuh dan dapat membantu dengan cepat
menghasilkan konsentrasi darah yang maksimal.Rai,

* Penulis yang sesuai. Laboratorium Kunci Negara untuk Penelitian Berkualitas dalam Pengobatan Tiongkok, Universitas Sains dan Teknologi Makau, Avenida Wai Long, Taipa, Makau,
I01-112, Tiongkok.
Alamat email:llw_0409@163.com (L.-W. Li),chenxiaoyi_66@163.com (X.-Y. Chen),lancongliu@163.com (L.-C. Liu),yangyyyiiiiii@gmail.com (Y.Yang),
wuyoujiaojiao@163.com (Y.-J.Wu),cg753@126.com (G.Chen),zfzhang@must.edu.mo (Z.-F. Zhang),pluo@must.edu.mo (P.Luo).

https://doi.org/10.1016/j.lwt.2020.110815
Diterima 29 Juni 2020; Diterima dalam bentuk revisi 17 Desember 2020; Diterima 21 Desember 2020
Tersedia online 24 Desember 2020 0023-6438/©
2020 Diterbitkan oleh Elsevier Ltd.
L.-W. Li dkk.
Mishra, Yadav, & Yadav, 2018). Keuntungan lebih lanjut dari nanoemulsi
termasuk kejernihan optik yang tinggi, ketahanan yang baik terhadap
pemisahan gravitasi dan agregasi tetesan (de Oca-Ávalos, Candal, & Herrera,
2017), dan meningkatkan bioavailabilitas minyak esensial, yang membuat
nanoemulsi cocok untuk pemberian oral minyak esensial terapeutik (Al-Okbi
et al., 2017). Metode energi tinggi menghasilkan tetesan yang lebih kecil
karena metode tekanan tinggi dan ultrasonikasi (Gupta, Eral, Hatton, &
Doyle, 2016;Hörmann & Zimmer, 2016;McClements, 2011). Studi sebelumnya
menyiapkan nanoemulsi CSO menggunakan metode emulsifikasi energi
rendah (Kanlayavattanakul & Lourith, 2017), menghasilkan nanoemulsi
dengan ukuran tetesan 207,00–430,10 nm dan nilai indeks polidispersitas
(PDI) 0–0,4 dari CSO (10%) dan dengan rasio surfaktan dan kosurfaktan yang
berbeda. Namun, penelitian sebelumnya yang menggunakan enkapsulasi
atau nanoemulsi CSO mengalami beberapa kesulitan, termasuk penurunan
stabilitas senyawa karena variasi ukuran droplet dan nilai PDI yang besar.
Berdasarkan studi sebelumnya, kami menyempurnakan metode ini dengan
mengganti metode energi rendah dengan pendekatan energi tinggi dan
peningkatan konsumsi selama fase dispersi, sehingga mengurangi ukuran
droplet dan PDI.
Mikrofluidisasi tekanan tinggi (HPM) adalah metode energi tinggi untuk
menyiapkan nanoemulsi yang homogen dan stabil dengan efisiensi
persiapan yang tinggi. Menggunakan pompa perpindahan tekanan tinggi
(500–50.000 psi), cairan dipaksa melalui ruang interaksi yang terdiri dari
saluran mikro (Singh et al., 2017). Di bawah tekanan absolut, emulsi dengan
ukuran tetesan kurang dari 100 nm dapat diproduksi setelah beberapa
siklus. Saluran mikro dengan konfigurasi khusus mengemulsi cairan dengan
efek gabungan kavitasi, geseran, dan gaya tumbukan (Gupta et al., 2016).
Ukuran diameter droplet dapat disesuaikan dengan mengoptimalkan
berbagai parameter seperti jenis surfaktan, input energi, dan jumlah siklus
emulsifikasi. Dibandingkan dengan ultrasonikasi, HPM lebih efektif untuk
menghasilkan partikel nano dengan ukuran droplet yang lebih kecil dan PDI
yang lebih rendah. Dengan demikian, penerapan nanoemulsi yang
diproduksi HPM sebagai sistem pengiriman disebabkan oleh sifat uniknya,
seperti diameter tetesan kecil, stabilitas fisik tinggi, kapasitas pemuatan
tinggi, dan transparansi optik. Namun, efek HPM pada karakteristik emulsi
dan stabilitas CSO sejauh ini belum dipelajari secara sistematis.
Pemilihan dan optimalisasi parameter persiapan secara signifikan
mempengaruhi stabilitas dan kapasitas pemuatan nanoemulsi. Dalam
penelitian ini, kami menyiapkan nanoemulsi CSO minyak dalam air
yang stabil melalui HPM dengan beberapa surfaktan, menyelidiki sifat
fisikokimia dan bioaktivitasnya. Sifat fisikokimia dari nanoemulsi yang
dihasilkan diselidiki dengan ukuran tetesan, PDI, dan kekeruhan. Selain
itu, sifat fisikokimia ditentukan lebih lanjut dengan menggunakan
mikroskop elektron transmisi (TEM) dan mikroskop pemindaian laser
confocal (CLSM). Bioaktivitas nanoemulsi yang diformulasikan diselidiki
olehin vitroDanin vivoeksperimen.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Bahan
Camellia oleiferabenih dikumpulkan di daerah Baise, provinsi
Guangxi, Cina, dan diidentifikasi oleh Prof. Hao Zhang (Departemen
Farmakognosi, Sekolah Farmasi, Universitas Sichuan, Sichuan, Cina).
CSO diekstraksi di lokasi pengumpulan dan disimpan pada suhu kamar.
Tween-80, Span-80 (Wuxi Asia-Pacific Joint Chemical Co. Ltd., Yixing,
provinsi Jiangsu, Tiongkok), EL-40 (Huaxia Chemical Reagent Co. Ltd.,
Chengdu, provinsi Sichuan, Tiongkok), Poloxamer-188 , gliserol
(Guangzhou Kehao Biotechnology Co. Ltd., Guangzhou, provinsi
Guangdong, Cina), dan air Milli Q digunakan untuk menyiapkan
nanoemulsi, larutan, dan pengenceran.
2.2. Hewan
Tikus BALB / c jantan dengan berat badan 18–22 g dan berusia 6–8
minggu dibeli dari Pusat Layanan Hewan Laboratorium, Cina
2
LWT 140 (2021) 110815
Universitas Hong Kong, Cina. Tikus disimpan di pusat hewan
Universitas Sains dan Teknologi Makau di bawah siklus 12 jam terang
dan 12 jam gelap pada suhu sekitar 22◦C±1◦C dan kelembaban relatif
60%. Chow diet dan air diberikan ad libitum. Prosedur perawatan dan
perawatan hewan sesuai dengan “Pedoman Komite Perawatan Hewan
dan Pengguna Kelembagaan” dari Universitas Sains dan Teknologi
Macau (Wilayah Administratif Khusus Macau).
2.3. Analisis kromatografi gas-spektrometri massa (GC-MS) CSO
Analisis dilakukan dengan menggunakan metode HS-SPME dengan serat CAR/
PDMS. Serat SPME telah dikondisikan sebelumnya di port injeksi. Tepatnya 1 g CSO
ditimbang dalam vial 22 mL, dan 10 ppm decanal ditambahkan. Botol sampel
diinkubasi pada suhu 60◦C selama 40 menit. Untuk mengekstrak analit, serat CAR/
PDMS dimasukkan ke dalam vial sampel. Setelah 60 menit pemaparan, serat SPME
disuntikkan ke dalam kromatografi gas selama 5 menit untuk mendesorpsi analit
yang ditangkap pada suhu 250◦C.
Analisis GC-MS dilakukan menggunakan sistem Agilent 5975C (Agilent,
Santa Clara, CA, USA) dengan kromatografi gas Agilent 7890A dan port
injeksi split/tanpa split. Pemisahan kromatografi dilakukan pada jarak 30 m×
0,25 mm×Kolom kapiler fusi 0,25 μm (DB-5MS; J&W Scientific, Folsom, CA,
USA). Helium digunakan sebagai gas pembawa, dan kromatografi gas
dioperasikan dalam mode splitless. Suhu port injektor adalah 250◦C, dan
suhu kolom awalnya 40◦C, yang kemudian dinaikkan menjadi 180◦C dengan
laju 5◦C/min, dan kemudian ke 240◦C dengan laju 5◦C/mnt. Suhu kolom
kemudian dipertahankan pada 240◦C selama 5 menit. Energi elektron dalam
mode ionisasi tumbukan elektron adalah 70 eV. Spektrum massa diperoleh
pada rentang pemindaian rasio massa terhadap muatan dari 35 u hingga
550 u untuk menentukan massa yang sesuai untuk pemantauan ion terpilih.
Suhu sumber ion EI dari spektrometer massa adalah 230◦C, dan waktu tunda
pelarut diatur ke 3 menit. Mode pemantauan ion yang dipilih digunakan
untuk kuantisasi; waktu tinggal diatur ke 30 ms per ion. Senyawa CSO
diidentifikasi dengan mencocokkan spektra massa dan dibandingkan
dengan yang ada di perpustakaan spektrometri massa NIST 11. Decanal
digunakan untuk analisis semi-kuantitatif.
2.4. Persiapan nanoemulsi CSO
Nanoemulsi CSO minyak dalam air diproduksi seperti yang dijelaskan
dalam penelitian sebelumnya (Flores et al., 2015;Garrastazu Pereira dkk.,
2018;Hao et al., 2011;Zhang, Gao, Zheng, Zhang, & Han, 2011), dengan
beberapa modifikasi. Tween-80 (5 mL/100 mL), Span-80 (2,5 mL/100 mL),
Poloxamer-188 (2,5 g/100 mL), dan EL-40 (5 mL/100 mL) digunakan sebagai
non-ionik surfaktan, dan etanol (7,5 mL/100 mL) dan gliserol (2,5 mL/100 mL)
sebagai ko-surfaktan. Fraksi volume fase air dan CSO dicampur pada rasio
yang berbeda, pada 60◦C, untuk menghasilkan emulsi kasar. Selanjutnya,
nanoemulsi CSO dibentuk oleh mikrofluidizer bertekanan tinggi (M-110P,
Microfluidics International Corporation, Newton, MA, USA) dalam kondisi
yang berbeda (15.000–25.000 psi dan 15 siklus pemrosesan).
2.5. Karakterisasi nanoemulsi CSO
2.5.1. Pengukuran ukuran tetesan, PDI, dan potensi zeta
Ukuran tetesan rata-rata, PDI, dan potensi zeta nanoemulsi CSO
ditentukan menggunakan penganalisa Zetasizer Nano-ZS90 (Malvern
Instrument Co., Ltd., Worcestershire, UK). Alikuot (0,1 mL) dari setiap
nanoemulsi CSO diencerkan 100 kali lipat menggunakan air Milli Q untuk
menghindari beberapa efek hamburan. Suhu alat diatur menjadi 25◦C dan
waktu kesetimbangan diatur pada 120 detik. Nilai rata-rata dari tiga bacaan
per sampel dilaporkan.
2.5.2. Tes kekeruhan
Kekeruhan diukur seperti yang dijelaskan sebelumnya (Li et al., 2018),
L.-W. Li dkk.
dengan beberapa modifikasi. Nanoemulsi CSO diencerkan 2 kali lipat
menggunakan larutan sodium dodecyl sulphonate (SDS) 1 mg/mL. SDS (1
mg/mL) digunakan sebagai blanko. Absorbansi diukur menggunakan
pembaca pelat mikro (SpectraMax Paradigm Multi-Mode, Molecular Devices
LLC, San Jose, CA, USA) pada 500 nm. Persamaan berikut digunakan:
2.302 AV
T=
SAYA
di mana A adalah absorbansi emulsi encer dua kali lipat pada 500 nm, V adalah
faktor pengenceran, dan I adalah perbedaan jalur optik (1 cm).
Pengukuran diulang setidaknya tiga kali per sampel untuk
menghasilkan nilai rata-rata.
2.6. Pengaruh nilai pH pada stabilitas nanoemulsi
Stabilitas nanoemulsi CSO ditentukan oleh ukuran tetesan, PDI dan
kekeruhan. Nanoemulsi CSO disesuaikan dengan pH 3.0, 5.0, 7.0, 9.0, dan
11.0 menggunakan 0,1 M HCl dan 0,05 M NaOH. Pengukuran dilakukan
setelah waktu inkubasi 2 jam.
2.7. Stabilitas penyimpanan
Nanoemulsi CSO ditempatkan dalam tabung centrifuge tertutup dan
disimpan pada suhu 4◦C atau suhu sekitar selama 30 hari. Ukuran tetesan,
PDI dan kekeruhan diukur setiap 10 hari.
2.8. Morfologi nanoemulsi CSO
TEM dilakukan seperti yang dilaporkan sebelumnya (Chong et al., 2018),
dengan beberapa modifikasi, untuk meneliti morfologi tetesan. Nanoemulsi
CSO diencerkan 100 kali lipat menggunakan air Milli Q sebelum percobaan.
Tetesan nanoemulsi CSO encer ditempatkan pada jaringan tembaga berlapis
karbon pada film penyegel. Kertas saring digunakan untuk menghilangkan
kelebihan cairan dari tepi. Grid dianalisis menggunakan instrumen
JEM-1200EX (JEOL Ltd., Tokyo, Jepang) yang beroperasi pada tegangan
percepatan 100 kV.
2.9. Mikroskopi pemindaian laser confocal (CLSM)
Alikuot (1 mL) nanoemulsi CSO diwarnai menggunakan 2,5 μL pewarna
merah Nil (1 mg/mL etanol). Sistem mikroskop pemindaian laser confocal
Leica TCS SP8 (Leica, Wetzlar, Jerman) digunakan untuk mengamati struktur
tetesan minyak bernoda. Tetesan nanoemulsi bernoda (10 μL) ditempatkan
pada cawan confocal, dan struktur diperiksa di bawah pembesaran 40 kali
lipat oleh TRITC.
2.10. Investigasi in vitro pada Escherichia coli (E. coli)
2.10.1. Konsentrasi hambat minimum (MIC)
Nilai MIC diukur menggunakan pengenceran 2 kali lipat seperti yang
dijelaskan sebelumnya (Hong et al., 2017), dengan beberapa modifikasi. Dua
mililiter nanoemulsi CSO (200 mg/mL) diencerkan hingga konsentrasi akhir
200, 100, 50, 25 mg/mL menggunakan LB yang mengandung kanamisin, dan
bakteriE.coliSuspensi BL21 (DE3) (Novagen, Jerman) (107unit pembentuk
koloni [CFU]/mL; 0,1 mL) diperlakukan dengan pengenceran nanoemulsi
CSO dan dengan LB sebagai kontrol blanko. Campuran diinkubasi dengan
pengocokan pada 140 rpm dan pada 37◦C selama 12 jam. Setelah ini, sampel
dipindahkan ke media agar padat yang mengandung kanamisin, dan pelat
diinkubasi pada suhu 37◦C selama 24 jam. Konsentrasi CSO terendah yang
tidak menghasilkan pertumbuhan bakteri dianggap MIC.
2.10.2. Tes difusi agar
Uji difusi cakram agar digunakan untuk mendeteksi aktivitas
antibakteri sampel nanoemulsi CSO.E.colisuspensi (107CFU/mL; 0,1 mL)
dilapiskan pada media agar padat yang mengandung kanamisin. Steril
3
LWT 140 (2021) 110815
cakram kertas saring (diameter 6 mm) dijenuhkan dengan nanoemulsi CSO (200
mg/mL) atau dengan LB sebagai kontrol ditempatkan pada agar, dan pelat
diinkubasi pada suhu 37◦C selama 24 jam, setelah itu diameter zona hambat
pertumbuhan diukur.
2.10.3. Tes pemindaian mikroskop elektron (SEM).
Morfologi bakteri diperiksa menggunakan SEM, seperti yang dijelaskan
sebelumnya (García-Salinas, Elizondo-Castillo, Arruebo, Mendoza, & Irusta,
2018), dengan beberapa modifikasi.E.colisuspensi (106CFU/mL; 10 mL)
diinkubasi pada 37◦C selama 24 jam. Sampel disentrifugasi pada 4500 rpm
selama 7 menit, dan jumlah nanoemulsi CSO yang sama ditambahkan.
Sampel kemudian diinkubasi pada suhu 37◦C selama 4 jam, diikuti dengan
sentrifugasi (3803×Gselama 7 menit; Heraeus Multifuge X1R Centrifuge,
Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, Massachusetts, AS). Sel diperbaiki
pada 4◦C semalam menggunakan glutaraldehid (2,5 mL/100 mL) setelah
dicuci dua kali menggunakan saline buffer fosfat (0,1 mol/L). Sel-sel
kemudian didehidrasi menggunakan konsentrasi etanol naik (50%, 70%,
100% dan 100%), setelah itu sampel disemprot logam, dan morfologi sel
diperiksa menggunakan SEM (SU 8020, Hitachi Int., Tokyo, Jepang ) pada
tegangan 5,0 kV. Bakteri yang diberi perlakuan LB digunakan sebagai
kontrol kosong.
2.11. Eksperimen in vivo
Untuk menilai efek nanoemulsi CSO pada kelangsungan hidup setelah
sepsis yang diinduksi lipopolisakarida (LPS), 50 tikus secara acak dibagi
menjadi lima kelompok perlakuan berikut (n = 10 per kelompok): kontrol,
LPS (15 mg/kg intraperitoneal [ip]) , LPS + CSO nanoemulsi (25 mL/kg =5 g/
kg, ig), nanoemulsi LPS + CSO (5 mL/kg = 1 g/kg, ig) dan LPS + CSO (5 mL/kg≈
4,3 g/kg, ig). Saline, nanoemulsi CSO atau CSO diberikan 1 jam sebelum
injeksi dengan LPS (15 mg/kg, ip). Kelangsungan hidup dipantau setiap hari
hingga tujuh hari. Dua puluh empat jam setelah pengobatan LPS, mencit
dibius menggunakan pentobarbital, dan sampel darah dikumpulkan dengan
tusukan jantung. Sampel kemudian disentrifugasi pada 12.000×Gselama 30
menit, dan serum dikumpulkan untuk mengukur IL-6, IL-1β dan TNF-α oleh
ELISA seperti yang dijelaskan oleh instruksi kit komersial (ELISA: IL-6 dan
IL-1β: Wuhan Boster Bio-engineering Co. Ltd., Wuhan, provinsi Hubei, Cina;
TNF-α: R&D Systems, Minneapolis, MN, AS).
2.12. Analisis statistik
Data dianalisis menggunakan GraphPad Prism 7.0 (GraphPad Software Inc.,
San Diego, CA, USA), dan hasilnya dinyatakan sebagai rata-rata± standar deviasi.
Perbedaan antara tiga kelompok atau lebih diuji dengan menggunakan analisis
varians satu arah danpost hocBeberapa tes perbandingan Tukey. Tingkat
kelangsungan hidup dibandingkan menggunakan tes log-rank Kaplan-Meier.
Signifikan secara statistik dilaporkan pada hal<0,05.
3. Hasil dan Pembahasan
3.1. Hasil deteksi GC-MS
Gambar 1menunjukkan kromatogram ion total tipikal yang diperoleh di
bawah kondisi ekstraksi yang digunakan. Secara total, 80 senyawa
diidentifikasi berdasarkan kesamaan spektra massanya dan dengan
perbandingan dengan nilai standar yang dijelaskan dalam literatur dan di
pustaka referensi spektrometri massa.Tabel S1menunjukkan data area
puncak yang terdeteksi (persentase) dari berbagai senyawa yang digunakan
untuk menunjukkan konsentrasi relatif masing-masing zat. Hasilnya diTabel
1menunjukkan urutan senyawa utama berikut berdasarkan konsentrasi:
oktan (9,37%), oktanal (7,56%), benzaldehida (7,25%), nonanal (7,02%), 4-
metiloktan (6,34%), furfural (5,96%), bicclo [4.2.0]okta-1,3,5- triena (4,32%), 2-
furanmetanol (4,04%), furfural (3,92%), asam heptanoat (3,55%), 2,7,10-
trimetildodekana (2,75% ),cis-1,2-dimethylcyclopentane (2,05%), 1-
cyclopentylethanone (1,85%), dan 1,3-di-tert-
L.-W. Li dkk. LWT 140 (2021) 110815

Gambar 1.Kromatogram arus ion total minyak biji kamelia.

hasilnya ditampilkan diTabel 2 (a). Ukuran droplet nanoemulsi tidak berubah

Tabel 1
secara signifikan, sedangkan PDI menurun secara signifikan dari 0,406±0,029
Komponen volatil utama dalam CSO.
hingga 0,143±0,011 dengan peningkatan rasio fase minyak, yang penting untuk
TIDAK. Waktu retensi Semi-kuantitatif Senyawa pematangan Ostwald. Rasio surfaktan yang jauh lebih tinggi daripada fase minyak
(menit) hasil
akan menghasilkan surfaktan bebas yang lebih besar yang menutupi permukaan
1 5.4 9,37% Oktan fase terdispersi dan menghasilkan ukuran tetesan yang tidak rata (Ha et al., 2015).
2 11.3 7,56% Oktanal
3 10 7,25% Benzaldehida
4 14.5 7,02% Nonanal
5 4.7 6,34% 4-Metiloktana
3.3. Dampak tekanan HPM
6 6.4 5,96% Furfural
7 8 4,32% Bicyclo [4.2.0]octa-1,3,5-
triena HPM dapat mengurangi ukuran tetesan dan meningkatkan stabilitas
8 6.8 4,04% 2-Furanmetanol nanoemulsi (Jafari, Dia, & Bhandari, 2007). Karakteristik nanoemulsi yang
9 6.2 3,92% Furfural
dihasilkan menggunakan tekanan yang berbeda dipelajari dalam percobaan ini.
10 10.7 3,55% Asam heptanoat
11 17.5 3,24% Decanal (standar internal)
Empat tekanan yang berbeda, yaitu 15.000 psi selama 15 siklus, 18.000 psi selama
12 11.6 2,75% 2,7,10-Trimethyldodecane 15 siklus, 20.000 psi selama 15 siklus, dan 10 siklus dengan 20.000 psi kemudian
13 10.3 2,05% cis-1,2- meningkatkan tekanan menjadi 25.000 psi selama 5 siklus (total 15 siklus).Tabel 2
Dimetilsiklopetana (b)menunjukkan efek tekanan HPM yang berbeda pada nanoemulsi. Ukuran
14 13.7 1,85% 1-Siklopentiletanon
tetesan menurun secara signifikan dengan meningkatnya tekanan, dan ukuran
15 18.7 1,67% 1,3-Di-tert-butilbenzena
tetesan akhir adalah 47,81±0,78 nm. Ini menunjukkan

butilbenzena (1,67%). Tabel 2 (b)

Sifat nanoemulsi dengan tekanan HPM berbeda.
3.2. Dampak rasio minyak/surfaktan pada ukuran tetesan dan PDI Perumusan Tekanan Siklus Ukuran PDI PH Kekeruhan
kode (psi) (nm)
Efek konsentrasi surfaktan pada ukuran tetesan dan tampilan visual P1 15.000 15 67.81 0,155 6.92 271.07±
nanoemulsi M/A dikarakterisasi. Rasio minyak/surfaktan yang berbeda ±1.49A ± ± 10.87A
diuji untuk mengoptimalkan nanoemulsi, dan ukuran tetesan emulsi 0,011 0,04
P2 18.000 15 55.97 0,160 6.95 132.94±
yang dihasilkan oleh HPM ditentukan. Itu
± ± ± 9.81B
2.34B 0,019 0,03
Tabel 2 (a) P3 20.000 15 51.83 0,136 6.91 103.93±
Dampak rasio minyak/surfaktan pada ukuran tetesan dan PDI. ±0,64C ± ± 5.48C
0,010 0,02
Rasio minyak/surfaktan (w/v) Ukuran (nm) PDI P4 20.000 10 47.81 0,143 6.96 84.59±
1:6 42.02±0,10 0,406±0,029A 25.000 5 ± ± ± 1.12C
1:3 41.06±3.97 0,344±0,034A 0,78D 0,011 0,13
1:1,5 44.79±0,30 0,201±0,009B
Semua sampel adalah nilai rata-rata±standar deviasi (n = 3) dan kolom dengan huruf
1:0,75 47.81±0,78 0,143±0,011B
menunjukkan perbedaan antara sampel (hal<0,05). Gunakan huruf "a" pada rata-rata
Semua sampel adalah nilai rata-rata±standar deviasi (n = 3) dan kolom dengan huruf maksimum, huruf "d" pada rata-rata minimum. Penggunaan huruf yang sama
menunjukkan perbedaan antara sampel (hal<0,05). Gunakan huruf "a" pada rata-rata menunjukkan tidak ada perbedaan yang nyata antar sampel. “P4” berarti 10 siklus
maksimum, huruf "d" pada rata-rata minimum. Penggunaan huruf yang sama dengan 20.000 psi kemudian meningkatkan tekanan menjadi 25.000 psi selama 5 siklus
menunjukkan tidak ada perbedaan yang nyata antar sampel. (total 15 siklus).

4
L.-W. Li dkk.
bahwa tetesan yang lebih besar terganggu pada tekanan yang lebih tinggi karena
kekuatan udara yang luar biasa di ruang kecil dan gaya tumbukan energi tinggi di
ruang interaksi (Goh, Mei, Choo, Amru, & Cheng, 2015;Singh et al., 2017; S.Wang
et al., 2020). Kecenderungan kekeruhan mirip dengan ukuran, kekeruhan
menurun dengan meningkatnya tekanan. PDI tidak menunjukkan perubahan yang
signifikan, dan hasilnya sama dengan yang dihasilkan pada penelitian-penelitian
sebelumnya (Goh, Ng, Choo, Boyce, & Chuah, 2015). Dibandingkan dengan
homogenisasi tekanan tinggi, HPM lebih efektif untuk menyiapkan nanoemulsi di
bawah tekanan yang sama (Espitia, Fuenmayor, & Otoni, 2019;Qadir, Faiyazuddin,
Thalib Hussain, Alshammari, &Shakeel, 2016), dan semua tekanan akan
menghasilkan distribusi ukuran monomodal dan nilai PDI yang lebih kecil. Oleh
karena itu, 10 siklus dengan 20.000 psi kemudian meningkatkan tekanan menjadi
25.000 psi selama 5 siklus tampaknya merupakan pengobatan yang optimal, yang
dapat digunakan dalam penelitian lebih lanjut. Konformasi nanoemulsi yang
optimal adalah ukuran rata-rata 47,81±0,78 nm dengan PDI 0,143±0,011. Hasil ini
menunjukkan dispersibilitas yang sangat baik dan ukuran tetesan yang seragam
dari nanoemulsi yang dihasilkan. Dibandingkan dengan hasil penelitian
sebelumnya (Kanlayavattanakul & Lourith, 2017), kami mengamati ukuran tetesan
yang lebih kecil dan nilai PDI yang lebih rendah.
3.4. Karakterisasi nanoemulsi terpilih
pH selama emulsifikasi merupakan faktor penting karena
mempengaruhi stabilitas nanoemulsi (S.Wang et al., 2020). Rata-rata
pH nanoemulsi adalah 6,99±0,13. Seperti yang ditunjukkan diGambar 2,
kekeruhan nanoemulsi menurun dengan peningkatan pH dari 3
menjadi 7, dan kekeruhan tidak berubah dengan peningkatan pH dari 7
menjadi 11. Ukuran droplet dan PDI tidak berubah secara signifikan.
Pada nilai absolut potensial zeta di atas 30 mV, sistem biasanya
dianggap stabil. Dalam penelitian ini, potensi zeta rata-rata nanoemulsi
CSO adalah -6,92 ±0,94 mV, sehingga perlu dilakukan evaluasi
karakterisasi nanoemulsi CSO setelah penyimpanan selama satu bulan.
Setelah penyimpanan, nanoemulsi menunjukkan kisaran ukuran
tetesan 20-100 nm, dan PDI <0,2, dan tetesannya homogen. Hasil kami
menunjukkan bahwa nanoemulsi CSO tahan pH dan stabil dalam
kondisi netral.
3.5. Stabilitas nanoemulsi CSO
Ukuran tetesan, PDI, dan kekeruhan nanoemulsi yang berbeda diukur setelah
30 hari. Hasilnya ditampilkan diGambar 2. Dengan demikian, hal ini menunjukkan
bahwa parameter tersebut tidak berubah secara signifikan setelah 30 hari. PDI
nanoemulsi CSO yang disiapkan dengan metode optimal kami berada di bawah
0,3, yang mengurangi kemungkinan pematangan Ostwald. Dengan demikian,
nanoemulsi dianggap stabil selama penyimpanan jangka panjang.
Gambar 2.(a) nilai pH (3-11), (b) penyimpanan lama pada suhu 4◦C selama 30 hari, dan (c) penyimpanan lama pada suhu lingkungan selama 30 hari terhadap ukuran droplet, PDI, dan
kekeruhan nanoemulsi CSO. ns: tidak signifikan, *: nilai-p<0,05, **: nilai-p<0,01.
5
LWT 140 (2021) 110815
3.6. Penampilan dan struktur mikroskopis nanoemulsi CSO
Nanoemulsi CSO transparan dengan opalescence kuning spesifik,
dan tidak ada pemisahan fasa yang diamati pada suhu sekitar (Gambar
3A). Mikrostruktur nanoemulsi CSO diamati oleh TEM (Gambar 3B).
Tetesan nanoemulsi CSO tampak bulat, dan ukurannya berkisar antara
31,3 nm hingga 60 nm, yang mirip dengan ukuran tetesan yang diukur.
Hasilnya menunjukkan bahwa HPM memberikan efek geser, tumbukan,
dan kavitasi yang besar (Bai, Huan, Gu, & McClements, 2016).
Tetesan nanoemulsi CSO menunjukkan fluoresensi merah setelah
pewarnaan merah Nil. Hasil ditampilkan diGambar 3C. Tetesan nanoemulsi
CSO berbentuk bulat, dan ukurannya juga serupa dengan yang diukur
menggunakan penganalisa Zetasizer Nano-ZS90, yang mengonfirmasi
struktur bulat dan dispersi seragam tetesan nanoemulsi CSO.
3.7. Hasil in vitro
3.7.1. Anti-E. nilai MIC coli nanoemulsi CSO
Efek antibakteri nanoemulsi CSO dinilai dengan menentukan nilai MIC, dan
hasilnya ditunjukkan padaGambar 4a–c. Beberapa bakteri tumbuh pada
konsentrasi nanoemulsi CSO 100 mg/mL, sedangkan tidak ada pertumbuhan
bakteri yang diamati pada konsentrasi 200 mg/mL. Dengan demikian, anti-E.coli
Nilai MIC nanoemulsi CSO adalah 200 mg/mL.
3.7.2. Tes difusi agar
Anti-E.coliefek nanoemulsi CSO juga diamati secara in vitro dalam uji
difusi cakram agar. Diameter lingkaran transparan di sekitar cakram kertas
steril menunjukkan anti-E.coliefek nanoemulsi CSO. Hasilnya ditampilkan di
Gambar 4d, dan e.E.colipertumbuhan secara signifikan dihambat oleh
nanoemulsi CSO (Gambar 4d), dan diameternya adalah 26,0±1,0 mm,
sementaraE.colipertumbuhan tidak terhambat secara signifikan oleh
perlakuan kontrol dengan LB (Gambar 4e), dengan diameter 8,0±1,0 mm.
Dengan demikian, nanoemulsi CSO memberikan anti-E.coliefekin vitro.
3.7.3. Tes pemindaian mikroskop elektron (SEM).
Perubahan morfologi dan mekanisme bakterisida terdeteksi oleh SEM.
Hasilnya ditampilkan diGambar 4f–i (×perbesaran 10.000 atau 40.000 kali lipat).
E.colidiobati dengan nanoemulsi CSO pada 200 mg / mL selama 4 jam. Morfologi
bakteri yang diberi perlakuan dengan nanoemulsi CSO berbeda secara signifikan
dengan bakteri yang tidak diberi perlakuan. Bakteri yang diobati dengan
nanoemulsi CSO menunjukkan membran sel abnormal dan akhirnya dihancurkan (
Gambar 4f, h). Tes SEM menunjukkan bahwa nanoemulsi CSO dapat
menghancurkan membran sel bakteri. Dalam sampel kontrol,E.colisel
menunjukkan permukaan yang halus dengan struktur batang (Gambar 4g, saya).
Tes SEM selanjutnya mengkonfirmasi aktivitas antibakteri dari nanoemulsi CSO.
Dalam penelitian ini, kami menggunakan bakteri gram negatifE.coli
L.-W. Li dkk.
Gambar 3.(a) Gambar penampakan emulsi CSO dan nanoemulsi CSO, (b) Gambar TEM nanoemulsi CSO dan, (c) Gambar mikroskop confocal nanoemulsi CSO.
yang merupakan bakteri patogen umum dan dengan demikian objek uji
wajib dalam pemantauan kebersihan makanan.Escherichia coli, digunakan
pada konsentrasi 106atau 107CFU/mL, berada dalam fase pertumbuhan
eksponensial atau logaritmik (Hong et al., 2017). Pada fase ini,E.colimemiliki
aktivitas yang lebih tinggi dan meningkat pesat. Dengan demikian, efek
antibakteri nanoemulsi CSO diperiksa untuk mengevaluasi kondisi ini
dengan hasil yang lebih dapat diandalkan. Dalamin vitrotes, kami
menggunakan nanoemulsi CSO yang baru disiapkan atau telah disimpan
selama satu bulan, dan semua nanoemulsi CSO menunjukkan efek
antibakteri. Hasil ini mengkonfirmasi stabilitas nanoemulsi. Sistem
nanoemulsi CSO kemungkinan mempromosikan interaksi dengan sel
mikroba melalui beberapa rute: (1) pada ukuran sekitar 50 nm, tetesan
nanoemulsi secara substansial lebih kecil daripadaE.colisel (sekitar 2 μm),
sehingga nanoemulsi CSO menunjukkan permeabilitas yang baik. (2)
Dengan penurunan ukuran droplet emulsi, luas permukaan spesifik emulsi
meningkat, yang kemungkinan meningkatkan area kontak dengan
membran sel bakteri. (3) Membran sel dariE.colimengandung beberapa zat
dengan polaritas rendah, dan CSO juga menunjukkan polaritas rendah yang
dapat memfasilitasi fusi CSO dengan membran sel.
3.8. Hasil in vivo
Nanoemulsi CSO memberikan efek terapeutik pada sepsis yang diinduksi
LPS dengan cara yang tergantung dosis. Kurva kelangsungan hidup
ditunjukkan pada Gambar 5A. Konsentrasi TNF-α, IL-6, dan IL-1β terdeteksi
oleh ELI-SAs, dan hasilnya ditunjukkan padaGambar 5bd. Tingkat serum
ketiga sitokin ini menurun secara signifikan pada tikus yang diobati dengan
nanoemulsi CSO. Efek terapeutik nanoemulsi CSO lebih baik
6
LWT 140 (2021) 110815
daripada CSO asli, yang menunjukkan potensi nanoemulsi CSO untuk
mengobati sepsis yang diinduksi LPS.
Berbeda dengan nanopartikel kaku, nanoemulsi adalah bahan yang
fleksibel dan tidak mudah dikenali dan difagositosis oleh sel Kupffer
hati, yang sangat meningkatkan efek terapeutik nanoemulsi. Pada saat
yang sama, surfaktan non-ionik digunakan dalam penelitian ini, dan
nilai absolut dari nilai potensial zeta rendah, menunjukkan muatan
permukaan yang lebih rendah, yang menurunkan kemungkinan
pengenalan oleh sel Kupffer.
Hasil percobaan ini memberikan dasar untuk aplikasi antibakteri
dan antiinflamasi nanoemulsi CSO. Hasil dariin vivopercobaan juga
secara tidak langsung menunjukkan efek pencegahan CSO pada sepsis,
seperti yang diperkirakan dari tingkat tiga sitokin inflamasi TNF-α, IL-6,
dan IL-1β.
4. Kesimpulan
Nanoemulsi CSO diproduksi menggunakan metode emulsifikasi HPM, yang
ditemukan sebagai pendekatan yang cocok untuk menyiapkan nanoemulsi M/A
yang stabil. Beberapa senyawa utama CSO diidentifikasi dengan GC-MS, dan
sebagian besar senyawanya adalah alkana, aldehida, dan alkohol. TEM
menunjukkan bahwa nanoemulsi CSO terjadi sebagai tetesan globular kecil.
Nanoemulsi CSO tidak beracun dan aman untuk penggunaan antimikrobain vitro
dan menjanjikan untuk pengobatan sepsis. Metode kami menghasilkan
nanoemulsi yang stabil dengan tetesan bola yang menunjukkan aktivitas anti-
bakteri dan dengan efek yang menjanjikan untuk mengobati sepsis yang diinduksi
LPS. Selain itu, penelitian ini memberikan landasan teoritis untuk nanoemulsi CSO
sebagai agen antibakteri atau antisepsis alami, yang
L.-W. Li dkk. LWT 140 (2021) 110815

Gambar 4.Uji MIC, uji difusi cakram agar dan uji SEM nanoemulsi CSO dan anti-E LB kosong. E.coli secara invitro. (a) Tes MIC anti-E nanoemulsi CSO 200 mg/mL. E.coli
secara invitro. (b) Uji MIC anti-E nanoemulsi CSO 100 mg/mL. E.coli secara invitro. (c) Tes MIC untuk LB anti-E kosong. E.coli secara invitro. ( d ) Uji difusi cakram agar anti-E
nanoemulsi CSO. E.coli secara invitro. ( e ) Tes difusi cakram agar dari LB anti-E kosong. E.coli secara invitro. ( f ) Tes SEM anti-E nanoemulsi CSO. E. coli in vitro (1,00 μm).
( g ) Tes SEM dari LB anti-E kosong. E. coli in vitro (1,00 μm). ( h ) Tes SEM anti-E nanoemulsi CSO. E. coli in vitro (5,00 μm). (i) Tes SEM blanko LB anti-E. E. coli in vitro (5,00
μm).

Gambar 5.Hasil uji hewan. (a) Kurva kelangsungan hidup berbagai kelompok hewan. (b) Kandungan TNF-α dalam serum berbagai kelompok hewan. (c) Kandungan IL-6
dalam serum berbagai kelompok hewan. (d) Kandungan IL-1β dalam serum berbagai kelompok hewan. NE: nanoemulsi.

7
L.-W. Li dkk.
sangat relevan untuk studi lebih lanjut dalam industri makanan,
kosmetik, dan farmasi.
Pernyataan kontribusi kepengarangan CRedit
Long-Wei Li:melakukan persiapan nanoemulsi dan uji stabilitas,
berkontribusi pada persiapan naskah, melakukan percobaan in vivo
dan menganalisis data.Xiao Yi Chen:melakukan tes confocal dan
percobaan in vitro.Lan-Cong Liu:melakukan percobaan in vivo dan
menganalisis data.Yang:melakukan persiapan nanoemulsi dan uji
stabilitas.Anda-Jiao Wu:menyempurnakan naskah untuk publikasi,
Semua penulis membaca dan menyetujui naskah akhir.Gang Chen:
melakukan pengumpulan bahan minyak dan menganalisis komposisi
kimianya.Zhi-Feng Zhang:merancang semua percobaan, melakukan
pengumpulan bahan minyak dan menganalisis komposisi kimianya,
berkontribusi pada persiapan naskah.Pei Luo: merancang semua
eksperimen, berkontribusi pada persiapan naskah.
Deklarasi kepentingan bersaing
Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak memiliki konflik kepentingan.
Terima kasih
Studi ini didukung oleh National Key Research and Development
Project of China (2019YFC1712503) dan oleh Dana Pengembangan
Sains dan Teknologi Macao (056/2016/A2).
Lampiran A. Data tambahan
Data tambahan untuk artikel ini dapat ditemukan online dihttps://doi.
org/10.1016/j.lwt.2020.110815.
Referensi
Al-Okbi, SY, Mohamed, DA, Hamed, TES, Kassem, AA, El-Alim, SHA, &
Mostafa, DM (2017). Peningkatan pencegahan perkembangan perlemakan hati non alkohol
menjadi steatohepatitis dengan memasukkan minyak biji labu dalam nanoemulsi.Jurnal
Cairan Molekuler, 225, 822–832.https://doi.org/10.1016/j.molliq.2016.10.138 Bai, L., Huan,
S., Gu, J., & McClements, DJ (2016). Pembuatan minyak dalam air
nanoemulsi dengan mikrofluidisasi saluran ganda menggunakan pengemulsi
alami: Saponin, fosfolipid, protein, dan polisakarida.Hidrokoloid Pangan, 61,
703–711.https://doi.org/10.1016/j.foodhyd.2016.06.035
Chong, WT, Tan, CP, Cheah, YK, Lajis, AFB, Dian, NLHM, Kanagaratnam, S.,
et al. (2018). Optimalisasi parameter proses dalam persiapan nanoemulsi berbasis minyak
sawit merah kaya tocotrienol yang distabilkan oleh Tween80-Span 80 menggunakan
metodologi permukaan respons.PloS Satu, 13(8), 1–22.https://doi.org/10.1371/journal. roti
manis.0202771
Espitia, PJP, Fuenmayor, CA, & Otoni, CG (2019). Nanoemulsi: Sintesis,
karakterisasi, dan aplikasi dalam kemasan pangan aktif berbasis bio.Tinjauan Komprehensif
dalam Ilmu Pangan dan Keamanan Pangan, 18(1), 264–285.https://doi.org/10.1111/
1541-4337.12405
Feás, X., Estevinho, LM, Salinero, C., Vela, P., Sainz, MJ, Vázquez-Tato, MP, dkk.
(2013). Triasilgliserida, fitur antioksidan dan antimikroba dari minyak virgin camellia
oleifera, C. reticulata dan C. sasanqua.Molekul, 18(4), 4573–4587.https://doi. org/
10.3390/molecules18044573
Flores, FC, De Lima, JA, Da Silva, CR, Benvegnú, D., Ferreira, J., Burger, ME, dkk.
(2015). Hidrogel yang mengandung nanokapsul dan nanoemulsi minyak pohon teh
memberikan efek antiedematogenik dan meningkatkan penyembuhan luka kulit.
Jurnal Nanosains dan Nanoteknologi, 15(1), 800–809.https://doi.org/10.1166/
jnn.2015.9176
García-Salinas, S., Elizondo-Castillo, H., Arruebo, M., Mendoza, G., & Irusta, S. (2018).
Evaluasi aktivitas antimikroba dan sitotoksisitas dari berbagai komponen asal alami
yang terdapat dalam minyak atsiri.Molekul, 23(6), 1–18.https://doi.org/ 10.3390/
molecules23061399
Garrastazu Pereira, G., Rawling, T., Pozzoli, M., Pazderka, C., Chen, Y., Dunstan, CR,
et al. (2018). Pengiriman oral berkemampuan nanoemulsi dari antikanker baru ω-3
turunan asam lemak.Bahan nano, 8(10), 1–14.https://doi.org/10.3390/nano8100825
Goh, PS, Ng, MH, Choo, YM, Boyce, AN, & Chuah, CH (2015). Produksi dari
nanoemulsi dari fraksi kaya tocotrienol berbasis sawit dengan mikrofluidisasi.
Molekul, 20(11), 19936–19946.https://doi.org/10.3390/molecules201119666 Guo, N.,
Tong, T., Ren, N., Tu, Y., & Li, B. (2018). Saponin dari biji genus kamelia:
Fitokimia dan bioaktivitas.Fitokimia, 149, 42–55.https://doi.org/ 10.1016/
j.phytochem.2018.02.002
LWT 140 (2021) 110815
Gupta, A., Eral, HB, Hatton, TA, & Doyle, PS (2016). Nanoemulsi: Pembentukan,
properti dan aplikasi.Bahan Lembut, 12(11), 2826–2841.https://doi.org/
10.1039/c5sm02958a
Ha, TVA, Kim, S., Choi, Y., Kwak, HS, Lee, SJ, Wen, J., dkk. (2015). Antioksidan
aktivitas dan bioaksesibilitas nanoemulsi yang berbeda ukuran untuk ekstrak tomat yang
diperkaya likopen.Kimia Pangan, 178, 115–121.https://doi.org/10.1016/j.
foodchem.2015.01.048
Hao, J., Fang, X., Zhou, Y., Wang, J., Guo, F., Li, F., dkk. (2011). Pengembangan dan
optimalisasi formulasi nanopartikel lipid padat untuk pengiriman kloramfenikol
mata menggunakan desain Box-Behnken.Jurnal Internasional Pengobatan Nano, 6,
683–692.https://doi.org/10.2147/ijn.s17386
Hong, L., Jing, W., Qing, W., Anxiang, S., Mei, X., Qin, L., dkk. (2017). Efek penghambatan
dari: Zanthoxylum bungeanum essential oil (ZBEO) pada disfungsi, dan disfungsi
usus.Pangan dan Fungsi, 8(4), 1569–1576.https://doi.org/10.1039/ c6fo01739h
Hörmann, K., & Zimmer, A. (2016). Pengiriman obat dan penargetan obat dengan parenteral
nanoemulsi lipid - ulasan.Jurnal Rilis Terkendali, 223, 85–98.https://doi. org/10.1016/
j.jconrel.2015.12.016
Hu, JL, Nie, SP, Huang, DF, Li, C., Xie, MY, & Wan, Y. (2012). Antimikroba
aktivitas fraksi kaya saponin dari kue Camellia oleifera dan pengaruhnya terhadap
viabilitas sel makrofag tikus RAW 264.7.Jurnal Ilmu Pangan dan Pertanian, 92(12),
2443–2449.https://doi.org/10.1002/jsfa.5650
Jafari, SM, He, Y., & Bhandari, B. (2007). Produksi emulsi sub-mikron oleh
teknik ultrasonografi dan mikrofluidisasi.Jurnal Teknik Pangan, 82(4), 478–488.
https://doi.org/10.1016/j.jfoodeng.2007.03.007 Kanlayavattanakul, M., & Lourith,
N. (2017). Persiapan nano minyak biji teh yang stabil
emulsi partikel dengan metode energi rendah dengan surfaktan non-ionik.Grasas Y
Aceites, 68(2), 1–8.https://doi.org/10.3989/gya.1271162
Lee, WT, Tung, YT, Wu, CC, Tu, PS, & Yen, GC (2018). Minyak kamelia (kamelia
oleifera Abel.) memodifikasi komposisi mikrobiota usus dan meredakan kolitis
akibat asam asetat pada tikus.Jurnal Kimia Pertanian dan Pangan, 66(28), 7384–
7392. https://doi.org/10.1021/acs.jafc.8b02166
Lee, CP, & Yen, GC (2006). Aktivitas antioksidan dan senyawa bioaktif biji teh
(Camellia oleifera Abel.) minyak.Jurnal Kimia Pertanian dan Pangan, 54(3), 779–
784.https://doi.org/10.1021/jf052325a
Li, Y., Wu, CL, Liu, J., Zhu, Y., Zhang, XY, Jiang, LZ, dkk. (2018). Protein kedelai
nanoemulsi isolat-fosfatidilkolin dibuat menggunakan homogenisasi tekanan tinggi.
Bahan nano, 8(5).https://doi.org/10.3390/nano8050307 McClements, DJ (2011).
Nanoemulsi yang dapat dimakan: Fabrikasi, sifat, dan fungsional
pertunjukan.Bahan Lunak, 7(6), 2297–2316.https://doi.org/10.1039/c0sm00549e de
Oca-Ávalos, JMM, Candal, RJ, & Herrera, ML (2017). Nanoemulsi: Stabilitas
dan sifat fisik.Opini Saat Ini dalam Ilmu Pangan, 16, 1–6.https://doi.org/ 10.1016/
j.cofs.2017.06.003
Qadir, A., Faiyazuddin, MD, Talib Hussain, MD, Alshammari, TM, & Shakeel, F.
(2016). Langkah-langkah kritis dan energetika yang terlibat dalam keberhasilan
pengembangan nanoemulsi yang stabil.Jurnal Cairan Molekuler, 214, 7–18.https://doi.org/
10.1016/j. molliq.2015.11.050
Rai, VK, Mishra, N., Yadav, KS, & Yadav, NP (2018). Nanoemulsi sebagai
pembawa farmasi untuk pengiriman obat dermal dan transdermal: Pengembangan
formulasi, masalah stabilitas, pertimbangan dasar dan aplikasi.Jurnal Rilis
Terkendali, 270, 203–225.https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2017.11.049 Singh, Y.,
Meher, JG, Raval, K., Khan, FA, Chaurasia, M., Jain, NK, dkk. (2017).
Nanoemulsion: Konsep, pengembangan, dan aplikasi dalam pemberian obat.Jurnal
Rilis Terkendali, 252, 28–49.https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2017.03.008 Tu, PS,
Tung, YT, Lee, WT, & Yen, GC (2017). Efek perlindungan dari minyak kamelia
(camellia oleifera Abel.) melawan cedera oksidatif akut yang diinduksi etanol pada mukosa
lambung pada tikus.Jurnal Kimia Pertanian dan Pangan, 65(24), 4932–4941. https://doi.org/
10.1021/acs.jafc.7b01135
Wang, D., Huo, R., Cui, C., Gao, Q., Zong, J., Wang, Y., dkk. (2019). Aktivitas antikanker
dan mekanisme kadar saponin total dari sisa bungkil biji: Camellia oleifera Abel. pada tikus
yang mengandung tumor hepatoma-22.Pangan dan Fungsi, 10(5), 2480–2490. https://
doi.org/10.1039/c9fo00069k
Wang, S., Wang, X., Liu, M., Zhang, L., Ge, Z., Zhao, G., dkk. (2020). Persiapan dan
karakterisasi nanoemulsi minyak biji Eucommia ulmoides O / W dengan
mikrofluidisasi tekanan tinggi dinamis.Lebensmittel-Wissenschaft und
-Technologie, 121, 108960.https://doi.org/10.1016/j.lwt.2019.108960
Xiao, X., He, L., Chen, Y., Wu, L., Wang, L., & Liu, Z. (2017). Anti inflamasi dan
efek antioksidan komponen Camellia oleifera Abel.Kimia Obat Masa Depan,
9(17), 2069–2079.
Xiao, H., Yao, Z., Peng, Q., Ni, F., Sun, Y., Zhang, CX, dkk. (2016). Ekstraksi dari
squalene dari minyak kamelia dengan kompleksasi ion perak.Teknologi Pemisahan dan
Pemurnian, 169, 196–201.https://doi.org/10.1016/j.seppur.2016.05.041 Yuan, J., Wang, C.,
Chen, H., Zhou, H., & Ye, J. (2013). Prediksi asam lemak
komposisi dalam minyak Camellia oleifera dengan spektroskopi transmisi inframerah
dekat (NITS).Kimia Pangan, 138(2–3), 1657–1662.https://doi.org/10.1016/j.
foodchem.2012.11.096
Zhang, Y., Gao, J., Zheng, H., Zhang, R., & Han, Y. (2011). Persiapan 3,5-
nanoemulsi dihidroksi-4-isopropilstilben dan pelepasan in vitro.Jurnal Internasional
Pengobatan Nano, 6, 649–657.https://doi.org/10.2147/ijn.s17242 Zhu, XY, Lin, HM,
Chen, X., Xie, J., & Wang, P. (2011). Berbantuan mekanokimia
ekstraksi dan aktivitas antioksidan kaempferol glikosida dari camellia oleifera Abel.
makanan.Jurnal Kimia Pertanian dan Pangan, 59(8), 3986–3993.https://doi.org/
10.1021/jf1042689