REGULASI EKSPRESI GEN PADA MAKHLUK HIDUP PROKARIOTIK

A. Kontrol positif dan negatif regulasi ekspresi gen trp, lac, CAP-cyclic AMP.

Operon Laktosa di E. coli: Induksi dan Represi Katabolit.

Berdasarkan studi yang dilakukan oleh Jacob dan Monod, mereka mengusulkan
mengenai model operon laktosa (lac) di E.coli. Operon lac ini terdiri dari 3 operator (O1,O2, dan
O3) dan tiga gen truktural (lacZ, lacY, dan lacA). Operan lac tersebut juga menyandikan enzim ß-
galactosidase, ß-galactoside permease, dan ß-galactoside transacetylase. Enzim ß-galaktosida
berfungsi untuk menyerap dan memompa laktosa ke dalam sel, kemudian enzim ß-galaktosidase
menguraikannya menjadi glukosa dan galaktosa.

Gambar 1. Operon lac pada E.coli (Sunstad, 2012).

Induksi
Operon lac dapat diinduksi menggunakan kontrol negatif, dengan mengekspresikan gen
lacZ, lacY, dan lacA ketika terdapat laktosa. Jika tidak terdapat induser, maka repressor akan
mengikat ke dalam operator lac yang akan mencegah RNA polimerase untuk mengkatalisasi
transkripsi dari ketiga gen struktural tersebut. Kemudian, ketiga gen struktural tersebut disintesis
dalam keadaan tidak terinduksi sehingga berpengaruh pada rendahnya aktivitas enzim. Aktivitas
tersebut berperan penting dalam menginduksi operon lac karena penginduksi operon yaitu
alolaktosa berasal dari laktosa yang dikatalisis oleh reaksi ß-galaktosidase. Selanjutnya,
alolaktosa akan diikat oleh repressor sehingga repressor akan terlepas dari operator. Melalui cara
tersebut, maka alolaktosa akan menginduksi transkripsi ketiga gen struktural yaitu lacZ, lacY,
dan lacA.

Gambar 2. Dua Reaksi Fisiologis yang Dikatalisis oleh enzim ß-galaktosidase (Snustad, 2012).

Alel yang bertipe liar (Z+, Y+, dan A+) yang berasal dari ketiga gen struktural bersifat
dominan terhadap alel mutan (Z-, Y-, dan A-). Sifat dominasi tersebut dikarenakan alel tipe liar
menghasilkan enzim fungsional sedangkan alel mutan tidak menghasilkan enzim suatu enzim
atau enzim yang tidak aktif. Diploid parsial yang berasal dari genotip I+P+O+ Z+ Y+ A+/ I-P+O+ Z+
Y+ A+ (I+/I-) juga bisa diinduksi untuk sintesis tiga enzim melalui operon lac. Indusibilitas
genotip tersebut menunjukkan bahwa lac repressor akan mengontrol ekspresi gen struktural baik
pada cis maupun trans ke alel lacI+.
Mutasi yang terjadi pada gen I yang disebut I s, akan menyebabkan operon lac tidak dapat
diinduksi kembali. Pada strain yang membawa mutasi I s , gen struktural lac biasanya dapat
diinduksi dengan konsentrasi induser yang tinggi namun tidak dapat diinduksi dengan
konsentrasi induser yang normal. Ketika dipelajari secara in vitro, polipeptida dari I s mutan akan
membentuk tetramer yang mengikat DNA pada operator lac. Dapat diketahui bahwa mutasi Is
dapat mengubah situs pengikat penginduksi dari lac repressor. Mutasi dari promotor tidak akan
mengubah indusibilitas dari operon lac. Promotor lac terdiri dari dua komponen terpisah yaitu
tempat pengikatan RNA polimerase dan situs pengikatan untuk protein lain yang disebut protein
penggerak katabolit yang berfungsi untuk mencegah induksi operon lac oleh glukosa.

Represi Katabolit
Dengan adanya glukosa, maka dapat mencegah terjadinya induksi operon lac maupun
operon lainnya yang mengendalikan enzim pada proses katabolisme karbohidrat. Peristiwa ini
disebut sebagai represi katabolit. Represi katabolit dari operon lac ini dimediasi oleh protein
pengatur yaitu CAP dan molekul efektor kecil yang disebut AMP siklik (cAMP). Promotor lac
terdiri atas dua situs pengikat yang terpisah yaitu satu situs untuk RNA polimerase dan satu situs
untuk kompleks CAP/cAMP. Supaya operon dapat diinduksi secara normal, maka kompleks
CAP/cAMP harus berada tepat pada pengikatnya di promotor lac. Fungsi dari CAP yaitu sebagai
dimer sehingga ia multimerik dalam status fungsionalnya, sedangkan cAMP berfungsi sebagai
molekul efektor yang menentukan efek CAP pada transkripsi operon lac.

Gambar 3. Organisasi Wilayah Promotor Lac dan Komponen Promotor (Snustad, 2012).

Glukosa dengan konsentrasi yang tinggi akan mengakibatkan penurunan yang tajam pada
kosnsentrasi cAMP intraseluler. Glukosa tersebut akan mencegah aktivasi adenylcyclase yaitu
enzim yang mengkatalisis pembentukan cAMP dari ATP. Jika konsentrasi cAMP rendah, maka
CAP tidak dapat mengikat promotor operon lac. Hal ini juga menyebabkan RNA polimerase
tidak dapat mengikat secara efisien pada promotor lac karena tidak terdapat CAP/cAMP yang
terikat. CAP dan cAMP tersebut berperan dalam menjaga supaya operon arabinosa (ara) dan
galaktosa (gal) dari E.coli tidak dapat diinduksi dengan adanya glukosa.
Interaksi Protein DNA yang Mengontrol Transkripsi Operon Lac
Jika CAP/cAMP belum terikat, maka RNA polimerase tidak dapat mengikat secara
efisien ke dalam situs pengikatannya pada promotor lac. Ketika CAP/cAMP berikatan dengan
DNA, maka ia akan membengkokkan DNA pada saat DNA dibungkus di permukaan kompleks
CAP/cAMP. Pembengkokkan DNA tersebut akan membuat situs menjadi lebih terbuka untuk
RNA polimerase dan akan meningkatkan pengikatan serta transkripsi gen struktural.

Gambar 4. Interaksi CAP/cAMP dengan Situs Pengikatannya di Promotor Lac (Snustad, 2012).

Operon lac dikendalikan oleh 3 operator (O1,O2, dan O3). O1 merupakan operator primer
yang berada diantara promotor dan gen Z. O2 merupakan operator sekunder yang berada di hilir
dari O1 dalam gen Z, dan O3 juga termasuk dalam operator sekunder yang berada di hulu
promotor. Represi akan terjadi secara kuat jika terdapat O1 dan O2 atau O3. Bentuk aktif dari lac
repressor yaitu tetramer yang berisi 4 salinan produk dari gen lacI. Berdasarkan studi sinar-X,
menunjukkan bahwa setiap repressor tetramerik mengikat dua urutan operator secara bersamaan.
Hal ini mengakibatkan tetramer terdiri dari 2 dimer yang salah satu dimernya akan berikatan
dengan O1 dan dimer yang lainnya berikatan dengan O2 atau O3.

Pertanyaan :
1. Mengapa dengan adanya glukosa dapat mencegah terjadinya induksi pada operon lac?
(Siti Widyawati)
Jawab :
Dengan adanya glukosa, maka dapat mencegah terjadinya induksi operon lac maupun
operon lainnya yang mengendalikan enzim pada proses katabolisme karbohidrat.
 Peristiwa ini disebut sebagai represi katabolit. Represi katabolit dari operon lac ini
dimediasi oleh protein pengatur yaitu CAP dan molekul efektor kecil yang disebut AMP
siklik (cAMP). Glukosa dengan konsentrasi yang tinggi akan mengakibatkan penurunan
yang tajam pada kosnsentrasi cAMP intraseluler. Glukosa tersebut akan mencegah
aktivasi adenylcyclase yaitu enzim yang mengkatalisis pembentukan cAMP dari ATP.
Jika konsentrasi cAMP rendah, maka CAP tidak dapat mengikat promotor operon lac.
Hal ini juga menyebabkan RNA polimerase tidak dapat mengikat secara efisien pada
promotor lac karena tidak terdapat CAP/cAMP yang terikat. CAP dan cAMP tersebut
berperan dalam menjaga supaya operon arabinosa (ara) dan galaktosa (gal) dari E.coli
tidak dapat diinduksi dengan adanya glukosa.

Snustad, D. Peter dan Michael J. Simmons. 2012. Principles of genetics, sixth edition. United
States of America: John Wiley and Sons, Inc.