Mikrobiologi Pangan

Semester III

ISOLASI MIKROORGANISME
 Pengertian:
 Isolasi mikroorganisme  memisahkan
spesies mikroorganisme dari populasi
campuran menjadi biakan murni.

Biakan murni terdiri dari suatu populasi sel yang

semuanya berasal dari satu sel induk.
Biakan murni diperlukan krn semua metode
mikrobiologis yg digunakan utk penelaahan
mikroorganisme hrs terdiri dari satu mcm mo.
 Metode
Pengenceran (Lister, 1865)  cawan sebar
Penuangan (Robert Koch, 1843-1905)
cawan tuang
Penggesekkan  cawan gores
Single Cell Isolation
Inokulasi hewan
Dilakukan dengan teknik aseptik mencegah
tercemarnya biakan murni dan melindungi pelaku
dr infeksi diri dan orang-orang di sekeliling pelaku
 Prinsip Metode Isolasi Mikroorganisme
Cawan tuang
Cawan gores

Mengencerkan mikroorganisme shg individu spesies

dpt dipisahkan dari lainnya dg anggapan bahwa setiap
koloni terpisah yg tampak pd cawan petri setelah inkubasi
berasal dari satu sel tunggal
 Metode Cawan Gores
o Inokulasi mo dg cara goresan
o Medium agar (NA)
o Keuntungan  hemat bahan & waktu
o Kelemahan  perlu keterampilan yg tinggi
o Kesalahan umum  (1) tdk memanfaatkan
medium sec optimal shg pengenceran tdk
lanjut, (2) sering inokulum terlalu banyak shg
sel-sel tdk terpisahkan
 Prosedur Metode Cawan Gores
o Buat kuadran pd cawan petri berisi NA
o Menggores secara kuadran
o Inkubasi
o Pindahkan satu jenis koloni ke agar miring
o Inkubasi
o Biakan murni

 Metode Cawan Tuang
o Inokulasi mo dg cara penuangan sampel
o Sampel diencerkan beberapa tahap dlm
medium NA 50oC
o Keuntungan  tdk perlu keterampilan
tinggi
o Kelemahan  boros bahan & waktu
 Prosedur Metode Cawan Tuang
o Encerkan beberapa tingkat sampel ke dalam
NA dengan jarum inokulasi
o Tuangkan masing-masing tingkat
pengenceran ke dalam cawan petri
o Inkubasi
o Pindahkan satu jenis koloni ke agar miring
o Inkubasi
o Biakan murni
 Metode Cawan Sebar
 Inokulasi mo dg cara meneteskan sampel di
tengah cawan petri dan disebarkan
 Pemeliharaan & Pengawetan Biakan Murni
o Koleksi biakan sediaan
o Metode yg digunakan tgt pd keperluannya
o Jangka pendek: suhu 0-10oC
o Jangka panjang: dlm nitrogen cair suhu -196oC
atau didehidrasi dlm tabung saat dibekukan
dan ditutup rapat dlm ruang hampa (liofilisasi)