MAKALAH TRANSFUSI DARAH

TEKNIK UNTUK MENGIDENTIFIKASI ANTIBODI

GOLONGAN DARAH
Dosen pengampu : dr Aditya,M,M.Biomed

Disusun oleh kelompok 5 :

1. Muhammad Lutfi
2. Eli Kustinawati
3. Ema Laraswati
4. Jeni Cahya Ningtias
5. Rima Afriana

POLTEKKES KEMENKES TANJUNG KARANG

JURUSAN ANALIS KESEHATAN DIV
2019
 KATA PENGANTAR

Puji syukur kami haturkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa karena dengan rahmat,
karunia, serta taufik dan hidayah-Nya kami dapat menyelesaikan makalah Transfusi Darah
ini dengan baik, meskipun banyak kekurangan didalamnya. Dan juga kami berterima kasih
kepada dr Aditya,M,M.Biomed Dosen mata kuliah Transfusi Darah yang telah memberikan
tugas ini kepada kami.

Kami sangat berharap makalah ini dapat berguna dalam rangka menambah wawasan
serta pengetahuan kita. Kami juga menyadari sepenuhnya bahwa didalam pembuatan
makalah ini terdapat banyak kekurangan dan jauh dari kata sempurna. Oleh sebab itu, kami
berharap adanya kritik, saran dan usulan demi perbaikan makalah yang telah kami buat.

Semoga makalah ini dapat dipahami bagi siapapun yang membacanya. Sekiranya
makalah yang telah disusun ini dapat berguna bagi kami sendiri maupun orang yang
membacanya. Kami mohon maaf apabila terdapat kesalahan kata-kata yang kurang berkenan
dan kami memohon kritik dan saran yang membangun dari pembaca demi perbaikan
makalah ini di waktu yang akan datang.

Bandar Lampung, 03 September 2019

i
 DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR

DAFTAR ISI

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar belakang ..................................................................................................... 1

1.2 Tujuan Penulisan ................................................................................................. 3

1.3 Rumusan masalah ............................................................................................... 3

BAB II PEMBAHASAN

2.1 Teknik untuk mengidentifikasi antibodi golongan darah……………………….4

2.2 Uji Aglutinasi ...................................................................................................... 4

2.3 Uji Antiglobulin .................................................................................................. 7

2.4 Uji antiglobulin fase padat Uji antiglobulin fase padat .......................................... 10

2.5 Persiapan Reagen ................................................................................................. 15

2.6 Standar kualitas untuk reagen golongan darah .................................................... 17

2.7 Kontrol kualitas imunohaematologi. .................................................................... 22

BAB III PENUTUP

3.1 Kesimpulan ......................................................................................................... 27

ii
 BAB 1

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Pendahuluan ini membahas teknik untuk mengidentifikasi antigen dan antibodi

eritrosit. Teknik-teknik ini diperlukan untuk, antara lain, menentukan kompatibilitas antara
penerima dan donor. Prinsip umum akan dibahas secara terperinci, informasi dasar untuk
peserta yang tidak terlibat dalam pekerjaan laboratorium setiap hari. sehingga menawarkan
cukup informasi dasar untuk peserta yang tidak terlibat dalam pekerjaan laboratorium setiap
hari.
Identifikasi interaksi antigen-antibodi secara in vitro. secara singkat dapat diketahui
prinsip-prinsip dasar teknik di atas. Aglutinasi Pada permukaan sel darah mengandung
antigen. Antigen terdiri dari beberapa epitop atau antigen determinan. Antigen adalah zat
yang dapat menginduksi produksi antibodi pada vertebrata. Antibodi spesifik akan melekat
pada antigen determinan yang sesuai dan akan membentuk jembatan antara sel-sel darah,
sehingga menyebabkan proses pembeku (aglutinasi). Secara khusus prinsip dasar ini,
digunakan untuk identifikasi antibodi terhadap eritrosit. Seringkali diperlukan sarana
tambahan untuk membentuk aglutinasi.
Uji Aglutinasi seperti yang telah ditunjukkan, teknik tabung dan kolom adalah metode
yang paling sering digunakan untuk mengidentifikasi antibodi terhadap eritrosit, berdasarkan
teknik aglutinasi. Dengan cara koagulasi dapat terlihat jika eritrosit dimuat dengan antibodi
(peka). Ketika sel darah merah menggumpal dalam teknik aglutinasi, itu berarti bahwa
antibodi terikat dengan eritrosit. Aglutinasi terbentuk langsung jika eritrosit di masukan
dengan antibodi lengkap (IgM). Namun, jika eritrosit peka dengan antibodi tidak lengkap
(IgG), maka aglutinasi hanya akan terjadi setelah menambahkan zat lain, sehingga
mengidentifikasi antibodi IgG terhadap antigen golongan darah adalah metode indirect.
Uji antiglobulin fase padat

Contoh dari teknik ini adalah penangkapan oleh immucor. Dengan teknik fase
penangkapan-R solid IAT dilakukan lempeng mikro yang dilapisi sebelumnya dengan
eritrosit. Setelah inkubasi dengan serum yang telah diuji, lempengan mikro dicuci.sel
indikator khusus (eritrosit yang telah peka terhadap igG) ditambah dan kemudian dicampur

1
dengan apa yang disebut dosis anti-igG sub aglutinasi.masih ada cukup anti igG “tersedia”
pada membarran sel indikator untuk bereaksi denngan igG, hadir pada eritrosit yang terikat
plate mikro disentrifugasi dan pola reaksi dapat dibaca.

Standar kualitas untuk grup darah Kedepan pada tahun 2000 the neteriands tidak
memiliki prosedur penerimaan resmi untuk para produsen dan distributoruntuk ‘di vitro
diagnosis, dan sehingga bukan untuk reagen untuk tes grup darah. Seperti: prosedur
penerimaan sudah ada di negara-negar eropa lainya. Goongan darah reagen dan ce marl,
Sebagaimana olreody menyatakan adanya persemaian hukum baru untuk produksi dan
distribusi dalam vitro diagnisis (IVD) telah menjadi efektif pada desember 2003. Diktori IVD
telah diimplementasikan untuk menjamin fungsi yang tepat dari pasar internal untuk
pergerakan yang bebas dari barang, orang, saya layanan dan coppin dalam bidang EC, dan
untuk menjamin para pasien, penggunaan dan partiles o tingkat tinggi untuk perlindungan
kesehatan. Reagen golongan darah poliklonal plasma untuk produksi reagen ABO poliklonal
berasal dari donor yang diimunisasi (disuntik dengan zat A dan / atau B). imunisasi
memberikan peningkatan aviditas dan titer antibodi. Pereaksi terdiri dari kumpulan plasma
lebih dari 4 donor dalam volume batch 20-50 liter. Konsentrasi salin yang tinggi (hingga
1,8%) digunakan untuk meningkatkan aviditas. Zat pewarna ditambahkan sesuai dengan
perjanjian internasional (anti-A: biru, anti-B: kuning). Terlepas dari reagen ABO, antibodi D,
C, c, E, e, dan CDE disiapkan dengan cara yang sama. Namun pada umumnya, lebih sedikit
donor yang digunakan untuk menyusun kumpulan untuk reagen ini.

2
1.2 Rumusan masalah
Rumusan masalah yang akan dibahas pada makalah ini, adalah sebagai berikut:
1. Apa yang dimaksud antibody golongan darah ?
2. Apa yang dimaksud dengan uji aglutinasi ?
3. Apa yang dimaksud dengan uji antiglobulin?
4. Apa yang dimaksud uji antiglobulin fase padat?
5. Apa yang dimaksud dengan persiapan reagen?
6. Apa yang dimaksud dengan standar kualitas untuk reagen golongan darah ?
7. Apa yang dimaksud dengan control kualitas imunohematologi ?

1.3 Tujuan Penulisan

Berdasarkan dengan rumusan masalah diatas maka tujuan dari penyunan makalah ini
adalah:
1. Mengetahui antibody golongan darah
2. Mengetahui uji aglutinasi
3. Mengetahui uji antiglobulin
4. Mengetahui uji antiglobulin fase padat
5. Mengetahui persiapan reagen
6. Mengetahui standar kualitas untuk reagen golongan darah
7. Mengetahui control kualitas imunohematologi

3
 BAB II

PEMBAHASAN

2.1 Teknik untuk mengidentifikasi antibodi golongan darah.

Metode yang paling sering digunakan untuk serologi eritrosit, teknik aglutinasi, teknik
solid phase dan teknik colum paling sering digunakan. Sedangkan RIA, ELISA dan IF
digunakan secara khusus untuk identifikasi leukosit dan antigen dan antibodi trombosit.

2.2 Uji aglutinasi

Seperti yang telah ditunjukkan, teknik tabung dan kolom adalah metode yang paling
sering digunakan untuk mengidentifikasi antibodi terhadap eritrosit, berdasarkan teknik
aglutinasi. Dengan cara koagulasi dapat terlihat jika eritrosit dimuat dengan antibodi
(peka). Ketika sel darah merah menggumpal dalam teknik aglutinasi, itu berarti bahwa
antibodi terikat dengan eritrosit. Aglutinasi terbentuk langsung jika eritrosit di masukan
dengan antibodi lengkap (IgM). Namun, jika eritrosit peka dengan antibodi tidak lengkap
(IgG), maka aglutinasi hanya akan terjadi setelah menambahkan zat lain, sehingga
mengidentifikasi antibodi IgG terhadap antigen golongan darah adalah metode indirect.
Fakta bahwa aglutinasi eritrosit tidak selalu terjadi segera karena ada jarak tertentu
antara eritrosit. Banyaknya protein yang ada pada membran sel menyebabkan muatan
negatif dan dalam larutan encer (seperti salin) lapisan air ion bermuatan positif (kation)
terbentuk di sekitarnya. Akibatnya, perbedaan dalam potensi antara eritrosit bermuatan
anion dan kation dalam media, yang disebut potensial-zèta, (lihat Gambar 5-111). Muatan
yang sama menyebabkan eritrosit saling menolak dan menjaga jarak (sekitar 16 nm) satu
sama lain. Jarak ini dapat dijembatani oleh antibodi IgM, tetapi tidak oleh mayoritas
antibodi IgG. Oleh karena itu, sarana tambahan diperlukan untuk mengidentifikasi
antibodi IgG yang terikat pada eritrosit melalui aglutinasi.

4
Gambar 5-111 Representasi skematis dari potensi zèta
Erythrocytes bermuatan negatif menarik kation, menghasilkan pembentukan awan
bermuatan positif di sekitar membran, menyebabkan perbedaan potensial. Karena perbedaan
potensial (muatan) ini, eritrosit saling menolak. Akibatnya eritrosit tidak bisa mendekati 16
nm. Lengkap antibodi (IgM) memiliki diameter 30 nm dan karena bagian Fab mereka
terpisah jauh, mereka mampu menjembatani jarak antara eritrosit. Hanya antibodi ini yang
dapat menyebabkan aglutinasi langsung karenanya, disebut aglutinin. Agglutinin atau
antibodi lengkap mampu menggumpalkan eritrosit dalam sebagian besar keadaan, bahkan
dalam larutan garam (lihat gambar 5-IV)

5
Gambar 5-IV Representasi skematik dari aglutinasi langsung. Antibodi lengkap (lgM)
memiliki diameter 30 nm dan karena fragmen Fab mereka berjauhan, mereka mampu
menjauhkan jarak antara eritrosit.
Antibodi tidak lengkap yang lebih kecil (IgG) membuat sensitif terhadap eritrosit,
tetapi tidak mampu menjembatani jarak antara eritrosit dalam larutan encer (PBS). Jarak
antara dua bagian Fab dari satu molekul IgG terlalu kecil (16 nm) untuk dilampirkan pada
dua eritrosit (lihat gambar 5-IV). Oleh karena itu, alat bantu diperlukan untuk
mengidentifikasi antibodi ini secara in vitro. Ada dua cara eritrosit yang telah disensitisasi
dengan antibodi yang tidak lengkap (IgG) dapat diaglutinasi. Kedua pendekatan ini juga
dapat digabungkan.
Metode 1: Mengurangi water jacket dengan menambahkan LISS atau albumin atau dengan
mempengaruhi potensi zèta dengan menambahkan enzim. Kedua metode mengurangi jarak
antara eritrosit.
Metode 2: Dengan menghubungkan antibodi pada eritrosit peka oleh antibodi terhadap
antibodi IgG manusia. Sebuah jembatan terbentuk antara antibodi IgG pada eritrosit yang
berbeda (tes antiglobulin). Tes antiglobulin akan dijelaskan kemudian.
Metode 3: Mengurangi potensi zèta dengan menambahkan polikasi bermuatan positif seperti
polbrena. Agregasi eritrosit terjadi (jarak antara eritrosit menurun) sehingga antibodi IgG
dapat menjembatani jarak.
Ada beberapa pengecualian pada aturan bahwa antibodi IgG tidak dapat menyebabkan
aglutinasi langsung dari eritrosit dalam salin. Antibodi IgG terhadap golongan darah A dan B
dapat menyebabkan aglutinasi dalam larutan garam. Hal ini disebabkan oleh Antigen dari
sistem ABO terletak pada glikoprotein yang menonjol di luar membran sel: jarak antara
antigen A (atau antigen B) pada dua eritrosit berbeda lebih pendek daripada jarak antara
membran sel-sel ini. Jumlah antigen A (atau antigen B) pada membran eritrosit sangat besar.
Ketika sejumlah besar molekul antibodi IgG difiksasi pada membran, aglutinasi dapat terjadi
dalam salin.
Aspek dan bantuan yang merangsang aglutinasi.
Fiksasi antibodi terhadap eritrosit (sensitisasi) atau reaksi pengikatan antigen-
antibodi adalah reaksi yang dapat dibalik. Jumlah antibodi yang mengikat tergantung pada
konstanta kesetimbangan antibodi atau antigen.

6
Gambar 5-V Le Chateller-Van 't Hoff Principle
Pendekatan fisik antara antigen dan antibodi yang sesuai pada dasarnya adalah proses
pasangan tidak sengaja dua struktur kimia. Reaksi antara antibodi dan antigen dapat
direpresentasikan sesuai dengan Prinsip Le Chateller-Van 't Hoff (lihat gambar 5-V). K1 dan
K2 adalah konstanta dari reaksi asosiasi dan disosiasi, masing-masing. The quotlent dari K1
dan K2. (K1 / K2) adalah konstanta kesetimbangan (KO). K1 lebih besar dibandingkan
dengan K2, KO lebih besar dan semakin besar jumlah antibodi yang terikat pada antigen,
semakin besar hubungannya, semakin kompleks antigen antibodi atau aglutinasi. Asosiasi,
yaitu pengikatan antibodi, dapat Dipengaruhi oleh sejumlah faktor yang dapat disalin secara
in vitro.

Faktor-faktor yang dapat mempengaruhi interaksi antara antigen dan antibodi adalah:
 Rasio serum / sel (lihat kurva aglutinasi, gambar 5-VI)
 Suhu
 pH
 Waktu inkubasi
 konsentrasi lon (pengaruh potensial zèta).
 Jumlah antigen versus jumlah antibodi.
 ( Bio) struktur kimia antigen dan / atau antibodi
 Sentrifugasi.
 Penggunaan enzim (memengaruhi potensi zèta).
 Penggunaan penambah aglutinasi (memengaruhi potensial zèta)

2.3 Uji Antiglobulin

Secara umum, eritorsit tidak dapat secara langsung, tanpa zat potensial, di agllutinasi oleh
antibody IgG. Ketika eritrosit dimuat (peka) dengan antibody IgG, bias diaglutinasi oleh
antibody yang diarahkan terhadap immunoglobulin yang terikat. Aglutinasi terjadi karena

7
antibody yang terikat pada eritrosit dihubungkan oleh antibody yang diarahkan pada
immunoglobulin manusia. Antibodi ini disebut antibody globulin anti- manusia (serum) dan
sedang disebut sebgai reagen antiglobulin (AHG). Prinsip ini dikembangkan oleh Moreschi
pada tahun 1908 dan ditemukan kembali oleh Coombs pada tahun 1945, maka nama kedua
dari tes antiglobulin: Coomb uji, Tes antiglobulin tidak hanya dapat dilakukan dengan
antibody terhadap immunoglobulin tetapi juga dengan antibody terhadap faktor komplemen.
Tes antiglobulin adalah yang palin penting, metode untuk mengdentifikasi antibody yang
tidak lengkap. Sensifitas eritrosit dengan antibody IgG atau komponen pelngkap dapat
dideteksi dengan cara ini. Prinsip dasar dari tes antiglobulin adalah terwakili dalam gambar 5-
1X.

Figure 5- VI prinsip tes antiglobulin

Dua dari tes yang digunakan dalam imunohematologi: antiglobulinb test langsung dan
tes antiglobulin tidak langsung. antiglobutin langsung (DAT) yang dimaksudkan untuk
mendeteksi sensitisasi atau antibodi eritrosit pasien secara in vivo. Teknik ini digunakan
untuk studi tentang anemia hemolitik autoimun (AIHA), penyakit hemolitik Of the
newborn (HDN) dan juga untuk mendeteksi penyebab reaksi transfusi. Dalam DAT hanya
serum globulin anti-manusia ditambahkan ke eritrosit pasien, sehingga tidak ada reagen
lain, potensiator (seperti albumin atau PEG) atau media USS ditambahkan karena eritrosit
mungkin sudah peka dengan antibodi dalam tubuh. Ketika DAT positif, itu berarti

8
eritrosit pasien peka dengan antibodi dan ini dapat menunjukkan salah satu dari
kemungkinan berikut:
 autoantibodi terhadap eritrosit pasien sendiri (AIHA);
 antibodi dari ibu terhadap eritrosit anaknya yang baru lahir (HDN);
 aloantibodi terhadap eritrosit yang terbentuk setelah transfusi sebelumnya
(HTR);
 penggunaan obat-obatan;
 Setelah transplantasi.

Pertama, DAT dilakukan dengan serum globulin anti-manusia spesifik polis. yang
mengandung anti-IgG dan ant-.complement. Dalam tes tindak lanjut (dengan DAT
positif) sel-sel merah diuji secara terpisah dengan anti-IgG dan anti-komplemen. Tes
antiglobulin tidak langsung (IAT) digunakan untuk mengidentifikasi antibodi in vitro
(allo) yang terikat untuk menguji eritrosit (sel panel) (lihat gambar 5-IX). Antibodi dalam
serum atau sampel plasma ditentukan karena mereka terikat dengan eritrosit uji. IAT
digunakan untuk mendeteksi keberadaan antibodi eritrosit dalam skrining antibodi,
Crossmatch dan identifikasi antibodi. Dalam IAT serum globulin anti-manusia
ditambahkan setelah inkubasi dari tes eritrosit dengan eritrosit pasien, biasanya di
hadapan potensiator reaksi, seperti albumin. polybrene atau PEG, atau sel-sel
ditangguhkan dalam medium LISS. Ketika IAT positif, itu berarti bahwa antibodi dalam
sampel serum diarahkan terhadap antigen pada tes eritrosit (skrining dan identifikasi) atau
eritrosit donor (crossmatch).Tes antiglobulin tidak langsung terdiri dari empat fase:
1. Fase kepekaan:
Sangat penting untuk memiliki interaksi antigen-antibodi yang optimal (lihat paragraf
5.3) sebelum menggunakan pereaksi antiglobulin akhir. Faktor-faktor yang penting dalam
fase ini adalah: rasio serum dan sel, waktu inkubasi, pH, suhu inkubasi, media seperti
inkubasi. misalnya Peningkat LISS dan aglutinasi seperti albumin dan PEG.
2. Fase pencucian (juga berlaku untuk teknik tabung):
Pada fase kedua, fase pencucian, penting bahwa eritrosit yang peka dengan antibodi,
dicuci dalam larutan garam untuk menghilangkan semua imunoglobulin yang terikat
dengan nan. Bahkan ini berarti bahwa mereka akan terdilusi sedemikian rupa sehingga
tidak mengganggu reaksi. Ketika prosedur mencuci tidak dilakukan dengan benar,
imunoglobulin gratis mungkin masih ada dalam larutan. Immunoglobulin bebas ini dapat

9
 menyebabkan reaksi negatif palsu. karena merekamenetralkan pereaksi antiglobulin dan
membuatnya tidak efektif. mencuci eritrosit yang tepat adalah langkah yang sangat kritis
dan oleh karena itu, efektivitas prosedur pencucian dan / atau kemanjuran reagen
antiglobulin harus diperiksa setelah setiap tes (lihat fase keempat).
Karena konstanta kesetimbangan KO dari sebagian besar antibodi IgG lebih tinggi pada
suhu yang lebih rendah (kompleks Ab-terbaik tetap utuh pada suhu yang lebih rendah).
sensitivitas testature antiglobulin 4C. Antibodi yang lebih sedikit kemudian dihapus dari
eritrosit. dalam praktiknya ini terutama terjadi selama pencucian untuk tes antiglobulin
langsung.
3. Fase Antiglobulin:
Pada Fase ketiga, serum globulin anti-manusia ditambahkan setelah dicuci. AHG
mengandung antibodi terhadap IgG manusia. Antibodi ini mengikat molekul IgG pada
eritrosit. Ini membentuk jembatan dan eritrosit menggumpal. Kebanyakan aloantibodi
yang ditujukan terhadap eritrosit adalah antibodi IgG. Sebagian besar antibodi IgG tidak
saling mengikat. Namun, ada contoh antibodi yang hanya bisa dideteksi secara tidak
langsung dengan anti-pelengkap. Karena itu. komposisi dan kualitas reagen AHG adalah
penting.
4. Fase kontrol:
Kontrol ini harus dilakukan setelah fase ketiga. Untuk ini "eritrosit kontrol Coombs"
ditambahkan ke suspensi dalam reaksi negatif (di mana tidak terjadi aglutinasi). Mereka
adalah eritrosit yang peka dengan antibodi IgG yang harus diaglutinasi oleh anti-IgG dalam
reagen antiglobulin. Ini hanya terjadi ketika serum antiglobulin masih efektif. Hasil negatif
dalam fase antiglobulin hanya dapat diandalkan jika kontrol eritrosit Coombs diaglutinasi.

2.4 Uji antiglobulin fase padat

Contoh dari teknik ini adalah penangkapan oleh immucor. Dengan teknik fase
penangkapan-R solid IAT dilakukan lempeng mikro yang dilapisi sebelumnya dengan
eritrosit. Setelah inkubasi dengan serum yang telah diuji, lempengan mikro dicuci.sel
indikator khusus (eritrosit yang telah peka terhadap igG) ditambah dan kemudian
dicampur dengan apa yang disebut dosis anti-igG sub aglutinasi, masih ada cukup anti
igG “tersedia” pada membarran sel indikator untuk bereaksi denngan igG, hadir pada
eritrosit yang terikat plate mikro disentrifugasi dan pola reaksi dapat dibaca.reaksi positif

10
 adalah flm sel indikator dibagian bawah sumur. Sebuah reaksi yang menekan adalah titik
yang tajam dari sel-sel indikator dibagian bawah sumur.

Rangkuman dari berbagai teknik:

Pedoman transfusi darah CBO menjelaskan sensitivitas berbagai teknik sebagai berikut:

Tabel 5-I Sumber CBO

Teknik Sensitivitas
Saline-IAT in tube Paling tidak sensitif
Bovine albumin-IAT in tube Sensitif
LISS test colomn test Paling sensitif
LISS ‘solid phase’ Paling sensitif
PEG-IAT in tube Paling sensitif

Ini menunjukkan bahwa teknik saat ini (pada tahun 2007) seperti tabung IAT, aglutinasi
dengan kolom, afinitas kolom, atau fase padat, memenuhi persyaratan saat ini.

Teknik untuk mengidentifikasi antibodi eritrosit

11
Berbagai metode untuk identifikasi antibodi terhadap eritrosit telah dirangkum di bawah ini:

Tabel 5-II Rangkuman sensitifitas dari berbagai teknik

Teknik Medium Tabung/kolom/ Suhu Antibodi/ Antibodi

inkubasi microplate isotipe Against
Aglutinasi Saline Tube <20oC IgM cold H, M, N, I, i Lewis, P1
langsung
Aglutinasi Saline Tube 37 oC IgM warm ABO, S, Lutheran
langsung
Aglutinasi Albumin Tube 37 oC IgG (IgM) Rhesus
Albumin 2nd
fase
Saline IAT Saline Tube 37 oC IgG (IgM)

Albumin IAT Albumin Tube 37 oC IgG (IgM) Rhesus, Kell, Duffy,

Albumin 3rd Kidd, MNSs, Lutheran
fase
LIIS-IAT LIIS Tube kolom 37 oC IgG (IgM) Rhesus, Kell, Duffy,
aglutinasi Kidd, MNSs, Lutheran
fase-padat
microplate
PEG-IAT PEG Tube 37 oC IgG Rhesus, Kell, Duffy,
Kidd, MNSs, Lutheran
Immuno- LISS Kolom affinity 37 oC IgG (IgM) Rhesus, Kell, Duffy,
Affinity Kidd, MNSs, Lutheran
Enzym- Saline Tube 37 oC IgG (IgM) Rhesus, Kidd, Lewis
method Kolom
aglutinasi
Kolom affinity

5.9 Perkembangan di bidang otomatisasi, mekanisasi dan robotisasi

Beberapa dekade terakhir, banyak upaya telah dilakukan untuk melaksanakan ABO dan Tes
golongan darah Rhesus D dan screeninguntuk antibodi, sesuai dengan ketentuan kimia klinis

12
yang biasa.Otomatisasi tes golongan darah di bank darah, yang menangani banyak tes
golongan darah setiap hari, dikembangkan dalam tahun delapan puluhan sepanjang garis yang
sama dengan tes skrining serologis ELISA yang sudah otomatis untuk, diantaranya, HIV dan
hepatitis. Tesgolongan darah dapat dilakukan lebih efisien dengan mikroplate dan robot
pemipetan. Pada tahun delapan puluhan, analisis golongan darah yang sepenuhnya otomatis
dikembangkan. Contohnya adalah Olympus dan Kontron Groupanatic

Istilah atomasi, mekanisasi, dan robotisasi digunakan tanpa pandang bulu, dan sering
memiliki arti yang sama. Dalam kasus imunohaematologi istilah ini digunakan untuk
penggantian pelaksanaan manual baik tes golongan darah dan skrining antibodi. Otomasi
adalah istilah koordinasi atau mekanisasi dan robotisasi tes. Demi kenyamanan, kami akan
menggunakan istilah automasi.

Untuk penerapan teknik pengujian baru, keinginan orang-orang di lantai toko semakin
penting. Dalam praktiknya, kebutuhan akan penghematan waktu dengan biaya produksi yang
konstan untuk kualitas dalam pelaksanaan tes rutin adalah faktor penting. Otomatisasi tes
golongan darah, tes skrining dan crossmatch menghemat banyak waktu, yang dapat
dihabiskan untuk interpretasi nilai klinis dari seluruh rentang tes pada sampel.Otomasi dapat
menyelesaikan berbagai masalah hasil yang beragam karena evaluasi subyektif dari
pembacaan kelompok. Namun, ini tidak akan menghilangkan tugas teknisi laboratorium
tradisional. Seorang teknisi ahli akan tetap memegang kendali dan dapat menggunakan waktu
luang untuk pemeriksaan antibodi dan darah yang rumit.

Industri diagnostik mengenali perubahan yang sedang berlangsung dan merespons situasi ini
dengan cepat. Beberapa pemasok teknik kolom modern (DiaMed, Ortho, Immucor, dan
Sanquin) sudah memasok mesin seperti unit pemipaan atau sistem walk-away. Dengan itu
mereka membawa pelaksanaan teknis uji kompatibilitas lebih dekat dengan keinginan
laboratorium kimia klinis umum ,.

Terobosan, di mana reaksi aglutinasi dapat diabaikan (kecuali untuk Cellbind yang
didasarkan pada afinitas) belum tercapai. Penggantian aglutinasi dengan teknik pengukuran
yang lebih baik akan bermanfaat untuk pengembangan lebih lanjut dari analisis otomatis.
Pengembangan immunobiosensor, atau penggunaan chip golongan darah atau chip DNA,
tampaknya menjadi solusinya. Teknologi chip DNA, teknik yang sangat berkembang sejak

13
2004, membantu dalam pengetikan golongan darah skala besar (throughput tinggi).
Pengetikan beberapa antigen dalam skala besar akan menjadi terjangkau, jadi dalam beberapa

tahun basis data donor sebagian besar dapat diperpanjang dengan unit yang diketik. Pada
akhirnya ini akan menguntungkan permintaan rumah sakit untuk unit yang diketik. Sampai
saat ini belum ada pengganti DNA untuk deteksi antibodi, untuk ini masih bergantung pada
penggunaan skrining tyeped dan panel identifikasi.

Saat ini empat jenis golongan darah dan skrining dan mesin digunakan di rumah sakit. Tiga
dari jenis ini didasarkan pada deteksi aglutinate dan satu kepatuhan. Tiga dari empat mesin
menggunakan teknologi kolom.

Gambar 5- XXDari kiri ke kanan dan atas ke bawah: Autovue oleh Ortho, WA-Diana oleh
DiaMed, Magiser oleh Sanquin Reagents dan Galileo oleh immucor.

Keuntungan mekanisasi dan otomatisasi tes dan skrining golongan darah:

 keuntungan teknis untuk kesehatan dan keselamatan di tempat kerja (aktivitas yang kurang
berulang)
 meningkatkan akurasi
 identifikasi sampel positif (barcode, keterlacakan)
 kegiatan administrasi berseragam dan terdokumentasi
 tautan dua arah dengan komputer host (server) rumah sakit
 kurang padat karya (waktu langsung)

14
 2.5 Persiapan reagen
Berdasarkan estimasi keandalan, kepraktisan dan keterampilan teknisi loboratory, pilihan
antara reagen dan teknik adalah mode. Untuk menilai kualitas reagen dan / atau teknik,
penting untuk mengetahui lebih banyak tentang metode produksi dan standar kualitas

Reagen golongan darah poliklonal

Plasma untuk produksi reagen ABO poliklonal berasal dari donor yang diimunisasi (disuntik
dengan zat A dan / atau B). imunisasi memberikan peningkatan aviditas dan titer antibodi.
Pereaksi terdiri dari kumpulan plasma lebih dari 4 donor dalam volume batch 20-50 liter.
Konsentrasi salin yang tinggi (hingga 1,8%) digunakan untuk meningkatkan aviditas. Zat
pewarna ditambahkan sesuai dengan perjanjian internasional (anti-A: biru, anti-B: kuning).
Terlepas dari reagen ABO, antibodi D, C, c, E, e, dan CDE disiapkan dengan cara yang sama.
Namun pada umumnya, lebih sedikit donor yang digunakan untuk menyusun kumpulan untuk
reagen ini. Pereaksi disiapkan dalam media dengan konsentrasi protein tinggi, misalnya, 30%
BSA dengan potensiator. Menambahkan polimer dengan berat molekul tinggi, misalnya, mis.
methylselulose, PVP, Ficoll dan Dextrane, akan meningkatkan aviditas reagen

Catatan: Dengan kedatangan reagen monoklonal dan keuntungan untuk produksi dan
penggunaan, pasar Eropa tidak lagi atau hampir tidak pernah menggunakan reagen ABO dan
Rhesus poliklonal. Namun demi kelengkapan, ringkasan metode persiapan telah dimasukkan
dalam bab ini.

Sera uji poliklonal khusus

Karena tuntutan yang ditetapkan semakin tinggi, menjadi semakin sulit bagi produsen untuk
menemukan antibodi yang dapat digunakan terhadap antigen golongan darah di luar sistem
ABO dan Rhesus. Banyak produsen menggunakan donor mereka sendiri yang diimunisasi.
Namun, imunisasi aktif para donor untuk tujuan ini tidak diperbolehkan di semua negara.
Dengan mengimunisasi donor secara aktif dengan eritrosit, antibodi lain (antibodi yang
bereaksi silang) harus dikeluarkan selama produksi dengan cara adsorpsi. Sebagai aturan
tidak ada kolam dibuat, khususnya untuk menghindari masalah reaktivitas silang. Kuantitas
dan keragaman serum uji khusus tergantung pada ketersediaan bahan sumber. Misalnya, anti-
tongkol; sejak tahun 1998 hampir tidak ada donor dengan anti-Cob dalam serum. Dengan
demikian, pasokan serum anti-Cob tes terbatas dan batch sering sangat kecil.

15
Umum

Produsen menyiapkan reagen untuk digunakan dalam teknik tertentu. Ketika reagen
digunakan dalam teknik lain dari yang dimaksudkan, masalah dapat muncul. Ini bisa menjadi
masalah dengan teknik itu sendiri. Sebagai contoh, uji LISS / Polybrene tergantung pada
konsentrasi protein dari media reaksi, sehingga serum yang diencerkan dalam media protein
tidak bereaksi atau bereaksi buruk dalam tes ini.

Reagen golongan darah monoklonal

Kualitas khas dari imunoglobulin adalah kekhususan reaksi molekul ini. Antibodi hanya
dapat berikatan dengan satu penentu antigen (epitop). Respons tubuh terhadap stimulasi
antige, seperti mis. transfusi darah, adalah untuk membentuk bukan hanya satu, tetapi
kumpulan antibodi, karena antigen memiliki beberapa epitop. Dengan demikian, lebih banyak
antibodi dapat berikatan dengan antigen. Kumpulan antibodi semacam itu disebut poliklonal,
karena antibodi terdiri dari beberapa klon (sel plasma). Teknologi Hybridoma memungkinkan
produksi antibodi yang berasal dari satu sel plasma, sehingga mereka hanya dapat mengenali
satu epitop (monoklonal).

Gambar 5-XXI Produksi antibodi poliklonal dan monoklonal

Awalnya antibodi diinduksi pada tikus. Untuk produksi skala besar, instrumen canggih
digunakan yang menyalin fungsi pada tikus. Istilah "super mouse" terkadang digunakan
dalam hal ini.

Selingan

16
Dalam praktiknya, produsen memberi nama reagen monoklonal. Nama ini sering terdiri dari
perusahaan

nama dengan penambahan 'klon'. Misalnya, nama-nama berikut digunakan:

Bioclone oleh Ortho
Diaclone oleh Diamed
Pelikloon oleh Sanquin Reagents
Immuclone oleh Immucor
Seraclone oleh Biotest

Dari pereaksi ini komposisi harus dipertimbangkan; jika diarahkan terhadap satu jenis, itu
disebut monospecific. Jika diarahkan terhadap beberapa antigen, itu disebut spesifik polis. Ini
kadang-kadang bingung dengan istilah poliklonal dan monoklonal. Istilah poliklonal dan
polispesifik sering dibahas sehubungan dengan arti sebenarnya.

2.6 Standar kualitas untuk reagen golongan darah

Hingga tahun 2000 Belanda tidak memiliki prosedur penerimaan resmi untuk produsen dan
distributor untuk 'in vitro diagnosa, dan dengan demikian tidak untuk pereaksi untuk tes
golongan darah. Prosedur penerimaan seperti itu memang sudah ada di negara-negara Eropa
lainnya. Contohnya adalah penerimaan oleh otoritas yang kompeten di Jerman (Paul Ehrlich
Institute (PEI)), Prancis (AFSSAPS) dan Inggris (Health Protection Agency). Sekarang ini
telah berubah sebagai akibat dari arahan Eropa 98/79 / EG tentang "perangkat medis untuk
diagnostik in vitro" (arahan IVD) yang telah datang mulai berlaku. pada tahun 2000 arahan
ini dimasukkan ke dalam hukum Belanda dan menjadi sepenuhnya efektif pada Desember
2003 setelah masa transisi untuk produsen dan distributor kit diagnostik. Pada Desember
2003 arahan IVD berlaku di seluruh Eropa dan prosedur penerimaan nasional berlaku. Pada
tahun 2000 arahan ini sudah tidak berlaku lagi.

Reagen golongan darah dan tanda CE

Sebagaimana telah dinyatakan, ketentuan hukum baru untuk produksi dan distribusi
diagnostik in vitro (IVD) telah berlaku pada bulan Desember 2003. Arahan IVD telah

17
dilaksanakan untuk menjamin berfungsinya pasar internal untuk pergerakan bebas barang,
layanan masyarakat, dan modal dalam EEC, dan untuk menjamin pasien, pengguna dan pihak
ketiga tingkat tinggi perlindungan kesehatan. Bahkan, arahan ini berasal dari Perjanjian
Roma di mana perdagangan bebas antara negara-negara Eropa telah ditetapkan. Semua
produsen yang ingin memasarkan diagnostik in-vitro di Eropa wajib mematuhi arahan ini.
Singkatnya, diagnostik in vitro mencakup semua sistem pengukuran dan metode analisis
termasuk reagen, kalibrator, sistem pengambilan sampel bahan kontrol, dan bahan kemasan,
yang dimaksudkan untuk evaluasi keadaan fisik (patho) fisiologis, atau untuk mengikuti efek
terapi, atau untuk memperoleh informasi tentang cacat bawaan, atau untuk menguji darah
atau jaringan donor untuk menentukan keamanan dan ukuran kompatibilitas dengan calon
penerima.

Tes 'Home Brew' yang diproduksi di laboratorium tidak termasuk dalam ruang lingkup
direktif IVD. Oleh karena itu, arahan hanya berlaku untuk kit diagnostik dan reagen kontrol
yang dipasarkan.

Arahan IVD membedakan tiga tingkat penerimaan untuk diagnostik in vitro. Sistem
mengikuti tanda kesesuaian CE sebagaimana berlaku untuk sektor lain dengan arahan EEC,
seperti misalnya, peralatan listrik, mainan anak-anak, kemasan, dll. Produsen sendiri tidak
selalu dapat memutuskan apakah produk mereka memenuhi persyaratan. Arahan IVD berisi
IVDS spesifik yang dianggap diagnostik dengan risiko lebih tinggi bagi pengguna, pasien,
atau produk yang dihasilkan (mis. Produk darah dan jaringan). Untuk bagian utama dari
produk IVD, kita harus mengandalkan eksekusi yang benar dari arahan IVD dalam sistem
jaminan kualitas pabrik. Pabrikan menyusun pernyataan kesesuaian EC yang menyatakan
bahwa File Teknis telah dibuat untuk membuktikan bahwa produk tersebut memenuhi arahan
IVD terkait dengan desain, produksi, dan klaim.

Kelompok kedua dari produk IVD melibatkan diagnosa dari appendix II (Lampiran II)
daftar B dari direktif IVD (komposisi, lihat tabel 5-1I), di mana pabrikan harus membuktikan
dalam bentuk File Teknis bahwa arahan IVD dipenuhi. sehubungan dengan desain, produksi,
dan klaim produk. File ini harus disetujui oleh badan yang disebut notifikasi. Badan yang
diberi tahu adalah agen, yang disetujui oleh pemerintah untuk melakukan persetujuan ini.
Badan yang diberitahukan ditunjuk oleh negara-negara anggota EEC berdasarkan sejumlah
kriteria dan, dengan demikian, diberitahukan oleh Komisi Eropa dan negara-negara anggota
lainnya.

18
mulai berlaku. Pada tahun 2000 arahan ini dimasukkan ke dalam hukum Belanda dan menjadi
sepenuhnya efektif pada Desember 2003 setelah masa transisi untuk produsen dan distributor
kit diagnostik. Sebagai pada Desember 2003 arahan IVD berlaku di seluruh Eropa dan
pengawas penerimaan nasional tidak lagi valid.

Reagen golongan darah dan tanda CE

Sebagaimana telah dinyatakan ketentuan hukum baru untuk produksi dan distribusi diagnosa
in vitro (IVD) menjadi efektif pada bulan Desember 2003. Arahan IVD telah diterapkan
untuk menjamin berfungsinya pasar internal untuk pergerakan bebas orang-orang barang,
layanan dan modal di EEC, dan untuk menjamin pasien pasien dan bagian ketiga tingkat
tinggi perlindungan kesehatan. Bahkan, arahan ini berasal dari Perjanjian Roma Di mana
perdagangan bebas antara negara-negara Eropa telah ditetapkan. Semua produsen yang ingin
memasarkan diagnostik in-vitro di Eropa wajib mematuhi arahan ini. Singkatnya, diagnostik
in-vitro mencakup semua sistem pengukuran dan metode analisis termasuk reagen, kolibrator,
bahan kontrol, sistem pengambilan sampel, dan bahan kemasan, yang dimaksudkan untuk
evaluasi fisiologis (patho) circumstarces, atau Untuk mengikuti efek terapi, atau untuk
memperoleh informasi tentang cacat bawaan, atau untuk menguji darah donor atau jaringan
untuk menentukan keamanan dan ukuran kompatibilitas dengan calon penerima.

Tes home brew yang diproduksi di laboratorium tidak termasuk dalam ruang lingkup
instruksi IVD. Oleh karena itu, arahan hanya berlaku untuk kit diagnostik dan reagen kontrol
yang dipasarkan.

Arahan IVD membedakan tiga tingkat penerimaan untuk diagnostik in vitro. Sistem
mengikuti tanda kesesuaian CE sebagaimana berlaku untuk sektor lain dengan arahan EEC,
seperti misalnya, peralatan listrik, mainan anak-anak, kemasan, dll. Produsen sendiri tidak
selalu dapat memutuskan apakah produk mereka memenuhi persyaratan. Arahan IVD berisi
IVD spesifik yang dianggap diagnostik dengan risiko lebih tinggi bagi pengguna, pasien, atau
produk yang dihasilkan (mis. Produk darah dan jaringan). Untuk bagian utama dari produk
IVD, kita harus mengandalkan eksekusi yang benar dari arahan IVD dalam sistem jaminan
kualitas pabrik. Pabrikan menyusun pernyataan kesesuaian EC yang menyatakan bahwa File
Teknis telah dibuat untuk membuktikan bahwa produk tersebut memenuhi arahan IVD terkait
dengan desain, produksi, dan klaim.

19
Tabel 5-III Diagnostik dalam Lampiran Il Daftar B

 Reagen dan produk reaktif, termasuk kalibrasi dan bahan kontrol yang sesuai, untuk
penentuan golongan darah berikut: anti-Duffy dan anti-Kidd.
 Reagen dan produk reaktif, termasuk kalinasi yang sesuai dan bahan cobtrol untuk
penentuan antibodi anti eritrosit yang tidak teratur.
 Reagen dan produk reaktif, termasuk kalibrasi dan bahan kontrol yang sesuai, untuk
mendeteksi dan mengukur infeksi genital berikut dalam spesimen manusia: rubella,
toxoplasmosis
 Reagen dan produk reaktif, termasuk kalibrasi dan bahan kontrol yang sesuai, untuk
mendiagnosis penyakit turunan berikut: fenilketonuria.
 Reagen dan produk reaktif, termasuk kalibrasi dan bahan kontrol yang sesuai, untuk
mendeteksi infeksi manusia berikut: cytomegalovirus, chlamydia
 Reagen dan produk reaktif Termasuk kalibrasi dan bahan kontrol yang sesuai untuk
penentuan kelompok jaringan HLA berikut: DR, A, B
 Reagen dan produk reaktif, termasuk kalibrasi dan bahan kontrol yang sesuai, untuk
penentuan zat penanda tumor: PSA.
 Reagen dan produk reaktif, termasuk kalibrasi dan bahan kontrol yang sesuai dan
perangkat lunak yang secara khusus dimaksudkan untuk penentuan risiko trisomi 21
 Bantuan berikut untuk diagnosis mandiri, termasuk kalibrasi dan bahan kontrol yang
sesuai: bantuan untuk mengukur glukosa dalam darah.

Kelompok diagnostik ketiga tercantum dalam lampiran A daftar II dari arahan IVD
(komposisi, lihat tabel 5-IV). Selain menyusun File Teknis untuk persetujuan oleh badan
yang disita, investigasi tipe CE yang disebut untuk diagnostik ini dilakukan oleh badan yang
ditandai, di mana kualitas paling penting dari produk diperiksa secara independen,
berdasarkan pada ' Spesifikasi Teknis Umum '.

Tabel 5-IV Dlagnostik dalam Daftar Lampiran A

 Reagen dan produk reaktif, termasuk kalibrasi dan bahan kontrol yang sesuai, untuk
penentuan golongan darah berikut: ABO Rhesus (C, c, D, E, e) K.
 Reagen dan produk reaktif, termasuk kalibrasi dan bahan kontrol yang sesuai, untuk
deteksi, konfirmasi dan kuantifikasi kehadiran dalam spesimen manusia penanda untuk
kontaminasi dengan HIV (HIV 1 dan 2), HTLV I dan II, dan hepatitis B, C dan D.

20
Ringkasan : Pereaksi golongan darah yang ada di daftar A dan B:

Pereaksi golongan darah ABO (daftar A, rezim ketat)

Anti-C, c, D, E, e, dan anti-K (daftar A, rezim ketat)

Anti-Duffy, anti-Kidd dan semua bahan kontrol yang sesuai (daftar B)

Semua reagen yang berhubungan dengan identifikasi antibodi tidak teratur (daftar B).

Apa artinya huruf CE?

Tanda CE (CE Conformité Européene) Menunjukkan bahwa produk memenuhi persyaratan

arahan IVD. Ketika produsen telah membuktikan bahwa produk diagnostik tidak perlu
diperiksa oleh badan yang diberi tahu, bahwa produk tersebut memenuhi persyaratan arahan
IVD dan telah menyusun pernyataan kesesuaian EC, tanda CE dapat diterapkan pada
kemasan dan instruksi untuk digunakan. Label CE ini akan terlihat seperti gambar 5-XXII.

Gambar 5-XXII Tanda CE

Terkadang tanda CE diikuti oleh kode empat digit. Kode ini mengacu pada badan yang diberi
tahu yang melakukan evaluasi file dan inspeksi untuk produk-produk Annex II atau tes
mandiri. Seperti yang ditentukan dalam arahan IVD. Hanya jika badan yang diberitahu
memberi persetujuannya, tanda CE dapat diterapkan pada produk dan produk tersebut dapat
dipasarkan sebagai 'perangkat diagnostik in vitro'.

Nama produsen harus dinyatakan dengan jelas pada produk dan instruksi untuk digunakan.
Menurut arahan IVD, pabrikan adalah yang namanya atau logo produknya dipasarkan.
Pabrikan asli reagen tidak harus pabrikan yang bertanggung jawab atas tanda CE. Pabrikan
berkewajiban untuk secara ketat mengikuti kinerja produk di pasar dan melaporkan
kemungkinan insiden kepada pihak yang berwenang dan badan yang diberitahu.

2.7 Kontrol kualitas imunohaematologi

21
Terlepas dari semua tindakan yang diambil oleh produsen dan penerapan arahan IVD,
laboratorium golongan darah sendiri harus memperhatikan kontrol kualitas. Pilihan kontrol
kualitas didasarkan pada kemampuan untuk memasok kualitas yang cukup untuk bahan dan
biaya personil yang dapat diterima. Pada gilirannya, kualitas dari pilihan ini ditentukan oleh:

1. pilihan teknik dan reagen

2. keandalan prosedur yang harus diikuti

3. kemampuan teknisi laboratorium.

Sehubungan dengan ketiga faktor ini, titik awal berikut dalam laboratorium
imunohematologis layak untuk diperiksa. Jika memungkinkan, frekuensi dan metode
pemeriksaan akan ditunjukkan.

Peralatan

Mesin-mesin berikut ditemukan di laboratorium golongan darah: sentrifugal, mesin cuci sel,
inkubator, penangas air, termometer, lemari es, freezer, shaker dan robot pemipaan (Tecan,C-
10, Hamilton, dll.) Biasanya mesin-mesin tersebut secara langsung diperiksa dengan cek
mesin. Pemeriksaan reagen juga digunakan untuk memeriksa peralatan yang disebutkan di
atas secara Tidak Langsung. Jika ada kelainan yang ditemukan, ini mungkin terkait dengan
salah satu mesin.

Cek harian

Pemandian air, inkubator, lemari es, dan freezer dapat diperiksa setiap hari untuk mengetahui
suhu aktualnya. Ini perlu didaftarkan pada daftar periksa atau, lebih baik lagi, dipantau secara
permanen dengan sistem alarm.

Pemeriksaan berkala

22
Centrifugal, mesin cuci sel, dan peralatan lainnya harus diperiksa secara berkala mengikuti
jadwal perawatan. Centrifugal yang digunakan untuk tujuan serologis harus diperiksa sebulan
sekali untuk:

 jumlah rotasi per menit (RPM) atau g-force (RCF) yang benar;
 durasi centrifuge (saklar waktu);
 pencucian sentrifugal juga harus diperiksa untuk volume PBS yang ditambahkan dengan
benar;
 tabung pasokan dan pengosongan harus diperiksa dan diganti, Jika perlu.

Selain itu, evaluasi aglutinasi, dilakukan setiap hari, yang juga merupakan pemeriksaan
penting. Setiap kali ragu, periksa salah satu item yang disebutkan di atas. Setelah perbaikan
prosedur abnormal, sentrifugasi harus dikalibrasi ulang. Pentingnya centrifuge yang baik
disajikan dalam grafik di bawah ini. Selama 20 detik durasi centrifuge, semua sel akan lebih
dari yang diendapkan. Setelah 45 detik akan semakin sulit untuk mendapatkan aglutinasi dari
bawah.

Gambar 5-XXIl Pengaruh

kecepatan centrifuge pada
aglutinasi

Angka-angka dalam contoh ini fiktif. Durasi centrifuge tergantung pada kecepatan. Dalam
praktiknya akan menjadi 20 detik pada 200 g atau 1 menit pada 120 g.

Reagen

kontrol kualitas reagen melibatkan pemeriksaan harian kinerja yang tepat dari reagen
(spesifisitas dan reaktivitas) untuk penggunaan rutin. Terlepas dari pemeriksaan ekstensif
oleh pabrikan, reagen pabrikan juga secara berkala diperiksa oleh FDA atau dapat dikenali

23
dari tanda CE. terlepas dari semua pemeriksaan, kinerja dan kualitas reagen dapat
dipengaruhi oleh beberapa faktor. penyimpanan, transportasi, fluktuasi suhu utama dan
kontaminasi selama penggunaan adalah beberapa contoh. untuk laboratorium mana pun,
penting untuk memeriksa apakah reagen yang digunakan merespons seperti yang diharapkan.
kontrol reagen dapat dibagi menjadi tiga kelompok :

1. Pabrikan
2. pengguna secara internal
3. pengguna secara eksternal

Pabrikan

Reagen yang dibeli harus diperiksa sebelum digunakan pertama kali. Pemeriksaan ekstensif
seperti titrasi atau tes spesifisitas terperinci tergantung pada aplikasi. Silakan minta pemasok
untuk Protokol Rilis (laporan validasi) Setiap batch baru dapat diperiksa secara acak.

Pengguna Secara Internal

Penting untuk melakukan kontrol reagen setiap hari sebagai bagian dari kegiatan rutin
normal. Tujuannya adalah untuk memeriksa kinerja maksimum dengan cara minimal.
Antiserum ABO dan Rhesus, uji eritrosit, dan reagen anti-human globulin adalah reagen
dasar yang harus diperiksa efektivitasnya. Test eritrosit khususnya adalah produk sensitif.
Bergantung pada situasi laboratorium, perhatian dapat diberikan pada reagen berikut:

- IAT, lemah terhadap sel kontrol Coombs yang sensitif;

- DAT, selain dari eritrosit yang dilapisi lgG juga menggunakan eritrosit yang lengkap;

- Teknik enzim, dengan kontrol enzim;

- Anti-D, lemah terhadap eritrosit Rh D;

- Reagen uji khusus dengan eritrosit uji yang memiliki tanda lemah (heterozigot) untuk
antigen tertentu.

Kontrol diri juga penting! Jika besaran harus ditentukan, frekuensi dapat menjadi indikator
penting. Untuk penentuan ABO, kontrol penentuan antigen sehubungan dengan penentuan
antibodi memainkan peran penting. Berkas terdahulu harus digunakan sebagai kontrol.

Pengguna Secara Eksternal

24
Partisipasi dalam program jaminan kualitas eksternal sangat penting. Dengan
membandingkan hasil tes yang diperoleh dengan hasil tes dari laboratorium lain dapat
ditentukan jika ada kemungkinan kelainan terkait teknik atau prosedur. Di Belanda SKZL,
antara lain, melakukan kontrol kualitas eksternal dari serologi golongan darah. Baru-baru ini
Sanquin Reagents mulai dengan Pelicase Quality Survey (PQS).Ada juga kemungkinan untuk
menguji spesifisitas dan reaktivitas secara eksternal.

Bahan Tambahan

Dalam pipet tertentu, tabung reaksi dan PBS harus diperiksa sebelum digunakan. uded di
Sops? Volume penurunan pipet Pasteur adalah part Apakah mereka memenuhi spesifikasi
sebagai tes larly penting untuk kualitas

Peraturan

Peraturan harus direvisi setiap tahun. Sementara itu, aktualitas dari Sisipan pabrikan harus
diperiksa.

Personil

Personil memeriksa metode teknisi laboratorium. Ini khususnya untuk menentukan

reproduksibilitas pembacaan visual. Mesin referensi dapat menunjukkan perbedaan antara
teknisi laboratorium. Jika ada perbedaan, ini dapat diselaraskan sebanyak mungkin melalui
pelatihan internal. Pemeriksaan cepat adalah membuat seri pengenceran anti-D dan mulai dan
menilai ini dengan IAT dan dengan sel-sel D-positif. Biasanya, seri pengenceran yang
meningkat akan dibaca dengan jelas. Namun, jika pengenceran dimulai "secara membabi buta
perbedaan menjadi lebih jelas

Daftar Periksa

Seringkali lebih mudah untukmelakukan semua pemeriksaan dimaksud dengan bantuan

daftar periksa. Daftar periksa ini juga dapat mencakup prosedur untuk kabinet penyimpanan
darah dan pemantauan penyimpanan darah dan / atau reagen. Lembar catatan yang disediakan
oleh pabrik dapat berfungsi sebagai bantuan. Mereka seharusnya tidak dipertimbangkan
secara independen. Jika metode atau reagen lain digunakan, disarankan untuk membuat

25
formulir Anda sendiri. Substansi bab ini hanya membentuk sebagian kecil dari penjaminan
kualitas total. Silakan lihat arahan GMP untuk bank darah atau arahan CBO.

BAB III

PENUTUP

3.1 Kesimpulan

Metode yang paling sering digunakan untuk serologi, teknik aglutinasi, teknik solid
phase dan teknik colum paling sering digunakan. Sedangkan RIA, ELISA, dan IF digunakan

26
secara khusus untuk identifikasi leukosit dan antigen dan antibody trombosit. Seperti yang
telah ditunjukkan, teknik tabung dan kolom adalah metode yang paling sering digunakan
untuk mengidentifikasi antibodi terhadap eritrosit, berdasarkan teknik aglutinasi. Fakta
bahwa aglutinasi eritrosit tidak selalu terjadi segera karena ada jarak tertentu antara eritrosit.
Banyaknya protein yang ada pada membran sel menyebabkan muatan negatif dan dalam
larutan encer (seperti salin) lapisan air ion bermuatan positif (kation) terbentuk di sekitarnya.
Akibatnya, perbedaan dalam potensi antara eritrosit bermuatan anion dan kation dalam
media, yang disebut potensial-zèta,

Tes antiglobulin tidak langsung terdiri dari empat fase, Fase kepekaan, Fase
pencucian (juga berlaku untuk teknik tabung), Fase Antiglobulin, Fase kontrol. Uji
antiglobulin fase padat Uji antiglobulin fase padat, contoh dari teknik ini adalah
penangkapan oleh immucor. Dengan teknik fase penangkapan-R solid IAT dilakukan
lempeng mikro yang dilapisi sebelumnya dengan eritrosit. Persiapan reagen berdasarkan
estimasi keandalan, kepraktisan dan keterampilan teknisi loboratory, pilihan antara reagen
dan teknik adalah mode. Untuk menilai kualitas reagen dan / atau teknik, penting untuk
mengetahui lebih banyak tentang metode produksi dan standar kualitas. Standar kualitas
untuk reagen golongan darah, memiliki prosedur penerimaan resmi untuk produsen dan
distributor untuk 'in vitro diagnosa, dan dengan demikian tidak untuk pereaksi untuk tes
golongan darah.

27