Nama asisten : Ficky Rizaldy R.

Tanggal Praktikum : 15 Mei 2019

Tanggal Pengumpulan : 24 Mei 2019

PEMELIHARAAN KULTUR MIKROORGANISME DAN ANASLISIS

KUANTITATIF MIKROORGANISME PADA BAHAN PANGAN
FAKULTAS TEKNOLOGI INDUSTRI PERTANIAN
UNIVERSITAS PADJADJARAN

Nurisa Fadillah Isnaeni (240210170014)

Departemen Teknologi Industri Pangan Universitas Padjadjaran, Jatinangor

Jalan Raya Bandung-Sumedang Km. 21, Jatinangor, Sumedang 40600 Telp. (022) 7798844,
779570 Fax. (022) 7795780 Email: nurisaisnaeni@gmail.com

ABSTRAK

Kehidupan sehari-hari manusia selalu berhubungan dengan mikroorganisme baik kapang,

khamir maupun bakteri. Mikroorganisme tersebut dapat diteliti dan diketahui karakteristiknya
apabila diisolasi atau dipelihara. Terdapat beberapa cara untuk mengkultur suatu mikroorganisme,
yaitu dengan kultur cair, kultur agar tegak dan miring, kultur biakan cawan. Terdapat berbagai
macam cara untuk menghitung jumlah mikroorganisme, salah satunya Petroff Hauser. Tujuan dari
praktikum kali ini adalah mengetahui cara pemeliharaan kultur dengan cara kultur agar dan kultur
cair, serta dapat melakukan analisis kuantitatif dengan motede Petroff Hauser. Kesimpulan yang
dapat diambil dari praktikum ini adalah bakteri L. acidophilus dapat ditumbuhkan dengan metode
agar tegak, agar miring, agar cawan, dan kultur cair. Bakteri E. Coli tidak dapat tumbuh pada
media EMB dengan penambahan pala bubuk dan ketumbar bubuk. Sampel kapang/khamir dapat
tumbuh pada medium PDA yang ditambah pala bubuk dan tidak dapat tumbuh pada medium yang
ditambah ketumbar bubuk. Sampel jus jeruk dan air galon menghasilkan perhitungan TPC yang
tidak sesuai. Kandungan susu dalam sampel belum sesuai dengan standar SNI.
Kata Kunci: Analisis Kuantitatif, Mikroorganisme, Pemeliharaan Kultur, Petroff Hauser, TPC

PENDAHULUAN yaitu medium cair, medium padat, dan

Kehidupan sehari-hari manusia
selalu berhubungan dengan mikroorganisme
baik kapang, khamir maupun bakteri.
Populasi mikroorganisme yang ada di alam
sekitar kita ini sangatlah besar dan cukup
kompleks. Mikroorganisme juga terdapat
pada makanan-makanan yang dikonsumsi
manusia setiap harinya. Mikroorganisme
tersebut dapat diteliti dan diketahui
karakteristiknya apabila diisolasi atau
dipelihara. Pemeliharaan kultur
membutuhkan medium yang sesuai agar
mikroorganisme tersebut dapat tumbuh.
Terdapat beberapa cara untuk mengkultur
suatu mikroorganisme, yaitu dengan kultur
cair, kultur agar tegak dan miring, kultur
biakan cawan.
Medium adalah suatu kumpulan zat-
zat organik dan anorganik yang dibutuhkan
untuk pertumbuhan mikroba dengan syarat-
syarat tertentu. Berdasarkan wujudnya
medium dapat dibedakan menjadi 3 macam
medium semi padat. Medium kultur
merupakan suatu bahan yang terdiri dari
campuran nutrient (zat makanan pada
tingkat sel) yang digunakan untuk
menumbuhkan (kultivasi) mikroorganisme.
Medium kultur dapat dibedakan berdasarkan
atas susunan kimianya, konsistensinya,
maupun fungsinya. Supaya mikroorganisme
tumbuh dengan baik, maka medium kultur
harus mengandung semua nutrient yang
diperlukan dalam keadaan seimbang, tidak
mengandung zat-zat penghambat, dalam
keadaan steril, mempunyai tekanan osmosis
yang sesuai, dan mempunyai keasaman (pH)
yang sesuai pula.
Pertumbuhan mikroorganisme yang
membentuk koloni dapat dianggap bahwa
setiap koloni yang tumbuh berasal dari satu
sel, maka dengan menghitung jumlah koloni
dapat diketahui penyebaran bakteri yang ada
pada bahan. Jumlah mikroba pada suatu
bahan dapat dihitung dengan berbagai
 Nama asisten
Tanggal Praktikum
Tanggal Pengumpulan : 24 Mei 2019
macam cara, tergantung pada bahan dan
jenis mikrobanya.
Terdapat berbagai macam cara
untuk menghitung jumlah mikroorganisme,
akan tetapi secara mendasar, ada dua cara
yaitu secara langsung dan secara tidak
langsung. Ada beberapa cara perhitungan
secara langsung, antara lain adalah dengan
membuat preparat dari suatu bahan (preparat
sederhana diwarnai atau tidak diwarnai) dan
penggunaan ruang hitung (counting
chamber). Sedangkan perhitungan cara tidak
langsung hanya untuk mengetahui jumlah
mikroorganisme pada suatu bahan yang
masih hidup saja (viabel count). Dalam
pelaksanaannya, ada beberapa cara yaitu :
metode cawan petri (total plate count/TPC),
metode Haemocymeter (Petroff Hauser) dan
metode MPN (Most Probable Number)
(Hastowo, 2012).
Tujuan dari praktikum kali ini
adalah mengetahui cara pemeliharaan kultur
dengan cara kultur agar dan kultur cair, serta
dapat melakukan analisis kuantitatif dengan
motede Petroff Hauser.
METODOLOGI
Alat dan Bahan
Bahan yang digunakan pada
praktikm kali ini adalah EMB, Kultur L.
acido, Lactose Broth, larutan NaCL Fis,
Nutrient Agar, PCA, PDA, dan susu.
Alat-alat yang digunakan pada
praktikum kali ini adalah bunsen, cawan
petri, Haemocytometer, inkubator,
mikroskop, ose, rak tabung, dan tabung
reaksi.
Agar Miring (Kultur Padat Tanpa
Pengenceran)
Medium Nutrient Agar dimasukkan
ke dalam tabung reaksi steril sebanyak ¼
bagian. Kemudian NA dibekukan dengan
posisi dimiringkan. Biakan Lactobacillus
acido diose dengan loop steril sebanyak 1
kali. Hasil ose digoreskan di medium.
Kemudian kultur diinkubasi pada suhu 37oC
selama 2 hari, lalu diamati pertumbuhan
mikroorganismenya.
: Ficky Rizaldy R.
: 15 Mei 2019
Agar Tegak (Kultur Padat Tanpa
Pengenceran)
Medium Nutrient Agar dimasukkan
ke dalam tabung reaksi steril sebanyak ½
bagian. Kemudian NA dibekukan dengan
posisi tegak. Biakan Lactobacillus acido
diose dengan loop steril sebanyak 1 kali.
Hasil ose ditusukkan di bagian tengah
medium. Kemudian kultur diinkubasi pada
suhu 37oC selama 2 hari, lalu diamati
pertumbuhan mikroorganismenya.
Agar Cawan (Kultur Padat Tanpa
Pengenceran)
Medium Nutrient Agar dimasukkan
ke dalam petri steril dan dibekukan. Biakan
Lactobacillus acido diose dengan loop steril
sebanyak 1 kali. Hasil ose digoreskan di atas
medium. Kemudian kultur diinkubasi pada
suhu 37oC selama 2 hari, lalu diamati
pertumbuhan mikroorganismenya.
Agar Tuang (Kultur Padat dengan
Pengenceran)
Sebanyak 1mL/1 gr sampel
diencerkan dengan NaCl Fis hingga
pengenceran 10-4. Hasil pengenceran 10-3
dan 10-4 dituangkan ke dalam cawan petri
sebanyak 1 mL. Kemudian medium PCA
dituangkan ke dalam cawan petri tersebut
dan dibekukan. Kultur diinkubasi selama 2
hari pada suhu 37oC, kemudian diamati di
mikroskop dan dilakukan perhitungan TPC.
Metode Gores (Kultur Padat dengan
Pengenceran)
Sampel pengenceran 10-1, medium
EMB, dan medium PDA dituangkan ke
dalam cawan petri lalu dibekukan. Suspense
diambil 1 ose dan digoreskan pada media
agar dengan cara langsung, radian, dan
kuadran. Kemudian kultur diinkubasi dan
diamati pertumbuhannya.
Kultur Cair
Sebanyak 20 mL Lactose Broth
dituangkan ke dalam tabung reaksi.
Kemudian kultur murni L. acido diambil
sebanyak 1 loop dan dimasukkan ke dalam
tabung reaksi. Lalu, kultur diinkubasi pada
 Nama asisten : Ficky Rizaldy R.
Tanggal Praktikum : 15 Mei 2019
Tanggal Pengumpulan : 24 Mei 2019

suhu 30-32 oC selama 2-3 hari. Terakhir, pada umumnya. Pepton dan ekstrak beef
pertumbuhan mikroorganisme diamati. menyediakan nutrien esensial untuk
memetabolisme bakteri. Laktosa
Petroff Houser (Analisis Kuantitatif) menyediakan sumber karbohidrat yang
Sebanyak 1 searing sampel susu dapat difermentasi untuk organisme
diambil dan dimasukkan ke dalam alat koliform.
Haemocytometer yang kemudian ditutup Media potato dextrose agar (PDA)
dengan cover. Kultur diamati dengan berfungsi sebagai media kapang (jamur) dan
mikroskop dan dihitung jumlahnya. Rumus khamir. Selain itu PDA digunakan untuk
perhitungan metode Petroff Hauser adalah enumerasi yeast dan kapang dalam suatu
sebagai berikut : sampel atau produk makanan. PDA
𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑏𝑎𝑘𝑡𝑒𝑟𝑖 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑘𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖 1 mengandung sumber karbohidrat dalam
= 𝑥
𝑚𝑙 5 𝑣 𝑘𝑜𝑡𝑎𝑘 jumlah cukup yaitu terdiri dari 20% ekstrak
kentang dan 2% glukosa sehingga baik
HASIL DAN PEMBAHASAN
untuk pertumbuhan kapang dan khamir
Praktikum kali ini dilakukan
tetapi kurang baik untuk pertumbuhan
pemeliharaan kultur dengan metode kultur
bakteri.
padat, kultur cair, dan perhitungan
Plate Count Agar (PCA) atau yang
kuantittatif suatu mikroorganisme. Metode
juga sering disebut dengan Standard
kultur padat yang digunakan adalah agar
Methods Agar (SMA) merupakan sebuah
tegak, agar miring, agar cawan, agar tuang,
media pertumbuhan mikroorganisme yang
agar gores. Analisis kuantitatif yang
umum digunakan untuk menghitung jumlah
digunakan adalah metode Petroff Hauser.
bakteri total (semua jenis bakteri) yang
Penggunaan metode yang berbeda
terdapat pada setiap sampel seperti
menyebabkan perbedaan medium yang
makanan, produk susu, air limbah dan
digunakan. Medium-medium yang
sampelsampel lainnya yang juga biasanya
digunakan dalam praktikum ini adalah
menggunakan metode Total Plate Count
EMB, NA, PCA, dan PDA.
(TPC). Plate Count Agar (PCA) merupakan
Media EMB (Eosin Methylene Blue)
media padat, yaitu media yang mengandung
adalah media yang digunakan untuk
agar sehingga setelah dingin media tersebut
mengetahui ada atau tidaknya bakteri
akan menjadi padat.
coliform dalam suatu sampel. Media ini
mempunyai keistimewaan mengandung
Agar Tegak dan Agar Miring
laktosa dan berfungsi untuk memisahkan
Kultur Agar Miring adalah media
bakteri yang memfermentasikan laktosa
agar pada tabung reaksi yang diletakkan
seperti E. coli, dengan bakteri yang tidak
miring pada waktu pendinginan. Agar
memfermentasikan laktosa seperti S. aureus,
miring ini merupakan salah satu cara yang
Pseudomonas dan Salmonella
mudah untuk kulturisasi mikroba, terutama
(Dwidjoseputro, 1994).
yang bersifat aerobik atau anaerobik
NA (Nutrient Agar) adalah media
fakultatif. Sedangkan kultur Agar Tegak
pertumbuhan mikrobiologi yang umumnya
adalah media agar dalam tabung reaksi yang
digunakan untuk pertumbuhan
diletakkan tegak pada waktu pendinginan,
mikroorganisme yang tidak selektif
digunakan untuk menstimulir pertumbuhan
(mikroorganisme heterotrof) seperti bakteri
mikroba dalam keadaan kekurangan oksigen
(Hadioetomo, 1993).
(anaerob).
Lactose broth digunakan sebagai
Berdasarkan pengujian, didapatkan
media untuk mendeteksi kehadiran koliform
hasil pengamatan terhadap agar tegak dan
dalam air, makanan, dan produk susu,
miring adalah sebagai berikut :
sebagai kaldu pemerkaya (pre-enrichment
broth) untuk Salmonellae dan dalam
mempelajari fermentasi laktosa oleh bakteri
 Nama asisten : Ficky Rizaldy R.
Tanggal Praktikum : 15 Mei 2019
Tanggal Pengumpulan : 24 Mei 2019

Tabel 1. Hasil Pemeliharaan Kultur Agar Tegak dan Agar Miring

Agar
Kel. Sampel Hasil Pengamatan Dokumentasi
(Miring/Tegak)

4 Lactobacillus acidophilus Miring Positif (Efus)

10 Lactobacillus acidophilus Miring Positif (efus)

5 Lactobacillus acidophilus Tegak Positif (beadad)

9 Lactobacillus acidophilus Miring Positif (efus)

6 Lactobacillus acidophilus Tegak Positif (beadad)

(Sumber : Dokumentasi Pribadi, 2019)

Berdasarkan data pada tabel 1, sesuai dengan literatur yang menyatakan
diketahui pada pertumbuhan kultur pada bahwa L. acidophilus dapat tumbuh baik
metode agar tegak dan agar miring dengan oksigen ataupun tanpa oksigen, dan
menunjukkan hasil positif. Hasil positif ini bakteri ini dapat hidup pada lingkungan
ditunjukkan dengan adanya pertumbuhan yang sangat asam (Sandine, 1979).
koloni pada media, yaitu berbentuk efus
pada agar miring dan berbentuk beaded pada Agar Cawan
agar tegak. Berbentuk effuse berarti Biakan agar cawan adalah medium
pertumbuhan koloni tipis dan menyebar, agar yang dituangkan pada cawan petri,
sedangkan pertumbuhan beaded berarti inokulasi bakteri disebarkan di medium.
pertumbuhan koloni tidak bersinambung Dengan cara ini, bentuk, warna, dan
(non-flokulan) (Irianto, 2007). pertumbuhan koloni mudah terlihat.
Data positif ini menunjukkan bahwa Berdasarkan pengujian, didapatkan hasil
bakteri Lactobacillus acidophillus pengamatan terhadap metode agar cawan
merupakan bakteri yang dapat hidup di adalah sebagai berikut :
lingkungan aerob maupun anaerob. Hal ini
Tabel 2. Hasil Pemeliharaan Kultur Agar Tegak dan Agar Miring

Kel. Sampel
6 Lactobacillus acidophilus
5 Lactobacillus acidophilus
(Sumber : Dokumentasi Pribadi, 2019)
Berdasarkan data pada tabel 2,
pemeliharaan kultur pada medium NA
dengan cara agar cawan menghasilkan hasil
positif. Koloni yang tumbuh yaitu berbentuk
spreader atau pertubuhannya menyebar
sampai melebihi seperempat cawan. Hasil
positif pada agar cawan ini menunjukkan
bahwa L. acidophilus merupakan
mikroorganisme dari golongan bakteri
karena mikroorganisme ini dapat tumbuh di
medium NA yang mana merupakan medium
pertumbuhan untuk bakteri.
Metode Gores
Prinsip metode gores yaitu
mendapatkan koloni yang benar-benar
Tabel 3. Hasil Pemeliharaan Kultur Metode Gores
Media EMB
Kel. Sampel
E.Coli (+/-)
3 Pala Bubuk -
8 Ketumbar bubuk - -
(Sumber : Dokumentasi Pribadi, 2019)
Berdasarkan data pada tabel 3, bakteri
E. Coli menghasilkan negative saat
ditumbuhkan di medium EMB yang
ditambahkan pala bubuk dan ketumbar
bubuk. Seharusnya E. Coli dapat tumbuh
pada medium EMB karena medium ini
merupakan medium tumbuh bakteri
koliform, dan E. Coli merupakan salah satu
Nama asisten : Ficky Rizaldy R.
Tanggal Praktikum : 15 Mei 2019
Tanggal Pengumpulan : 24 Mei 2019
Jumlah
Hasil Pengamatan Dokumentasi
koloni
Positif (spreader) 4 koloni
Positif (spreader) 61 koloni
terpisah dari koloni yang lain, sehingga
mempermudah proses isolasi. Media EMB
atau PDA dimasukkan ke dalam cawan petri
dan tunggu hingga membentuk agar.
Masukkan ose tegak ke dalam tabung reaksi
berisi kultur lalu digoreskan ke atas medium
yang sudah beku. Cara gores dapat
dilakukan dengan 3 cara, yaitu cara
langsung, atau dengan menggoreskan
langsung ose pada permukaan agar dalam
cawan petri membentuk zig-zag.
Berdasarkan pengujian, didapatkan
hasil pengamatan terhadap metode gores
adalah sebagai berikut :
Media PDA
Gambar Jumlah koloni Gambar
Spreader 100% 1
koloni
jenis koliform. Hal ini menunjukkan bahwa
pala bubuk dan ketumbar bubuk dapat
menghambat atau mematikan pertumbuhan
bakteri koliform. Menurut Mardisiswojo
(1985), tanaman pala memiliki kandungan
senyawa flavonoid yang memiliki efek
penghambat terhadap pertumbuhan bakteri
E. Coli.
 Nama asisten : Ficky Rizaldy R.
Tanggal Praktikum : 15 Mei 2019
Tanggal Pengumpulan : 24 Mei 2019

Koloni yang ditumbuhkan pada media
PDA menunjukkan hasil positif pada
penambahan pala bubuk dan menunjukkan
hasil negative pada penambahan ketumbar
bubuk. Hal tersebut dikarenakan flavonoid
pada pala hanya berlaku sebagai antibakteri,
sedagkan kultur yang ditumbuhkan pada
medium PDA adalah jenis kapang/khamir.
Medium EMB dan PDA yang
ditambahkan ketumbar bubuk tidak dapat
menumbuhkan bakteri dan kapang/khamir.
Hal tersebut sesuai dengan literatur yang
menyatakan bahwa minyak atsiri ketumbar
berperan sebagai antibakteri dan antijamur
dengan cara mengganggu proses
terbentuknya membran atau dinding sel
sehingga tidak terbentuk atau terbentuk
tidak sempurna (Fadlilah M, 2015).
Agar Tuang
Metode tuang (Pour plate) adalah
suatu teknik dalam menumbuhkan
mikroorganisme dalam media agar dengan
cara mencampurkan media agar cair dengan
stok kultur. Teknik ini umumnya digunakan
pada metode Total Plate Count (TPC).
Kelebihan teknik ini adalah mikroorganisme
Tabel 4. Hasil Pemeliharaan Kultur Metode Agar Tuang
yang tumbuh dapat tersebar merata pada
media agar.
Media yang digunakan pada metode
tuang adalah NA. Nutrient agar adalah
media pertumbuhan mikrobiologi yang
umumnya digunakan untuk pertumbuhan
mikroorganisme yang tidak selektif
(mikroorganisme heterotrof) seperti bakteri.
Inkubasi dilakukan untuk memberikan
suasana yang memungkinkan (optimal)
untuk pertumbuhan bakteri dan kapang
hingga terbentuk koloni. Inkubasi
dilakukan pada suhu 30 °C karena suhu
tersebut merupakan suhu optimum
pertumbuhan bateri. Untuk pertumbuhan
bakteri, waktu inkubasi yang digunakan
adalah 48 jam atau 2 hari. Saat inkubasi,
cawan diletakkan dalam posisi terbalik
berfungsi untuk mencegah kondensasi
(menetesnya air dari tutup cawan) dari
bawah ke atas permukaan agar yang
dapat memfasilitasi pergerakan organisme
antara koloni (Waluyo, 2004).
Berdasarkan pengujian, didapatkan
hasil pengamatan terhadap metode gores
adalah sebagai berikut :

Gram Jumlah TPC

Kel. Sampel Pengenceran Dokumentasi
(+/-) Koloni (CFU/mL)

1 koloni
(spreader 1 x 103
10-3 100%)
1 koloni 13 13 x 103
2 Jus Jeruk
1 koloni
(spreader 1 x 104
10-4 100%)
1 koloni 5 5 x 104

Spreader
Air TBUD
100%
-3
1 Galon Isi 10
Ulang
1 koloni 13 13 x 103
 Nama asisten : Ficky Rizaldy R.
Tanggal Praktikum : 15 Mei 2019
Tanggal Pengumpulan : 24 Mei 2019

Gram Jumlah TPC

Kel. Sampel Pengenceran Dokumentasi
(+/-) Koloni (CFU/mL)

Spreader
TBUD
-4
100%
10
1 koloni 9 9 x 104

7
Spreader
TBUD
100%
10-3
Air Spreader
TBUD
galon isi 80%
ulang

Spreader
10-4 TBUD
100%

(Sumber : Dokumentasi Pribadi, 2019) semakin tinggi pengenceran, maka semakin

Berdasarkan data pada tabel 4, jus
jeruk dengan koloni terbanyak dihasilkan
oleh pengenceran 10-4 (pengenceran
tertinggi) sebesar 5 x 104. Hal ini tidak sesuai
dengan literatur yang menyatakan bahwa
semakin tinggi pengenceran, maka semakin
sedikit koloni yang tumbuh (Dwidjoseputro,
1994). Ketidaksesuaian tersebut diduga
dikarenakan terdapat kontaminasi dari
lingkungan terhadap kultur yang diisolasi.
Sampel air galon menghasilkan
jumlah koloni yang berbeda-beda. Air gallon
yang diuji oleh kelompok 7 menghasilkan
hasil akhir TBUD (Terlalu Banyak untuk
Dihitung). Hal tersebut diduga dikarenakan
air galon yang diuji sudah tercemar oleh
lingkungan sehingga koloni yang tumbuh
terlalu banyak. Sampel air galon yang diuji
kelompok 1 menghasilkan koloni terbanyak
pada pengencerannya yang tertinggi (10-4)
yaitu sebesar 9 x 104 . Hal ini tidak sesuai
dengan literatur yang menyatakan bahwa
Tabel 5. Hasil Pemeliharaan Kultur Cair
sedikit koloni yang tumbuh (Dwidjoseputro,
1994). Ketidaksesuaian tersebut diduga
dikarenakan terdapat kontaminasi dari
lingkungan terhadap kultur yang diisolasi.
Kultur Cair
Kultur cair adalah biakan mikroba
yang ditumbuhkan di medium cair dalam
tabung reaksi, dengan suhu dan waktu
inkubasi tertentu tergantung pada jenis
mikroba yang ditumbuhkan. Dalam medium
cair mikroba dapat dilihat dengan berbagai
bentuk , contohnya : terlihat kekeruhan pada
seluruh bagian medium, pertumbuhan pada
permukaan dapat berbentuk selaput atau
sekumpulan sel yang mengapung
dipermukaan media dan endapan pada
bagian bawah media cair.
Berdasarkan praktikum, didapatkan
hasil pemeliharaan kultur cair sebagai
berikut :
 Nama asisten
Tanggal Praktikum
Tanggal Pengumpulan : 24 Mei 2019
Kelp. Sampel
4 Lactobacillus acidophilus
10 Lactobacillus acidophilus
9 Lactobacillus acidophilus
(Sumber : Dokumentasi Pribadi, 2019)
Berdasarkan data hasil pengamatan,
bakteri L. acidophilus yang ditumbuhkan
dalam kultur cair media Lactose Broth
menunjukkan hasil positif. Hasil positif
disebabkan karena L. acidophilus
merupakan bakteri homofermentatif yaitu
bakteri yang memproduksi asam laktat
sebagai satu-satunya produk akhir (Butrris,
1997). Apabila oksigen tidak tersedia,
organisme ini dapat memproduksi asam
laktat dan alkohol atau yang dikenal dengan
nama fermentasi. Laktosa dari medium
Lactose Broth menjadi asupan nutrisi bagi
bakteri ini. Hasil positif dibuktikan dengan
adanya padatan-padatam koloni. Terdapat
padatan yang berbentuk pelikel yaitu tebal,
pertumbuhan yang membentuk blok di
permukaan medium. Terdapat pula bentuk
endapan (sedimen) yaitu pertumbuhan
terkonsentrasi pada bagian bawah kultur
broth, bisa bergranular, serpihan atau
flocculant.
Analisis Kuantitatif (Petroff Hauser)
Penghitungan secara langsung dapat
dilakukan secara mikroskopis yaitu dengan
menghitung jumlah bakteri dalam satuan isi
yang sangat kecil. Alat yang bisa digunakan
adalah Petroff-Hauser Chamber. Jumlah
cairan yang terdapat antara cover glass dan
alat ini mempunyai volume tertentu
: Ficky Rizaldy R.
: 15 Mei 2019
Hasil Pengamatan Dokumentasi
Positif (Pelikel)
Positif (endapan)
Positif (endapan)
sehingga satuan isi yang terdapat dalam satu
bujur sangkar juga tertentu.
Ruang hitung terdiri dari 9 kotak
besar dengan luas 1 mm2. Satu kotak besar
dibagi menjadi 25 kotak sedang dengan
panjang 0,2 mm. satu kotak sedang dibagi
lagi menjadi 16 kotak kecil. Tebal dari ruang
hitung ini adalah 0,1 mm. Tinggi contoh
yang terletak antara gelas objek dengan
gelas penutup adalah 0,02 mm (Fardiaz,
1992). Sel bakteri yang tersuspensi akan
memenuhi volume ruang hitung tersebut
sehingga jumlah bakteri per satuan volume
dapat diketahui.
Sampel yang digunakan untuk uji
kuantitatif ini adalah susu segar. usu adalah
cairan bergizi berwarna putih yang
dihasilkan oleh kelenjar susu mamalia
betina. Pada saat susu keluar setelah diperah,
susu merupakan suatu bahan yang murni,
higienis, bernilai gizi tinggi, mengandung
sedikit kuman atau boleh dikatakan susu
masih steril.
Sayangnya, kandungan gizi yang
tinggi tidak hanya menarik bagi manusia.
Jika dibiarkan untuk waktu yang lama,
nutrisi yang ada di dalam susu
memungkinkan mikroorganisme untuk
tumbuh sehingga menyebabkan susu tidak
layak untuk konsumsi manusia. Hasil
pengamatan analisis kuantitatif
 Nama asisten : Ficky Rizaldy R.
Tanggal Praktikum : 15 Mei 2019
Tanggal Pengumpulan : 24 Mei 2019

mikroorganisme metode Petroff-Hauser dapat diperoleh informasi ukuran dan

sebagai berikut : morfologi mikroorganisme.
Tabel 6. Hasil Analisis Kuantitatif Petroff
Hauser KESIMPULAN
Kel Jumlah m.o (cfu/mL) Kesimpulan yang dapat diambil dari
1 1,6 x 106 praktikum ini adalah bakteri L. acidophilus
2 1,6 x 106 dapat ditumbuhkan dengan metode agar
3 3,75 x 106 tegak, agar miring, agar cawan, dan kultur
4 4,65 x 106 cair. Bakteri E. Coli tidak dapat tumbuh
5 30,6 x 106 pada media EMB dengan penambahan pala
6 16,5 x 106 bubuk dan ketumbar bubuk. Sampel
7 6,5 x 106 kapang/khamir dapat tumbuh pada medium
PDA yang ditambah pala bubuk dan tidak
8 7,8 x 106
dapat tumbuh pada medium yang ditambah
9 7,1 x 10^6
ketumbar bubuk. Sampel jus jeruk dan air
10 5,05 x 10^6 galon menghasilkan perhitungan TPC yang
(Sumber : Dokumentasi Pribadi, 2019) tidak sesuai. Kandungan susu dalam sampel
Contoh perhitungan dari metode belum sesuai dengan standar SNI.
Petroff Hauser ini dari kelompok 10 adalah :
𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑏𝑎𝑘𝑡𝑒𝑟𝑖 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑘𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖 1
𝑚𝑙
= 5
𝑥 𝑣 𝑘𝑜𝑡𝑎𝑘 DAFTAR PUSTAKA
𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑏𝑎𝑘𝑡𝑒𝑟𝑖 12+17+17+27+28 1 Badan Standarisasi Nasional. 1997. Air Susu
𝑚𝑙
= 5
𝑥 4 𝑥 106
Segar. SNI 01-3141-1997, Jakarta.
𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑏𝑎𝑘𝑡𝑒𝑟𝑖 101 1
𝑚𝑙
= 5
𝑥 4 𝑥 106
𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑏𝑎𝑘𝑡𝑒𝑟𝑖 1 Buttris, J. 1997. Nutritional properties of
= 20,2 𝑥 4 𝑥 106
𝑚𝑙 fermented milk products. International
𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑏𝑎𝑘𝑡𝑒𝑟𝑖 6
= 5,05 𝑥 10 Journal of Dairy Technology 50(1):21-
𝑚𝑙
Hasil analisis kuantitatif 27
perhitungan mikroorganisme metode
Petroff-Hauser pada sampel susu segar Dwidjoseputro ,D. 1994. Mikrobiologi
didapatkan bahwa mikroorganisme terkecil Dasar. Jembatan, Jakarta.
yang terkandung dalam susu segar adalah
sebesar 1,6 x 106 jumlah bakteri/mL dan Fadhilah, M. 2015. Benefit of Red Betel
yang terbesar adalah 30,6 x 106. Menurut (Piper crocatum ruiz & Pav.) as
Badan Standar Nasional dalam SNI 01- Antibiotics. Jurnal Kedokteran Vol. 4
3141-1997, syarat kualitas air susu segar No. 3. Universitas Lampung,
memiliki batas maksimum mikroba 3,0 × Lampung.
106 koloni/ml). Hal ini menunjukkan bahwa
kandungan mikroorganisme yang terdapat Fardiaz, S. 1992. Mikrobiologi Pangan 1. PT
dalam sampel sesuai dengan standar untuk Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
koloni terendah dan melebihi batas
maksimum cemaran yang ditentukan untuk Hastowo. 2012. Perhitungan Mikroba.
koloni tertinggi. Faktor yang bisa Universitas Pasundan, Bandung.
menyebabkan melebihi batas adalah
kontaminasi dari luar karena penyimpanan Hadioetomo, R.S. 1993. Mikrobiologi Dasar
susu yang terlalu lama. dalam Praktek. Gramedia, Jakarta.
Pengujian kuantitatif ini
menggunakan metode Petroff Hauser karena Irianto, Koes. 2007. Mikrobiologi Menguak
memiliki kelebihan di antara metode yang Dunia Organisme Jilid 1. CV. Yrama
lain (TPC dan MPN). Menurut Fardiaz Widya, Bandung.
(1992), hitungan dengan metode Petroff
Hauser terbilang cepat, mudah, murah, serta
 Nama asisten : Ficky Rizaldy R.
Tanggal Praktikum : 15 Mei 2019
Tanggal Pengumpulan : 24 Mei 2019

Mardisiswojo, S. 1985. Cabe Payung

Warisan Nenek Moyang. Balai Waluyo, L. 2004. Mikrobiologi Umum.cet.
Pustaka, Jakarta. kedua. UMM Press, Malang.

Sandine WE. 1979. Roles of Lactobacillus in

the Intestinal Tract. J Food Protection
42(3):259-62
Nama asisten : Ficky Rizaldy R.
Tanggal Praktikum : 15 Mei 2019
Tanggal Pengumpulan : 24 Mei 2019