APLIKASI SPEKTROFOTOMETRI FLUORESENSI DALAM ANALISIS

FARMASI

Penentuan etinilestradiol dalam tablet

BP menggunakan tes fluoresensi untuk menentukan etinilestradiol dalam
tablet. Tablet mengandung dosis rendah obat, sehingga gangguan oleh eksipien
cenderung menyebabkan masalah dalam pengukuran spektrofotometri UV /
terlihat. Sampel diukur menggunakan panjang gelombang eksitasi 280 nm dan
mengukur emisi pada 320 nm. Seperti yang terlihat ketika spektrum fluoresensi
ethinylestradiol telah dibahas sebelumnya, panjang gelombang eksitasi optimum
untuk ethinylestradiol adalah 285 nm dan maksimum emisi adalah 310 nm.
Dengan demikian, pengujian ini seperti yang dijelaskan membawa keluar dua poin
penting, yang mungkin telah secara sadar atau secara empiris disesuaikan dalam
desain pengujian:
i. Penggunaan panjang gelombang eksitasi yang sedikit lebih pendek
mengurangi kemungkinan interferensi dari pencar Raman, yang mungkin
tumpang tindih dengan spektrum fluoresensi dan tergantung pada panjang
gelombang radiasi yang menarik, sedangkan maksimum fluoresensi tidak.
ii. Intensitas Rayleigh dan Tyndall tersebar pada panjang gelombang yang
lebih pendek lebih besar dan dengan demikian emisi diamati pada panjang
gelombang yang sedikit lebih panjang dari 320 nm untuk mengurangi
gangguan dari sumber ini.

Setelah fluoresensi dari ekstrak sampel dalam metanol telah ditentukan, 1 M

larutan natrium hidroksida ditambahkan ke larutan sampel dan fluoresensi
ditentukan lagi. Penambahan natrium hidroksida menghilangkan fluoresensi
dengan mengionisasi gugus fenol dari etinilestradiol, dan dengan demikian setiap
fluoresensi sisa yang disebabkan eksipien dapat dikurangkan dari pembacaan.
Dalam pengujian BP, kandungan ethinylestradiol dari ekstrak tablet ditentukan
oleh perbandingan dengan fluoresensi larutan yang mengandung sejumlah standar
etinilestradiol yang diketahui dianalisis menggunakan kondisi yang sama.
Penentuan tingkat disolusi tablet digoxin
Beberapa senyawa yang secara alami tidak berpendar dapat menjadi
fluoresen reaksi kimia sederhana. Misalnya, digoxin dapat dikonversi menjadi
derivatif fluorescent oleh dehidrasi dengan HCl, diikuti oleh oksidasi dengan
H2O2. Obat ini memiliki indeks terapeutik yang sempit dan penting untuk
memastikan bahwa dosis obat yang tepat diberikan oleh bentuk sediaan. Untuk
memastikan pelepasan obat yang efektif dari matriks tablet, BP menunjukkan
bahwa pengujian disolusi harus dilakukan. Obat ini diberikan dalam dosis rendah
(ca 100 mg per tablet), membuat pengukuran konsentrasi dilepaskan ke dalam
medium disolusi sulit. Uji BP untuk pelepasan menunjukkan bahwa 75% obat dari
enam tablet harus dilepaskan ke 600 ml media disolusi setelah 2 jam. Pengukuran
fluoresensi dilakukan pada medium disolusi setelah pembentukan turunan
menggunakan panjang gelombang eksitasi 360 nm dan panjang gelombang emisi
490 nm. Obat dalam larutan dikuantifikasi dibandingkan dengan larutan yang
mengandung konsentrasi standar yang dikenal yang diperlakukan dengan cara
yang sama seperti sampel.

Penentuan aluminium dalam air untuk injeksi sebagai kompleks fluorescent

Pengukuran fluoresensi berguna dalam tes batas di mana pengotor jejak
fluorescent atau dapat diberikan fluorescent oleh modifikasi kimia. Contohnya
adalah penentuan aluminium dalam air untuk digunakan dalam larutan
hemodialisis dengan pembentukan garam dengan 8-hydroxyquinolone (Gambar
7.5), diikuti oleh kuantifikasi kompleks menggunakan spektrofotometri
fluoresensi. Panjang gelombang eksitasi diatur pada 392 nm dan emisi diukur
pada 518 nm. Jenis kompleks fluorescent ini dapat digunakan untuk menentukan
tingkat rendah sejumlah ion logam.

Penentuan stabilitas obat peptida dalam larutan

Kerumitan struktural obat peptida, yang sedang diproduksi semakin oleh
bioteknologi, berarti bahwa pemeriksaan kontrol kualitas tambahan diperlukan,
baik untuk kontaminan tingkat rendah seperti protein imunogenik dan untuk
perubahan dalam struktur tersier (tiga dimensi) protein dalam larutan , yang dapat
mempengaruhi aktivitasnya. Selama studi stabilitas, obat peptida cenderung
membentuk agregat dan ini akhirnya menghasilkan pengendapan. Perubahan
semacam itu dapat mengubah keampuhan obat.
Selain itu, penting untuk memantau penghambatan perubahan tersebut di
mana stabilisator dan alat bantu formulasi lainnya ditambahkan ke larutan protein.
Fluorimetri menyediakan metode berikut perubahan dalam solusi dan baru-baru
ini digunakan dalam studi stabilitas faktor pertumbuhan fibroblast rekombinan
dalam larutan Fluoresensi dalam peptida ini sebagian besar karena adanya residu
tirosin (eksitasi 277 nm dan emisi 305 nm) dan residu triptofan (eksitasi 290 nm
dan emisi 350 nm) dalam strukturnya. Denaturasi protein disertai dengan
penurunan bertahap puncak emisi residu tirosin pada 305 nm dan kenaikan
bertahap puncak emisi residu triptofan pada 350 nm. Efek ini ditunjukkan pada
Gambar 7.6 dan mengilustrasikan fakta bahwa kekuatan fluoresensi bergantung
pada lingkungan lokal kromofor. Pengukuran efek ditemukan mampu mengukur
jumlah protein denaturasi dalam larutan.

Turunan fluorescent dan analisis aliran injeksi

Analisis injeksi aliran dibahas secara lebih rinci dalam Bab 3 (hal. 83).
Beberapa reaksi kimia sederhana yang menghasilkan pembentukan derivatif
fluorescent ditunjukkan pada Tabel 7.2. Semua reaksi ini dapat disesuaikan untuk
memungkinkan analisis oleh FIA.