Teknologi

MIKROBIOLOGI AGROINDUSTRI
PNI 2271. TA. 2022/2023
Industri
Pertanian

Teknik Perhitungan Most Probable (MPN)

Ardi Habibi (180331100038)
Program Studi Teknologi Industri Pertanian, Fakultas Pertanian, Universitas Trunojoyo
Madura, Jl Telang, Kec. Kamal, Kab. Bangkalan PO BOX 2 Kamal

Abstrak Tanggal praktikum:

MPN adalah suatu metode enumerasi 19 Mei 2023
mikroorganisme yang menggunakan data dari hasil
Tanggal penyerahan:
pertumbuhan mikroorganisme pada medium cair
22 Mei 2023
spesifik dalam seri tabung yang ditanam dari sampel
padat atau cair yang ditanam berdasarkan jumlah Asisten Praktikum:
sampel atau diencerkan menurut tingkat seri Hilmi Izzuddin
tabungnya sehingga dihasilkan kisaran jumlah
mikroorganisme yang diuji dalam nilai MPN/satuan Nilai:
volume atau massa sampel. Metode MPN biasanya
dilakukan untuk menghitung jumlah bakteri di dalam
contoh berbentuk cair, meskipun dapat pula
digunakan untuk contoh berbentuk padat dengan
terlebih dahulu disuspensikan dengan perbandingan
1 : 10 dari contoh tersebut dalam buffer. Metode Most
Probable Number (MPN) mempunyai beberapa
kelebihan, salah satunya pada volume media LBSS
dan LBDS menggunakan 10 ml dan 5 ml. Coliform
merupakan suatu grup bakteri yang digunakan
sebagai indicator adanya polusi kotoran dan kondisi
yang tidak baik terhadap air, makanan, susu dan
produk-produk susu. Coliform sebagai suatu
kelompok dicirikan sebagai kelompok bakteri
berbentuk batang, gram negatif, tidak membentuk
spora, aerobilik fakultatif yang memfermentasi lactose
dengan menghasilkan asam dan gas. Faktor yang
mempengaruhi nilai MPN adalah sanitasi dari alat,
mutu sampel, waktu inkubasi dan kebersihan tempat
pengujian. Syarat bakteriologis air minum menurut
peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia
Nomor 907/Menkes/SK/VII/2002, air minum tidak
boleh mengandung bakteri patogen, yang dapat
menyebabkan penyakit terutama penyakit saluran
pencernaan, yaitu bakteri coliform. Standar
kandungan bakteri coliform dalam air minum 0 per
100 ml.Kontaminasi bakteri coliform disebabkan oleh
pencemaran pada air baku, jenis peralatan yang
digunakan, karena kurangnya pengetahuan tentang
hal higienenitas dan sanitasi DAMIU.

Kata Kunci: Bakteri, Most Probable, MPN,

Metode Pelaksanaan
Praktikum pertemuan pertama yaitu tentang perhitungan most probable
(MPN), dimana praktikum dilaksanakan pada tanggal 19 Mei 2023 di
Laboratorium analisis mutu Universitas Trunojoyo Madura. Proses TPC
menggunakan Alat yang digunakan dalam praktikum ini yaitu tabung reaksi,
tabung durham, inkubator, hot plate, erlenmeyer, pipet volume, spatula, oven,
autoklaf, tisu dan aluminium foil. Sedangkan bahan yang digunakan adalah
aquades, lactose broth, air kran masjid UTM dan alkohol.

Mulai

Sterilisasi kering

Menimbang 1,3 lb dan

mengukur 100 ml aquadest

Memasukkan 9 ml aquadest ke dalam tabung reaksi

Memasukkan 5 ml LB ke 9 tabung reaksi

Memasukkan tabung durham ke

dalam tabung reaksi

Menutup tabung reaksi dengan

kapas dan aluminium foil

Sterilisasi basah tabung reaksi yang

berisi aquadest dan LB

Selesai

Gambar 1 Flowchart prosedur pembuatan media MPN

 Mulai

Mengambil sampel air

cucian beras

Menginjeksi kedalam tabung

pertama dan di vortex

Memasukkan pengenceran sampai tingkat 3

Menginjeksi 1 ml sampai pada pengenceran 1 – 3

tabung reaksi yang berisi LB dan diatabung durham

Melakukan perlakuan sama pada

pengennceran 2 dan 3

Menutup tabung reaksi dengan

kapas dan aluminium foil

Menginkubasi selama 48 jam dengan

suhu 37 °C

Mengamati warna dan gelembung

Nilai MPN

Selesai

Gambar 2 Flowchart prosedur MPN

Hasil Pengamatan dan Pembahasan

Tabel 1. Nilai perhitungan MPN pada air beras

No Sampel Uji Pengenceran Lower Upper Nilai

sampel MPN / g
10−1 10−2 10−3
ke
2.000
1 Air 1 +++ +++ + 90 460
cucian
2 + + +++ 3,6 38 11
beras
3 ++ +++ +++ 420 Tak terhingga > 1.100
2 Air 1 +++ ++ + 37 420 150
selokan
2 ++ +++ + 8,7 94 36
3 +++ +++ + 90 2000 460

Keterangan :

+ = Keruh

++ = Gelembung

+++ = Keruh dan Gelembung

Gambar 3 Sampel Most Probable Number (MPN)

MPN adalah suatu metode enumerasi mikroorganisme yang

menggunakan data dari hasil pertumbuhan mikroorganisme pada medium cair
spesifik dalam seri tabung yang ditanam dari sampel padat atau cair yang
ditanam berdasarkan jumlah sampel atau diencerkan menurut tingkat seri
tabungnya sehingga dihasilkan kisaran jumlah mikroorganisme yang diuji dalam
nilai MPN/satuan volume atau massa sampel. Metode MPN biasanya dilakukan
untuk menghitung jumlah bakteri di dalam contoh berbentuk cair, meskipun dapat
pula digunakan untuk contoh berbentuk padat dengan terlebih dahulu
disuspensikan dengan perbandingan 1 : 10 dari contoh tersebut dalam buffer.
Metode Most Probable Number (MPN) mempunyai beberapa kelebihan, salah
satunya pada volume media LBSS dan LBDS menggunakan 10 ml dan 5 ml.
 Coliform merupakan suatu grup bakteri yang digunakan sebagai indicator
adanya polusi kotoran dan kondisi yang tidak baik terhadap air, makanan, susu
dan produk-produk susu. Coliform sebagai suatu kelompok dicirikan sebagai
kelompok bakteri berbentuk batang, gram negatif, tidak membentuk spora,
aerobilik fakultatif yang memfermentasi lactose dengan menghasilkan asam dan
gas dalam waktu 48 jam suhu 370C . Adanya bakteri coliform dalam makanan
dan minuman menunjukkan kemungkinan adanya mikroba enteropatogenik dan
toksigenik yang berbahaya bagi kesehatan. Syarat bakteriologis air minum
menurut peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor
907/Menkes/SK/VII/2002, air minum tidak boleh mengandung bakteri patogen,
yang dapat menyebabkan penyakit terutama penyakit saluran pencernaan, yaitu
bakteri coliform. Standar kandungan bakteri coliform dalam air minum 0 per 100
ml.Kontaminasi bakteri coliform disebabkan oleh pencemaran pada air baku,
jenis peralatan yang digunakan, karena kurangnya pengetahuan tentang hal
higienenitas dan sanitasi.

Lactose Broth merupakan suatu media yang digunakan untuk pengujian

sampel air apakah sampel air tersebut mengandung bakteri coliform atau tidak.
LB juga digunakan sebagai media untuk memdeteksi kehadiran coliform pada air,
makanan, dan produk susu. Media LB ada 2 macam yaitu double strength dan
single strength. Keduanya memiliki perbedaan pada jumlah komposisi
penyusunnya.

Hasil yang didapatkan dari pengujian bakteri Coliform pada air cucian
beras menunjukkan bahwa sampel 1, 2 maupun 3 positif membentuk gelembung
atau gas dan keruh yang dapat disimpulkan bahwa air cucian beras tersebut
terkontaminasi dengan bakteri Coliform. Dari tabel diatas dapat juga dilihat pada
setiap sampel melebihi batas nilai indeks MPN artinya air cucian beras positif
mengandung bakteri Coliform, hal tersebut ditandai dengan adanya gelembung
gas dan perubahan warna sampel (kekeruhan) sebagai bukti adanaya fermentasi
laktosa bakteri. Dari hasil perhitungan MPN dapat kita ketahui bahwa air cucian
beras tidak layak dikonsumsi karena dapat menimbulkan penyakit pada saluran
pencernaan. Faktor yang mempengaruhi nilai MPN adalah sanitasi dari alat,
mutu sampel, waktu inkubasi dan kebersihan tempat pengujian. Semakin lama
waktu penyimpanan atau inkubasi mempengaruhi kualitas fisik dan kimia sampel
(Agustin et al. 2019).

Simpulan

Kesimpulan dari praktikum kali ini adalah melakukan pemeriksaan sampel

air cucian beras diperoleh hasil semua sampel pada uji pendugaan dinyatakan
positif mengandung cemaran dari bakteri Coliform . Hal tersebut terbukti dengan
adanya gelembung dan perubahan warna atau terjadi kekeruhan sebagai bukti
anya bakteri Colifor. air cucian beras tidak layak dikonsumsi karena akan
menyebabkan penyakit pada saluran pecernaan. Faktor yang mempengaruhi nilai
MPN adalah sanitasi dari alat maupun media, kebersihan penguji dan meja kerja,
mutu dari sampel dan waktu inkubasi.

Referensi

Agustin, D., Rahmawati, Elvi, R. 2019. Angka Paling Mungkin ( Most Probable
Number/ MPN) Coliform Sampel Kue Bingke Berendam di Pontianak.
Protobiont. 8(1) : 65-67.